Translaminar Autonomous System을 사용한 Translaminar Pressure 모델 개발

초록

출처: Sharma, T. P., et al., Translaminar Autonomous System Model for the Modulation of Intraocular and Intracranial Pressure in Human Donor Posterior Segments(인간 기증자 후방 분절에서 안구 및 두개내 압력 조절을 위한 경층류 자율 시스템 모델). J. Vis. 특급 (2020).

이 비디오는 층류 횡단 자율 시스템에서 안구 및 두개내 압력을 시뮬레이션하여 망막 신경절 세포 신호에 대한 층상압의 영향을 연구하기 위해 인간의 눈을 준비하는 절차를 보여줍니다.

프로토콜

검체 채취와 관련된 모든 절차는 연구소의 IRB 지침에 따라 수행되었습니다.

1. 장비 및 소모품의 준비 및 살균

1. 필요한 소모품의 전체 목록과 공급업체 및 카탈로그 번호는 재료 표를 참조하십시오.
2. 사용하기 전에 모든 장비와 기구를 고압멸균하거나 에틸렌 옥사이드 앰플을 사용하여 멸균하십시오.

2. 관류 배지

1. 의 제조 1,000mL 고포도당 Dulbecco's modified Eagle's medium(DMEM) 1,000mL에 1% 페니실린-스트렙토마이신(10,000 U/mL 페니실린, 10,000 μg/mL 스트렙토마이신 0.85% NaCl) 및 1% L-글루타민(200 mM)을 추가합니다.
2. 0.22μm 필터를 통과시켜 관류 배지를 살균합니다.

3. 경층류 자율 시스템(TAS) 설정

1. 유입 주사기(안압(IOP) 및 두개내압(ICP) 저장소)을 설정합니다.
   1. 30mL 주사기에 30mL의 관류 배지(섹션 2)를 추가합니다. 30mL 주사기에 3방향 스톱콕을 부착합니다. 0.22μm 친수성 필터를 3방향 스톱콕에 부착합니다. 15G Luer 스터브 어댑터를 0.22μm 친수성 필터에 부착합니다.
   2. 주사기 설정에서 기포를 제거합니다. 15G Luer 스터브 어댑터에 튜브를 부착합니다. 통풍구가 없는 범용 잠금 캡으로 마개의 측면 포트를 닫습니다. 총 두 개의 설정에 대해 반복합니다.
   3. 한 주사기는 채널 1 두개내 압력(CH1 ICP)으로, 다른 주사기는 채널 2 안압(CH2 IOP)으로 표시합니다.
2. 유출 주사기(IOP 및 ICP 저장소)를 설정합니다. 위치
   1. 30mL 주사기에 3방향 스톱콕을 부착합니다. 15G Luer 스텁 어댑터를 3방향 스토콕에 부착합니다. 15G Luer 스터브 어댑터에 튜브를 부착합니다.
   2. 통풍구가 없는 범용 잠금 캡으로 마개의 측면 포트를 닫습니다. 총 두 개의 설정에 대해 반복합니다. 한 주사기는 CH1 ICP로, 다른 주사기는 CH2 IOP로 표시합니다.

4. 인간 안구 전체의 준비

참고: 전체 눈을 받는 경우 아래 절차에 따라 눈의 전안부와 후안을 분리하십시오. 눈을 이등분하는 경우 4.4단계부터 시작합니다.

1. 포비돈 요오드 용액에 눈 전체를 2분 동안 넣습니다.
2. 멸균 인산염 완충 용액(PBS)으로 눈을 헹구어 포비돈 요오드를 제거합니다. 두 번 반복합니다.
3. 집게와 가위를 사용하여 전체 안구에서 부속기를 제거합니다. 적도에서 눈을 이등분하여 눈의 앞쪽과 뒤쪽 부분을 분리합니다.
4. 시신경초를 제거합니다. 후방 분절에서 유리체액을 제거합니다.
5. 필요한 경우 IOP(하단) 챔버의 원형 돔에 잘 맞도록 후방 세그먼트에서 추가 공막을 잘라냅니다. 겸자를 사용하여 망막이 분절의 뒤쪽에 고르게 퍼져 있는지 확인합니다.
6. IOP(하단) 챔버 설정
   1. 시신경이 상단을 향하도록 하여 원형 돔 위의 TAS의 IOP(하단) 챔버에 인간 후방 분절을 배치합니다.
   2. 4개의 나사가 있는 에폭시 수지 O-링을 사용하여 후방 세그먼트를 밀봉하여 단단히 밀봉합니다.
   3. 튜브를 IOP(하단) 챔버의 IN 및 OUT 포트에 삽입합니다. 매체가 포함된 튜브가 있는 IOP 유입 주사기를 IN 포트에 삽입하고 튜브가 있는 빈 IOP 유출 주사기를 OUT 포트에 삽입합니다.
   4. push/pull 방법을 사용하여 관류 매체를 유입 포트로 천천히 주입하여 후방 안구 컵을 채우는 동시에 유출 주사기를 통해 관류 매체를 천천히 당겨 라인에서 기포를 제거합니다. IN 및 OUT 튜브에 기포가 없으면 매체 주입을 중지하십시오.
   5. 스톱콕을 꺼짐 위치에 잠급니다. IOP IN 포트 필터 어셈블리에서 30mL 주사기를 제거하고 30mL의 배지를 다시 채웁니다. 그런 다음 주사기를 필터 어셈블리로 교체합니다.
7. ICP(상단) 챔버 설정
   1. ICP(상단) 챔버/뚜껑을 후방 세그먼트 뒤쪽에 놓습니다. 시신경이 상부 챔버 내에 있는지 확인하십시오. 4개의 나사로 상단 챔버를 밀봉합니다.
   2. 튜브를 ICP(상단) 챔버의 IN 및 OUT 포트에 삽입합니다. 매체를 함유한 튜브가 있는 ICP 유입 주사기를 IN 포트에 삽입하고 튜브가 있는 빈 ICP 유출 주사기를 OUT 포트에 삽입합니다.
   3. 매체를 IN 포트에 부드럽고 천천히 주입하여 ICP 챔버를 채우고 푸시/풀 방법을 사용하여 라인에서 기포를 제거합니다. ICP 챔버와 IN 및 OUT 튜빙에 기포가 없으면 배지 주입을 중지하십시오.
   4. 스톱콕을 꺼짐 위치에 잠급니다. ICP 인 포트 필터 어셈블리에서 30mL 주사기를 제거하고 30mL의 배지를 다시 채웁니다. 그런 다음 주사기를 필터 어셈블리로 교체합니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
#122, 1-1/8" 내부 x 1-5/16" 외부 직경, Viton O-Ring, 3/32" 두께, 755 경도계 50 Pack	Amazon	B07DRGPPZJ
114 Buna-N O-Ring, 70A 경도계, 검정색, 5/8" ID, 13/16" OD, 3/32" 너비(100개 팩)	Amazon	B000FMYRHK
30mL 주사기(바늘 없음	Vitality Medical	302832
3-방향 스톱콕, 2 여성 루어 잠금장치, 회전 남성 루어 잠금장치, 통풍 캡	QOSINA	2C6201
4-40 X 1/2 PH PAN MS SS/CHROME & 적절한 크기의 십자 드라이버	Brikksen Stainless Steel Fastners	PPMSSSCH4C.5
ANPROLENE 16 LARGE AMPULE	Fisher Scientific	NC9085343
Betadine	Purdue	PUR1815001EACH<
Corning 100 x 20mm 조직 배양 처리 문화 접시	Sigma-Aldrich	CLS430167-100EA
코닝 L-글루타민 솔루션	Fisher Scientific	MT25005CI
Covidien 3033 Curity 거즈 스폰지, 4" x 4", 12-플라이, 멸균, 1200/CS	Med Plus Medical Supply	COV-3033-CS
Dressing Forceps Delicate Curved (serrated)<	K5-4010
Dumont #5 - Fine Forceps	F.S.T.	11254-20
Eye Scissors Standard Curved	Katena	K4-7410
Falcon 150 x 15mm Plain Sterile Disposable Petri Dishes	Capitol Scientific	351058
Fisherbrand 4 oz. 표본 용기	Fisher Scientific	16-320-730
Fisherbrand 인스턴트 씰링 살균 파우치	Fisher Scientific	01-812-54
Fisherbrand 인스턴트 씰링 살균 파우치	Fisher Scientific	01-812-55
Fisherbrand Instant Sealing Sterilization Pouches	Fisher Scientific	01-812-58
HyClone Dulbecco의 수정 된 독수리 중간	Fisher Scientific	SH3024302
HyClone 페니실린 스트렙토 마이신 100X 솔루션	SV30010		암 루어 잠금 흡입구가 있는 친수성 필터, 남성 루어 슬립 배출구, 파란색 및 투명	Qosina	28217
정수압 트랜스듀서, DELTRAN ® II, 카탈로그 # DPT-200 3CC/HR 유량	AD 기기	DPT-200
JG15-0.5HPX 15 게이지 0.5" NT 프리미엄 시리즈 디스펜싱 팁 50/Box	Jenson Global	JG15-0.5HPX 15
Keyence B2-X710 microscope	Keyence
LabChart 8	AD instruments	LabChart 8
Leica ST5020 Multi-stainer	Leica	ST5020
비통풍식 범용 루어 잠금 캡, 화이트	QOSINA	65811
Octal Bridge Amp (Model # FE228)	AD instruments	FE228
Pharmco Products ETHYL ALCOHOL, 200 PROOF	Fisher Scientific	NC1675398
인산염 완충 용액(PBS)	Sigma-Aldrich	D8537-500ML
PowerLab 8/35 (모델 # PL3508)	AD instruments	PL3508
< DAPItd 스타일이 있는 ProLong Gold Antifade Mountant=	P36935
공기 및 물 스트레이트 어댑터용 푸시 투 커넥트 튜브 피팅, 1/8" 튜브 OD x 1/8 NPT 남성	McMAster-Carr	7880T113
공기 및 물 용 범용 스레드가있는 푸시 - 투 - 커넥트 튜브 피팅, 어댑터, 1/8 "튜브 OD x 1/8 파이프	51235K101
Saint-Gobain Tygon S3 E-3603 플렉시블 튜빙 500 피트.	Fisher Scientific	14-171-268
Superblock T20	Fisher Scientific	PI37536
Surgical Scissors - Sharp-Blunt	F.S.T.	14001-14
조직 집게 섬세한 1x2 이빨 곡선	Katena	K5-4110
Translaminar Autonomous System (TAS)	노스 텍사스 대학교 보건 과학 센터	N/A
USA 크기 030 O-ring Buna-N, B1000, 70 경도계, 검정, Buna-N (NBR, 니트릴, 부나)	Marco Rubber & Plastics	B1000-030

)td style='width:174pt;'> td style='width:174pt;'>Katena < td 스타일 = '너비 : 174pt; '> Fisher Scientific'너비:174pt;'>ThermoFisher < td 스타일 = '너비 : 174pt; '> McMAster-Carr