다양한 강성의 하이드로겔에서 배양된 신경능선세포의 형광 염색

초록

출처: Le, T. P., et al., 신경능선세포의 기계적 신호 연구를 위한 최적화된 O9-1/하이드로겔 시스템. J. V입니다. 유통기한 (2021)

이 비디오에서는 세포골격 조직을 시각화하고 분석하기 위해 다양한 강성의 하이드로겔에서 배양된 신경능선세포의 팔로이딘 염색을 시연하기 위해 형광 현미경을 사용하여 형광 염색을 수행하는 절차를 설명합니다.

프로토콜

1. 면역형광 염색을 통한 강성의 분자 분석

1. 핀셋을 사용하여 커버슬립을 새 플레이트로 운반하여 플레이트에 직접 성장한 세포의 잘못된 신호를 최소화합니다. 500μL의 멸균 PBS로 세포를 세 번 세척하여 죽은 세포와 남아 있는 배양 배지를 제거합니다.
2. 실온에서 10분 동안 방해받지 않고 500μL의 4% 파라포름알데히드(PFA)를 사용하여 세포를 고정합니다. 그런 다음 500μL의 PBS/well을 사용하여 각각 2분 동안 세포를 3회 재세척합니다.
   참고: 절차적 정지를 위해 4°C에서 보관하십시오.
3. 실온에서 15분 동안 500μL의 0.1% Triton X-100으로 세포를 처리합니다. 그런 다음 500μL의 PBS/웰로 세포를 세 번 세척합니다.
4. 실온에서 30분 동안 웰당 250μL의 10% 당나귀 혈청(PBS 및 0.1% Tween 20으로 희석)으로 세포를 차단합니다.
5. F-actin 염색에 사용되는 팔로이딘으로 세포를 실온에서 30분 동안 250μL의 10% 당나귀 혈청에 1:400 희석하여 배양합니다. 그런 다음 PBS로 각각 5분 동안 세포를 세 번 세척합니다.
   참고

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
2mm #1 코닝 0211 유리 커버슬립	켐글래스 생명과학	CLS-1763-012
25mm #1 코닝 0211 유리 커버슬립	켐글래스 생명과학	CLS-1763-025
4웰 세포 배양 플레이트	써모 사이언티픽	179830
4% 파라포름알데히드	시그마 알드리치	J61899-AP
아크릴아미드 40%	시그마 알드리치	A4058
알렉사 플루어 488 팔로이딘	써모 피셔	A12379
콜라겐 I 형 (100mg)	코닝	354236
다피(4',6-디아미디노-2-페닐인돌, 디하이드로클로라이드)	써모 피셔	D1306
당나귀 혈청	시그마 알드리치	D9663
멸균 1x PBS	하이클론	SH30256.02
형광 현미경	라이카