Obtaining a Single-Cell Suspension from Frozen Rat Brain Tissue

초록

출처: Rubio, F. J., et. al. Fluorescence Activated Cell Sorting (FACS) 및 Fresh and Frozen Rat Brain Tissue에서 Fos 발현 뉴런의 유전자 발현 분석. J. Vis. 특급 (2016)

이 비디오는 효소 분해와 기계적 분쇄를 사용하여 얼어붙은 쥐의 뇌 조직을 단세포 현탁액으로 해리하는 방법을 보여줍니다. 준비된 세포는 유세포 분석 또는 유전자 발현 분석과 같은 다운스트림 응용 분야를 위해 에탄올로 고정되고 투과화됩니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토에 의해 검토되었습니다.

1. 조직 채취 전 준비

1. 원심분리기를 4 ^oC.
로 설정합니다.
2. 각 샘플에 대해 직경이 약 1.3, 0.8 및 0.4mm씩 감소하는 3개의 유리 파스퇴르 피펫 세트를 화염 연마합니다.
3. 1ml의 차가운 버퍼 A가 들어 있는 라벨이 붙은 1.7ml 튜브를 준비하고 튜브를 얼음 위에 보관합니다.
4. 해부를 수행할 뇌 절단 매트릭스, 주걱 및 유리판(또는 거꾸로 된 유리 페트리 접시)이 들어 있는 얼음 트레이를 준비합니다. 유리판에서 두 개 이상의 면도날을 미리 식히고 티슈 페이퍼를 사용하여 티슈에 닿는 모든 기구를 건조시킵니다.
5. 조직을 채취하기 전에 효소 용액을 실온(RT)에서 30분 동안 해동합니다.

2. 조직 채취 및 해부

1. 조직 채취 90분 전에 행동 또는 약물 치료를 시작하십시오.
   참고: 여기에 표시된 결과를 위해, 새로운 환경(테스트 ....

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
뇌 매트릭스	셀포인트 사이언티픽	69-2160-1	관상 뇌 절편을 얻으려면
동면 : 낮은 형광	브레인 비트	하프	프로토콜의 버퍼 A'는 해리에서 고정 단계까지 조직과 세포를 처리하는 데 사용됩니다
아카타제	밀리포어	SCR005	프로토콜의 '효소 용액'은 trituration 전에 조직의 효소 분해에 사용됩니다
세포 스트레이너, 40μm	BD 팔콘	352340	세포 현탁액을 필터링하려면
셀 스트레이너, 100μm	BD 팔콘	352360	세포 현탁액을 필터링하려면
Falcon 5ml 라운드 바닥 폴리스티렌 시험관(셀 스트레이너 스냅 캡 포함)	BD 바이오사이언스	352235	유세포 분석기를 통과하기 전에 세포 현탁액을 필터링하려면
파스퇴르 피펫, 유리	NIH 공급	6640-00-782-6008	조직 파괴를 하려면