Experimental Glaucoma Induction via Iridocorneal Angle Obstruction In a Mouse Model

초록

출처: Bunker, S., et al. 자기 미세구의 안구 주입에 의해 유발된 실험적 녹내장. J. Vis. 특급 (2015)

이 비디오에서 마취된 쥐는 홍채각막각을 차단하기 위해 자기장 아래 전방에 자기 구슬을 주입하는 안구 시술을 받습니다. 이 막힘은 섬유주 그물망을 방해하여 수액 배출을 막고 안압을 증가시켜 망막 신경절 세포와 시신경을 손상시킵니다. 이것은 녹내장과 같은 상태로 발전합니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 안구 고혈압 유도

1. 갈색 노르웨이 쥐의 전방(anterior chamber)에 상자성 미세구(paramagnetic microspheres)를 일방적으로 주입하여 안압(IOP)을 상승시켜 실험적 녹내장을 유도합니다. 다른 착색된 쥐가 적합할 수 있지만 사용자가 먼저 검증해야 합니다.
2. 250-300g의 암컷 전 사육자 Brown Norway 쥐를 지속적으로 저조도 환경(40-60lux)에서 사육하여 안압의 주간 변동을 최소화하고 음식과 물에 접근할 수 있습니다.
3. 쥐의 눈9에 사용하기 위해 보정된 리바운드 안압계를 사용하여 마취 및 비드 주입 전에 깨어 있는 동물8에서 기준선 IOP 측정을 수행합니다. IOP는 5회 판독값의 평균으로 간주됩니다.
4. 복강내로 전달된 37.5mg/kg 케타민과 0.25mg/kg 메데토미딘 염산염으로 쥐를 마취합니다. 포비돈-요오드 적용(1.5단계 참조) 및 비드 주입(1.8단계 참조) 전에 동물의 뒷발 반사를 테스트하여 마취 깊이를 확인합니다. 진통제를 위해 0.5% 프로파라카인 염산염을 투여합니다.
   메모: 어떤 단계에서도 동공을 확장시키지 마십시오. 이렇게 하면 구슬이 홍채각막 각도에 더 잘 정착하고 수정체에 결합하는 것을 방지할 수 있습니다. 수술하지 않은 반대쪽 눈의 각막 건조를 방지하기 위해 안구 연고를 바르십시오.
5. 주사 5분 전에 물에 5% 포비돈 요오드로 수술 눈을 씻으십시오.
6. 5분 후, 멸균 거즈를 사용하여 포비돈 요오드를 흡수하고 0.9% 멸균 식염수로 눈을 씻어냅니다. 마취 중에는 멸균 식염수를 정기적으로 바르고 눈을 촉촉하게 유지하십시오.
7. 눈 주위에 토로이달 자석을 놓습니다.
8. 33G의 경사진 바늘을 사용하여 Hank's Balanced Salt Solution(HBSS)에서 30mg/ml의 감마선 조사 멸균된 8μm 자기 마이크로스피어를 포함하는 용액 25μl를 전방으로 주입합니다.
   1. 비드를 준비하려면 다시 현탁하여 세척한 다음 1ml HBSS로 10,000 x g에서 5분 동안 3회 원심분리한 후 최종 30mg/ml 용액을 만듭니다. 전체적으로 멸균 상태를 유지하십시오.
   2. 주사의 경우 홍채 외상의 위험을 최소화하기 위해 홍채에 바늘을 삽입하지 않도록 주의하십시오. 이것은 바늘을 각막 표면에 접하는 방향으로 가능한 한 홍채와 평행하게 배치함으로써 예방할 수 있습니다. 이는 또한 주입 부위에서 비드 손실을 최소화하는 데 도움이 됩니다.
      메모: 홍채각막 각도 주위의 균일한 분포를 보장하기 위해 빠른 속도로 비드를 주입하며, 이는 안압을 높이는 데 중요합니다. 또한 구슬, 바늘 및 자성 고리는 구슬이 클러스터를 형성하지 않도록 별도로 보관하여 주사기에 장전하고 주입하기 어렵고 바늘이 자화되지 않도록 합니다.
9. 주사 후 1분 동안 바늘을 제자리에 두어 비드가 홍채각막 각도에 정착하여 섬유주 그물망에서 수성 배출을 방해하도록 합니다. 비드가 초기에 가라앉은 후 수용액의 일시적인 누출을 허용하여 IOP의 일시적인 증가를 최소화하기 위해 바늘의 각도를 약간 조정합니다. 수술이 끝나면 첫 번째 인산염 완충 식염수(PBS)로 바늘을 씻어낸 다음 70% 에탄올, 증류수로 바늘을 씻어내어 별도의 절차에서 바늘을 계속 사용할 수 있도록 합니다. 또는 올바른 게이지와 주사기 조합을 사용할 수 있는 경우 일회용 바늘을 사용할 수 있습니다. 선택 사항: 바늘은 사용 연장을 위해 베벨러를 사용하여 날카롭게 할 수 있습니다.
10. 이 단계에서 필요한 경우 자석을 제거하고 이를 사용하여 불완전한 적용 영역으로 구슬을 끌어당깁니다.
11. 주사 후 10분 동안 자석을 눈 주위에 그대로 두어 구슬이 홍채각막 각도에 잘 정착하도록 합니다.
12. 0.25 mg/kg 아티페메졸 염산염을 사용한 역마취.
13. 클로람페니콜 또는 기타 항생제 연고(예: 겐타마이신 또는 테라마이신)를 국소적으로 투여하여 감염을 예방하고 진통제를 위해 0.5% 프로파라카인 염산염을 투여합니다. 동물이 움직임을 회복할 때까지 온열 매트에서 회복하도록 놔둔 다음 따뜻한 상자에 옮겨 넣고 회복이 완료될 때까지 보충제 또는 촉촉한 규칙적인 식단과 같은 추가 영양을 공급합니다. 수술 후 24시간 이내에 통증 징후를 보이는 동물에게 전신 또는 국소 진통제를 투여해야 합니다. 치료에도 불구하고 이러한 증상이 지속되면 동물을 인도적으로 도태시켜야 합니다.
14. 반대쪽 눈을 작동하지 않는 컨트롤로 사용합니다.
15. 비드 투여 후 2-3일마다, 그리고 그 이후에는 쥐의 눈에 사용하기 위해 보정된 반동 안압계를 사용하여 2-3일마다 IOP 측정을 수행합니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
250-300g 암컷 갈색 노르웨이 전 사육자 쥐	영국 할란	203
Tonolab 리바운드 안압계	티올라트	TV02
케타셋(케타민)	포트 닷지 동물 체력	BN1000118	37.5mg/kg
도미토르 (메데토미딘 염산염)	오리온 제약	140-999	0.25mg/kg
포비돈 요오드	이콜랩	BN4369LE10	5%
Minim의 식염수	바우쉬와 롬	PL00033/5017
토로이달 자석	슈퍼마그네틱	R-10-07-03-N
자기 마이크로스피어	뱅스 연구소	UMC4N/9692
HBSS	인비트로젠	14025
33게이지 베벨 바늘	해밀턴	7747-01	커스텀 니들
루어 팁 주사기	해밀턴	80601
안티세단 (아티페메졸 염산염)	오리온 제약	141-003	0.25mg/kg
클로람페니콜 연고	메디콤	18956-0005