경골 신경종 전위의 쥐 모델 생성

초록

출처: Brakkee, E. M., et al. Surgery and Behavioral Testing in the Tibial Neuroma Transposition Model in Rats. J. Vis. 특급 (2023).

이 비디오는 쥐 경골 신경종 전위(TNT) 모델을 생성하는 절차를 보여줍니다. 마취된 쥐의 뒷다리에 있는 경골 신경을 노출시킨 후 신경을 절제합니다. 다음으로, 피하 터널을 만들고 절단된 신경을 터널에 꿰매어 제자리에 봉합합니다. 재신경 형성을 위한 표적이 없는 경우, 절단된 신경에서 무질서하게 형성된 축삭 파생물이 신경종을 형성하며, 이는 통각(유해) 수용기를 자극하여 신경병성 통증을 유발합니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 마취 및 제제

참고: 이 연구는 생후 12주 된 15마리의 수컷 Sprague Dawley 쥐를 대상으로 수행되었습니다.

1. 5% 이소플루란으로 유도하여 동물을 마취하고 2%-3% 이소플루란으로 마취를 유지합니다.
   참고: 2% 이소플루란으로 유지하면 일반적으로 기관 삽관이나 기계 환기 없이 충분한 마취와 자발적 호흡을 할 수 있습니다.
2. 핀셋으로 발을 꼬집어 동물의 반사 신경을 확인합니다. 계속하기 전에 동물이 반응이 없는지 확인하십시오. 전기면도기로 무릎부터 발목까지 수술 부위를 면도하고 안과 연고를 눈에 바르면 건조함을 방지할 수 있습니다. 진통제 카프로펜 0.5mg/kg을 복부에 피하주사합니다.
3. 마취된 쥐를 등을 대고 머리를 왼쪽이나 오른쪽으로 향하게 하고 수술할 다리를 외과 의사 근처에 눕힙니다. 내측 추골(medial malleolus)이 위를 향하도록 뒷다리 아래쪽을 외회전합니다. 쥐를 6배 배율로 실체 수술용 현미경 아래에 놓습니다.
4. 면도한 부위를 요오드 성분의 스크럽을 세 번갈아 가며 사용한 후 알코올을 바르며 소독합니다. 다리 위에 수술 구멍이 있는 멸균 시트를 놓아 수술 부위만 보이도록 합니다. 수술 중에는 이러한 멸균 상태를 유지하십시오.

2. 수술

1. 수술 영역을 수평으로 유지하기 위해 발목 아래에 작은 면봉을 놓습니다. 무릎을 찾아 종아리 중간에서 발목까지 뒷발의 내측을 메스를 사용하여 1-2cm의 세로 절개를 부드럽게 만듭니다. 필요한 경우 근육층이 보일 때까지 마이크로 가위로 피부와 피하를 더 엽니다.
2. 표재성 신경혈관 다발은 두세 개의 흰색과 더 두꺼운 보라색/빨간색 선으로 식별되며, 때로는 작은 가지가 있어 근육층 위로 자유롭게 이동할 수 있습니다. 전기소작기(재료 표 참조)를 사용하여 수술 부위의 활성 출혈 또는 진물을 응고시킵니다. 신경혈관 다발이 손상되지 않도록 주의하십시오.
3. 2.2의 표재성 신경혈관 다발의 바로 뒤에 있는 비복근 사이의 근막을 열기 위해 무뚝뚝하게 절개합니다. 근육의 근막 사이에는 경골 신경이 있습니다. 경골 신경은 신경혈관 다발에 있는 표재성 신경의 약 3배 크기입니다. 경골 뼈를 추가 랜드마크로 사용합니다(경골 신경은 경골 바로 뒤에 있습니다).
4. 경골 신경과 그 분기점을 확인합니다.
   참고: 분기점은 일반적으로 신경 위로 세로로 더 가벼운 선으로 볼 수 있습니다.
5. 주변 혈관 다발에서 경골 신경을 조심스럽게 절개합니다. 경골 신경을 무뚝뚝하게 움직여 경골 신경을 움직이면서 약간 늘어나는 노출된 조직을 잘라내어 절개를 수행합니다.
   참고: 절제 후 경골 신경이 교차 정맥에 부착되어 있으면 이 정맥이 응고되어 경골 신경 전체가 노출될 수 있습니다. 경골 다발 자체가 응고되지 않도록 주의하십시오.
6. 경골 신경이 교차하는 근육층 아래로 사라질 때까지 경골 신경을 근방으로 노출시킵니다. 이 시점에서 경골 신경은 무릎 쪽의 뒷발로 더 깊이 파고드는 것 같습니다. 경골 신경을 원위부에서 발목까지 노출시킵니다.
   참고: 경골 신경이 더 원위부로 노출되면 교차하는 콜라겐 섬유(즉, 신경 섬유의 방향에 수직인 섬유)의 양이 증가합니다. 이러한 콜라겐 섬유는 경골 신경을 전치할 수 있는 충분한 길이를 확보하기 위해 절단해야 합니다.
   1. 전체 경골 신경이 노출되면 신경의 탈수를 방지하기 위해 근육층을 다시 놓습니다. 신경이 탈수되고(즉, 신경이 더 뻣뻣해지고, 무뎌지고, 주름이 생기고) 근육층으로 덮는 것만으로는 충분하지 않다면, 식염수를 한 방울 떨어뜨려 수분을 보충한다.
7. 뭉툭한 미세수술 도구, 가급적이면 마이크로 바늘 홀더를 사용하여 피하 근육층에서 경골 전막 피부를 절개하여 피하 터널을 만듭니다. 이렇게 하려면 피부를 위로 잡고 뭉툭한 끝을 피부와 평행하게 조직 안으로 밀어 넣는다. 터널의 끝이 경골 앞쪽 또는 더 옆쪽에 위치하여 신경종을 검사하기 위한 영역에 쉽게 접근할 수 있도록 하십시오.
8. 이소플루란을 5%로 증가시킵니다. 경골 신경으로 돌아가서 노출시킵니다(즉, 2.6단계에서 설명한 위치로 돌아갑니다). 경골 신경(즉, 양쪽 발바닥 가지)을 발목 근처의 가장 원위 수준에서 자릅니다. 이소플루란을 정상 수준인 2%-3%로 낮춥니다.
9. 현미경 배율을 10배 또는 16배로 변경합니다. 2.8단계에서 만든 절단부에 근접한 경골 신경의 상피신경을 확인하거나, 경골 신경의 근위부 분기점이 더 가까운 경우 2.8단계에서 절단부에 근접한 내측 및 외측 발바닥 가지의 상근신경을 확인합니다.
   참고: 상영관은 그 안의 신경 섬유에 비해 더 하얗고 단단하며, 신경 섬유는 더 노랗고 부드럽습니다.
10. 조심스럽게 8-0 나일론 봉합사(재료 표 참조)는 핀셋으로 상피신경을 조심스럽게 잡고 신경과 상피 사이에 바늘을 약 0.5mm 정도 물면서 근위 신경 말단의 상피신경을 통해 만듭니다. 봉합사를 당겨 2.7단계에서 만든 피하 터널 끝에 피하 바늘로 씹습니다. 매듭을 만들면 신경이 측면으로 피하 터널로 옮겨집니다.
    참고: 두 발바닥 가지가 공통 상영관을 공유하는 경우 하나의 봉합사로 충분합니다. 두 발바닥 가지에 고유한 상피신경이 있는 경우 각 상층근은 개별적으로 고정되어야 합니다. 피부를 통해 봉합사를 놓지 마십시오. 피하로만 고정하십시오.
11. 피부를 관통하지 않고 고정된 신경 말단과 같은 높이의 어두운 색(바람직하게는 파란색 또는 검은색 4-0 봉합사)의 두꺼운 봉합사를 놓습니다. 봉합사가 피부 외부에서 보이는지 확인하십시오. 발과 근육을 움직인 후 신경이 제자리에 고정되어 있는지 확인하십시오. 봉합사 끝을 8-0보다 4-0에서 약간 더 긴 봉합 끝으로 잘라냅니다. 봉합 사.
12. 현미경의 배율을 다시 6x로 변경합니다. 8-0을 사용하여 표피내 봉합사로 피부를 닫습니다. 봉합하고 면봉을 사용하여 0.9% NaCl로 피부를 부드럽게 닦습니다.

3. 수술 후 치료

1. 쥐를 깨끗한 케이지에 넣고 편안한 자세로 종이 타월 아래에 놓습니다. 방이 차가우면 케이지의 일부 아래에 열 패드를 놓습니다(동물이 필요할 때 열을 피할 수 있어야 하므로 케이지의 일부 아래에만 해당). 음식과 물에 쉽게 접근할 수 있도록 합니다.
2. 수술 후 쥐가 흉골 누운 상태를 유지할 수 있을 만큼 충분한 의식을 회복할 때까지 방치하지 마십시오. 쥐는 수술 후 마취에서 완전히 회복되면 다른 동물과 함께 돌아갈 수 있습니다. 이것은 일반적으로 1시간 후와 쥐가 정상적인 보행 패턴과 행동을 보일 때입니다.
3. 수술 후 24시간 및 48시간에 0.5mg/kg의 카프로펜을 피하(복부)에 투여하여 수술 후 통증을 치료합니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Carprofen	Local Veterinary Pharmacy	n/a	지역 수의학 약국은 카프로펜 희석
면봉	Nobamed	974255
Electrocautery	Fine Science Tools	18010-00
에탄올 70%	Interchema BV	400406
Ethilon 4.0	Johnson & Johnson	1854G	중요: 색상은 파란색 또는 검은색
Ethilon 8.0	Johnson & Johnson	BV130-5	<
Dechra Veterinary Products	B506
메쉬 하단 케이지	StoeltingCo	57816 및 57824
마이크로 집게	Fine Science Tools	11251-35
마이크로 바늘 홀더	Fine Science Tools	12076-12
마이크로 가위	Fine Science Tools	15019-10
마이크로 핀셋	Fine Science Tools	11254-20
NaCl 0.9%	Trademed	H7 1000-FRE
바늘 홀더	Fine Science Tools	12004-16
안과 연고	Local Veterinary 약국	n/a	지역 수의학 약국에서 안과 연고
Scalpel	Fine Science Tools	10003-12
scissors	Fine Science Tools	14001-12
Stereo surgical microscope	Leica	A60 F
구멍이 있는 멸균 시트	Evercare OneMed	1555-01
수술 블레이드 nr.15	Fine Science Tools	10015-00
Tweezers	Fine Science Tools	11617-12

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