마우스 모델에서 반복성 뇌진탕성 두부 부상 모델링

초록

출처: Yang, Z., et.al. 생쥐의 반복적 뇌진탕 머리 부상 모델. J. Vis. 특급 (2016).

이 비디오는 전자기 충격 장치를 사용하여 마우스에서 반복적인 뇌진탕 머리 부상의 유도를 보여줍니다. 이 절차에는 마취된 마우스의 두개골에 있는 전두엽 봉합사와 양털 봉합사 사이에 임팩트 팁을 배치하고 프로브 팁을 사용하여 충격 깊이를 정확하게 설정하는 것이 포함됩니다. 충격은 경미한 외상성 뇌 손상을 시뮬레이션하기 위해 통제된 속도와 깊이로 전달되며, 그 후 회복 기간이 이어지며 지정된 간격으로 손상이 반복됩니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 동물 관리

1. 3-4개월 된 수컷 C57BL/6J 마우스를 사용합니다. 침구, 둥지 재료, 음식 및 물 ad libitum을 제공하십시오. 20 - 22 °C로 제어되는 주변 온도에서 일정한 12시간 조명/12시간 어두운 주기로 마우스를 유지합니다.

2. 임팩션 전 준비

1. 전자기 입체 충격 장치에 맞춤형 실리콘 고무 코팅된 금속 팁을 부착합니다. 팁의 평평한 바닥이 프로브 팁의 표면과 평행한지 확인하십시오(그림 1A).
2. 4% 이소플루란으로 마우스를 마취한 후 2.5% 이소플루란으로 유지 마취를 합니다. 유량계를 통해 마취를 확인하십시오. 동물이 페달 철수 반사의 상실을 보여줌으로써 외과적 마취 수준에 도달할 때까지 마취 수준을 모니터링합니다.
3. 마우스를 가열 패드 위에 엎드린 자세로 놓습니다. 깔때기 모양의 콧방울을 사용하여 마우스를 마취 상태로 유지합니다. 트리머를 사용하여 머리를 완전히 면도하십시오. 마취 상태에서 건조를 방지하기 위해 마우스의 눈에 바셀린 안연 연고를 사용하십시오.

3. 임팩트 파라미터 설정

참고: 임팩트 시스템에는 임팩트 매개변수를 설정하는 컨트롤 박스, 임팩션을 수행하는 액추에이터, 3개의 이동 축이 있는 디지털 정위 프레임이 포함됩니다.

1. 컨트롤 박스에서 충격 장치의 속도를 4m/sec로 사전 설정하고 체류 시간을 240msec로 사전 설정합니다.

4. 임팩트 센터 위치

1. 동물의 몸 아래에 부드러운 발열 패드를 놓아 체온을 39°C 근처로 유지합니다. 끝이 뭉툭한 이어바가 있는 엎드린 자세로 정위 프레임에 마우스를 장착합니다.
2. Z-드라이버를 움직여 임팩트 팁을 마우스의 머리 가까이로 내립니다. X-및 Y-드라이버를 시상 봉합사 위의 목표 좌표로 중간을 이동하여 플랫 임팩트 팁(직경 9mm)을 조정합니다.
3. 임팩트 팁의 한쪽 모서리가 두 귀 사이에 그려진 가상의 수평선(그림; 1C)과 수직으로 평행한지 확인합니다. 충격의 중심은 전두엽 봉합사와 양측 봉합사 사이의 중간에 있는 중앙 시상 봉합사에 해당합니다(귀 사이 9mm에서 귀 사이 0mm, 측면 4.5mm).

5. 충격 깊이 설정

1. 충격 깊이를 올바르게 설정하려면 추가 프로브 팁을 사용하여 절연 실리콘 고무 코팅된 충격 팁을 교체하십시오.
2. 팁을 전환한 후 임팩트 중심이 이동하지 않도록 하려면 팁을 전환하기 전에 디지털 입체 제어 패널의 X 및 Y 채널을 0으로 설정하십시오.
3. X-및 Y-드라이브를 수동으로 이동하여 프로브 팁을 충격 영역의 중앙으로 이동합니다.
4. 접촉 센서를 마우스 꼬리에 끼웁니다.
5. 프로브 팁이 충격 부위의 표면에 닿을 때까지 임팩터(Z 드라이브)를 아래로 움직입니다.
6. Stereotaxic Control Panel의 Z 채널을 0으로 설정합니다.
7. X- 및 Y-드라이버가 0(임팩트 팁이 이전에 위치했던 위치)이 될 때까지 X-및 Y-드라이버(디지털 스테레오탁틱 제어판의 제로 버튼이 아님)를 수동으로 조정하여 임팩트 팁을 임팩트 영역으로 다시 이동합니다.
8. 컨트롤 박스의 수축 스위치를 움직여 액추에이터를 수축시킵니다. 임팩터를 수동으로 4mm 아래로(Z 드라이버) 이동합니다.

6. 충격

1. 컨트롤 박스의 임팩트 스위치를 클릭하여 임팩트를 트리거하고 4mm의 변형 깊이를 얻습니다.

7. 충돌 후

1. 타이머를 사용하여 충격부터 마우스의 첫 숨결까지의 시간을 측정합니다.
2. 기구에서 동물을 꺼내 따뜻한 패드에 올려 체온을 유지하십시오. 흉골 누운 자세를 유지할 수 있을 만큼 충분한 의식을 회복할 때까지 동물을 방치하지 마십시오.
3. 동물을 깨끗한 우리로 다시 보내기 전에 회복을 기다립니다. 완전히 회복될 때까지 동물을 다른 동물과 함께 돌려보내지 마십시오.
4. 매일 쥐를 관찰하고 무게를 잰다. 쥐가 통증의 징후를 보이면 12 - 24시간마다 1 - 2 mg/kg의 Meloxicam을 복강내 주사합니다.

8. 반복적인 충돌

1. 초기 부상 후 4일, 7일, 10일(충돌 후 72시간 간격)에 마우스에게 추가 부상을 입힙니다.

결과

그림 1. 반복성 뇌진탕성 두부 손상의 마우스 모델. (A) 프로브 팁이 있는 직경 9mm 두께의 맞춤형 1mm 두께의 실리콘 고무 코팅 팁. (B) 마우스는 본체 아래에 부드러운 발열 패드가 있는 엎드린 자세의 정위 프레임에 장착됩니다. (C) 임팩트 센터 포지셔닝. 임팩트 팁의 가장자리는 두 귀 사이에 그려진 가상의 수평선과 수직으로 평행합니다. 충격 중심은 전두엽 봉합사와 양측 봉합사 사이의 중간에 해당합니다(귀 사이 9mm에서 귀 사이 0mm, 측면 4.5mm). (D) 무호흡증은 일시적인 호흡 중단의 짧은 기간으로 정의됩니다. 평균과 SD가 아래쪽 패널에 표시됩니다. ...

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Anesthesia machine	Eagle Eye Anesthesia, Inc	Model 150	anesthesia
Electromagnetic Impactor	LeicaBiosystems	Impact One Stereotaxic Impactor	perform impaction
Digital Stereotaxic instrument	LeicaBiosystems	39462501	마운트 마우스 및 포지셔닝 팁
실리콘 고무 코팅 금속 tip	Precision Tool & Engineering, Gainesvill FL	custom-made	임팩트 팁
리튬 이온 All-in-One Trimmer	WAHL Home Products	9854-600	shave mouse hair
종이 클립	custom-made		probe tip
Cotton tipped applicators	MEDLINE	MDS202055	럽

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