Induction of Neuropathic Pain in a Rat Model by Constriction of the Infraorbital Nerve

초록

출처: Deseure, K., et al. Chronic Constriction Injury of the Rat's Infraorbital Nerve (IoN-CCI) to study Trigeminal Neuropathic Pain. J. Vis. 특급 (2015).

이 비디오는 쥐 모델에서 안와하신경을 수축시켜 신경병성 통증을 유발하는 방법을 보여줍니다. 안와하신경을 노출시키고 결찰자를 묶어 이를 수축시킨 후, 손상 부위의 면역 반응은 통증 신호를 뇌에 전달하는 주변 뉴런의 흥분성을 증가시킵니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 피험자

1. 수컷 Sprague-Dawley 쥐(도착 시 250-300g)를 사용합니다.
2. 습도가 40-60%이고 실내 온도(RT)가 21 ± 1°C인 군체실의 단단한 바닥 우리에 있는 쥐를 기르십시오.
3. 리비툼에서 물과 음식을 이용할 수 있도록 합니다.
4. 쥐를 반전된 12:12시간 어둡고 밝은 주기(20시간에 조명 켜짐) 아래에 두십시오.

2. 수술

1. }} 쥐 한 마리당 약 6cm 길이의 크롬 장 결찰자(5-0) 2개를 준비하여 건조하거나 뻣뻣하고 부서지기 쉬운 것을 방지하기 위해 멸균 식염수에 넣습니다.
2. 펜토바르비탈(60mg/kg, 복강내[i.p.])로 동물을 마취하고 아트로핀(0.1mg/kg, i.p.)으로 치료합니다. 한쪽 다리를 뻗고 손톱으로 발가락 사이의 피부줄을 꼬집어 적절한 압력이 가해지는지 확인하여 마취 수준을 모니터링합니다. 동물이 팔다리를 구부리지 않도록 하십시오. 필요한 경우 추가 펜토바르비탈을 투여합니다.
3. 쥐의 머리를 면도하여 눈 중심에서 앞뒤로 동일한 거리로 약 25mm의 정중선 두피 절개가 이루어질 수 있도록 합니다.
4. 쥐의 머리를 입체 프레임에 고정하거나 그렇지 않으면 쥐의 머리를 고정하십시오. 체온을 유지하기 위해 가열된 패드에 쥐를 올려 놓습니다.
5. 건조로 인한 손상을 방지하기 위해 양쪽 눈에 안과 연고를 바르십시오.
6. 면도한 머리 부위를 알코올로 문지른 다음 베타딘을 바르십시오.
7. 두피 정중선을 절개하여 두개골과 코뼈를 노출시킵니다.
8. 작동 현미경을 사용하여 2.9-2.16단계를 수행합니다. 위치
9. 상악골, 전두골, 눈물샘 뼈 및 접합골로 형성된 안와의 가장자리를 면봉과 한 쌍의 Dumont 집게를 사용하여 자유롭게 해부합니다. 면봉을 사용하여 출혈 가능성으로 인한 피를 흡수하십시오.
10. 안와하신경(IoN)에 접근하려면 IoN보다 상위를 가로지르는 사골 신경이 과도하게 늘어나지 않도록 주의하면서 정밀 면봉으로 안와 내용물을 부드럽게 편향시킵니다. 퍼지는 동작을 사용하여 정밀 면봉과 한 쌍의 Dumont 집게를 사용하여 주변 결합 조직에서 IoN을 해부합니다. 면봉을 사용하여 출혈 가능성으로 인한 피를 흡수하십시오.
11. 결찰술을 수행하려면 chromic gut 한 조각의 한쪽 끝을 전두골을 따라 아래쪽으로 밀어 IoN의 내측에서 IoN과 평행하게 몇 밀리미터 전진시킵니다. 합자는 이제 IoN과 전두골 사이에 고정됩니다.
12. 45도 각도의 Dumont 집게의 끝을 IoN 아래로 밀어 합자에 가깝게 놓습니다. IoN을 측면으로 부드럽게 집어넣어 집게의 합자와 끝을 드러냅니다. 집게로 합자를 잡고 IoN 아래에서 집게를 측면으로 빼냅니다.
13. 합자의 양쪽 끝이 IoN에서 다소 등거리에 있을 때까지 안와강에서 합자를 당겨 빼냅니다.
14. 합자의 양쪽 끝에서 "슬립 매듭"을 만들어 수축 정도를 완벽하게 제어하고 매듭을 IoN에 대해 밀어 넣습니다. 매듭을 더 밀어 IoN을 수축시켜 신경의 직경이 눈에 띄게 줄어들도록 합니다. 수축의 양이 일정하게 유지되도록 슬립 매듭 위에 정상적인 매듭을 만듭니다(예: 슬릿 매듭이 미끄러지는 것을 방지하기 위해 .,).
15. 매듭에서 약 2mm의 자유 끝을 남기도록 합자를 자릅니다.
16. 동일한 절차(2.11-2.15단계)를 반복하여 첫 번째 결찰에서 2mm 떨어진 곳에 두 번째 결찰을 만듭니다.
17. 가짜 수술의 경우 2.2-2.10단계를 수행합니다.
18. 폴리에스터 봉합사(4-0)를 사용하여 두피 절개 부위를 봉합하고 가열된 패드에서 쥐가 회복할 수 있도록 합니다. 흉골 누운 상태를 유지할 수 있을 만큼 충분한 의식을 회복할 때까지 동물을 방치하지 말고 완전히 회복될 때까지 동물을 다른 동물과 함께 돌려보내지 마십시오.
19. 신경병성 통증의 발병에 대한 선제적 진통제 효과를 피하려면 수술 후 통증에 대한 진통제를 투여하지 마십시오.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록 이름 회사 카탈로그 번호 댓글 크롬 catgutDynekCG504 Nembutal (pentobarbital)Pharmacy 아트로핀약국 작은 동물을 위한 가위 - Favorita IIAesculapGT104 입체기구스톨팅51600 안과 연고(Liposic)약국 동종 모니터 시스템Harvard ApparatusPY8 50-7221-F Cotton ApplicatorPharmacy Precision cotton swabQosina10225 Operation microscopeKapsSOM 62 Dumont #5 겸자Fine Science Tools11251-10 Dumont 집게 - 미세 무딘 팁 (#5/45)Fine Science Tools11253-25 가위 - 뭉툭한 팁Fine Science Tools14574-09 폴리에스터 봉합사 - Mersilene (4-0)EthiconR871H