Weight Drop Traumatic Injury를 통해 마우스 모델에서 외상 후 발작을 유도하는 기술

초록

출처: Shandra, O. et al., Inducing post-traumatic epilepsy in a Mouse Model of Repetitive Diffuse Traumatic Brain Injury. J. Vis. 특급 (2020)

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 체중 감량 절차

1. 마우스를 유도 챔버에 놓습니다. 산소와 진공의 흐름을 1L/min으로 설정하고 이소플루란 가스 수준을 3%−5%로 설정합니다. 5분 동안 마우스를 마취합니다.
2. 인덕션 챔버에서 마우스를 제거하고 폼 패드 위에 놓습니다. 발가락 또는 꼬리 꼬집기에 대한 반응이 없는지 테스트합니다.
3. 진통제(0.1mg/kg 부프레노르핀)를 피하로 투여합니다. 뇌파검사(EEG) 수술이 같은 날 시행되는 경우, 부프레노르핀을 비스테로이드성 항염증제인 카프로펜(5mg/kg)과 병용하여 피하로 투여합니다.
4. 젖산나트륨 용액(동물 체중 1g당 3μL)을 마지막 충격 전후에 피하로 투여합니다. 젖산 나트륨 용액은 한 번의 주사로 빠른 투여를 위해 진통제와 혼합 할 수 있습니다 .
   메모: 젖산나트륨 용액에는 물에 염화나트륨, 염화칼륨, 염화칼슘 및 젖산나트륨의 혼합물이 포함되어 있습니다. 이 단계는 유체와 전해질을 대체하여 회복을 돕는 데 도움이 됩니다.
5. 마우스 머리를 웨이트 드롭 튜브(그림 1A) 아래에 놓고 납작한 스테인리스 스틸 디스크(직경 1.3cm, 두께 1mm, 무게 880mg)를 머리 중앙, 눈과 귀 라인 사이에 놓습니다.
   메모: 이 원반은 두개골 표면 전체에 충격을 분산시킨다(그림 1B).
6. 웨이트 드롭 튜브의 핀을 제거하여 100cm 높이에서 50g 웨이트 로드를 분리합니다. 대조군 마우스의 가짜 부상을 유도하려면 튜브에서 웨이트 로드를 제거하여 핀이 우발적으로 해제되고 무게가 떨어지는 것을 방지하십시오.
   메모: 동물의 머리는 막대가 디스크의 전체 표면에서 자유낙하할 수 있도록 평평하게 위치해야 합니다.
7. 의식을 잃은 동물을 등에 눕혀 회복을 위해 멸균 폴리라이닝 흡수성 수건으로 덮인 가열 패드 위에 놓습니다. 오른쪽 반사 회복 시간(즉, 마우스가 등에서 스스로 바로잡는 데 걸리는 시간)은 무의식 상태에서 보낸 시간에 대한 판독값으로 측정할 수 있습니다.

결과

그림 1: 반복적 미만성 외상성 뇌 손상(TBI)의 마우스 모델. (A) 체중 감소 장치. (a1) 웨이트 드롭 튜브. (a2) 100g 무게의 막대. (a3) 막대를 잡고 있는 핀. (a4) 높이를 변경하거나 웨이트 드롭 튜브에서 로드를 제거하는 경우 로드를 들어 올리는 끈. (a5)입니다. 체중 드롭 튜브 아래에 동물을 놓기 위한 폼 패드. (B) 체중 감량 절차. (b1) 스테인리스 스틸 디스크는 눈과 귀 라인 사이의 머리 중앙에 위치합니다. (b2

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
부프레노르핀	Par Pharmaceuticals, Cos. Inc., 미국 뉴욕주 스프링 밸리	60969
C57BL/6 마우스	할란/엔비고 연구소		수컷, 12-16주령
C57BL/6 마우스	잭슨 연구소		수컷, 12-16주
카프로펜	Zoetis Services LLC, 미국 뉴저지주 파시파니	26357	참고: 이 약물은 정위 전극 이식이 같은 날에 수행되는 경우에만 체중 감량 중에 추가됩니다
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