초기 단계의 추간판 질환을 시뮬레이션하기 위한 장기 배양 모델 생성

초록

출처: Saravi, B. et al., 초기 단계의 추간판 질환을 시뮬레이션하기 위한 전염증성, 퇴행성 장기 배양 모델. J. Vis. 특급 (2021).

이 비디오는 TNF-α를 사용하여 초기 단계 추간판(IVD) 질환에 대한 전염증 및 퇴행성 장기 배양 모델의 개발을 보여줍니다. TNF-α를 추간판에 주입하는 절차를 설명하고 TNF-α가 IVD의 염증 및 저하를 유도하는 메커니즘을 설명합니다.

프로토콜

동물 샘플과 관련된 모든 절차는 해당 동물 윤리 검토 위원회에서 검토되고 승인되었습니다.

1. 추간판(IVD) 배양 및 로딩

1. 추간판(IVD)을 IVD 챔버로 옮기고 IVD 배양 배지(Dulbecco's Modified Eagle Medium, 생리학적 그룹의 경우 4.5g/L 고포도당 DMEM, 병리학적 그룹의 경우 2g/L 저포도당 DMEM) + 1% 페니실린/스트렙토마이신 + 2% 태아 송아지 혈청 + 1% ITS(5μg/mL 인슐린 포함, 6 μg/mL 트랜스페린 및 5 ng/mL 셀레니어산) + 50 μg/mL 아스코르브산염-2-인산염 + 1% 비필수 아미노산 + 일차 세포용 50 μg/mL 항균제)를 넣고 37 °C, 85% 습도 및 5% CO₂의 인큐베이터에 넣습니다.
2. 실험 그룹에 따라 생물 반응기 시스템 내에서 4일 동안 디스크를 배양합니다. 병리학적 그룹에서 2시간/일 동안 0.32-0.5MPa, 5Hz에서 퇴행성 로딩 조건을 유지합니다. 생리적 대조군에서는 0.02-0.2 MPa, 0.2 Hz의 로딩 프로토콜을 2 시간/일 동안 사용합니다.
   참고: 로딩 절차 중에 5mL의 IVD 배지가 들....

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
아스코르브산염-2-인산염	시그마-알드리치, 세인트루이스, 미국	A8960
TNF-알파, 재조합 인간 단백질	R&D 시스템, 미국 미네소타	210-TA-005
소 IL-8 DIY ELISA	Kingfisher Biotech, 미국 세인트폴	DIY1028B-003
코닝 ITS 프리믹스	Corning Inc., 미국 뉴욕	354350
DMEM 고포도당	Gibco by life technologies, 미국 칼즈배드	10741574
DMEM 저포도당	Gibco by life technologies, 미국 칼즈배드	11564446
분자생물학용 에탄올	시그마-알드리치, 세인트루이스, 미국	09-0851
소 태아 혈청(FBS)	Gibco by life technologies, 미국 칼즈배드	A4766801
비필수 아미노산 용액	Gibco by life technologies, 미국 칼즈배드	11140050
페니실린/스트렙토마이신(P/S)	gibco by Life Technologies, 칼즈배드, 미국	11548876
인산염 완충액, 정제	시그마-알드리치, 세인트루이스, 미국	P4417
프리모신	InvivoGen, 미국 산디에고	개미-오후-05