Translaminar Autonomous System을 사용한 Translaminar Pressure 모델 개발

Abstract

출처: Sharma, T. P., et al., Translaminar Autonomous System Model for the Modulation of Intraocular and Intracranial Pressure in Human Donor Posterior Segments(인간 기증자 후방 분절에서 안구 및 두개내 압력 조절을 위한 경층류 자율 시스템 모델). J. Vis. 특급 (2020).

이 비디오는 층류 횡단 자율 시스템에서 안구 및 두개내 압력을 시뮬레이션하여 망막 신경절 세포 신호에 대한 층상압의 영향을 연구하기 위해 인간의 눈을 준비하는 절차를 보여줍니다.

Protocol

검체 채취와 관련된 모든 절차는 연구소의 IRB 지침에 따라 수행되었습니다.

1. 장비 및 소모품의 준비 및 살균

1. 필요한 소모품의 전체 목록과 공급업체 및 카탈로그 번호는 재료 표를 참조하십시오.
2. 사용하기 전에 모든 장비와 기구를 고압멸균하거나 에틸렌 옥사이드 앰플을 사용하여 멸균하십시오.

2. 관류 배지

1. 의 제조 1,000mL 고포도당 Dulbecco's modified Eagle's medium(DMEM) 1,000mL에 1% 페니실린-스트렙토마이신(10,000 U/mL 페니실린, 10,000 μg/mL 스트렙토마이신 0.85% NaCl) 및 1% L-글루타민(200 mM)을 추가합니다.
2. 0.22μm 필터를 통과시켜 관류 배지를 살균합니다.

3. 경층류 자율 시스템(TAS) 설정

1. 유입 주사기(안압(IOP) 및 두개내압(ICP) 저장소)을 설정합니다.
   1. 30mL 주사기에 30mL의 관류 배지(섹션 2)를 추가합니다. 30mL 주사기에 3방향 스톱콕을 부착합니다. 0.22μm 친수성 필터를 3방향 스톱콕에 부착합니다. 15G Luer 스터브 어댑터를 0.22μm 친수성 필터에 부착합니다.
   2. 주사기 설정에서 기포를 제거합니다. 15G Luer 스터브 어댑터에 튜브를 부착합니다. 통풍구가 없는 범용 잠금 캡으로 마개의 측면 포트를 닫습니다. 총 두 개의 설정에 대해 반복합니다.
   3. 한 주사기는 채널 1 두개내 압력(CH1 ICP)으로, 다른 주사기는 채널 2 안압(CH2 IOP)으로 표시합니다.
2. 유출 주사기(IOP 및 ICP 저장소)를 설정합니다. 위치
   1. 30mL 주사기에 3방향 스톱콕을 부착합니다. 15G Luer 스텁 어댑터를 3방향 스토콕에 부착합니다. 15G Luer 스터브 어댑터에 튜브를 부착합니다.
   2. 통풍구가 없는 범용 잠금 캡으로 마개의 측면 포트를 닫습니다. 총 두 개의 설정에 대해 반복합니다. 한 주사기는 CH1 ICP로, 다른 주사기는 CH2 IOP로 표시합니다.

4. 인간 안구 전체의 준비

참고: 전체 눈을 받는 경우 아래 절차에 따라 눈의 전안부와 후안을 분리하십시오. 눈을 이등분하는 경우 4.4단계부터 시작합니다.

1. 포비돈 요오드 용액에 눈 전체를 2분 동안 넣습니다.
2. 멸균 인산염 완충 용액(PBS)으로 눈을 헹구어 포비돈 요오드를 제거합니다. 두 번 반복합니다.
3. 집게와 가위를 사용하여 전체 안구에서 부속기를 제거합니다. 적도에서 눈을 이등분하여 눈의 앞쪽과 뒤쪽 부분을 분리합니다.
4. 시신경초를 제거합니다. 후방 분절에서 유리체액을 제거합니다.
5. 필요한 경우 IOP(하단) 챔버의 원형 돔에 잘 맞도록 후방 세그먼트에서 추가 공막을 잘라냅니다. 겸자를 사용하여 망막이 분절의 뒤쪽에 고르게 퍼져 있는지 확인합니다.
6. IOP(하단) 챔버 설정
   1. 시신경이 상단을 향하도록 하여 원형 돔 위의 TAS의 IOP(하단) 챔버에 인간 후방 분절을 배치합니다.
   2. 4개의 나사가 있는 에폭시 수지 O-링을 사용하여 후방 세그먼트를 밀봉하여 단단히 밀봉합니다.
   3. 튜브를 IOP(하단) 챔버의 IN 및 OUT 포트에 삽입합니다. 매체가 포함된 튜브가 있는 IOP 유입 주사기를 IN 포트에 삽입하고 튜브가 있는 빈 IOP 유출 주사기를 OUT 포트에 삽입합니다.
   4. push/pull 방법을 사용하여 관류 매체를 유입 포트로 천천히 주입하여 후방 안구 컵을 채우는 동시에 유출 주사기를 통해 관류 매체를 천천히 당겨 라인에서 기포를 제거합니다. IN 및 OUT 튜브에 기포가 없으면 매체 주입을 중지하십시오.
   5. 스톱콕을 꺼짐 위치에 잠급니다. IOP IN 포트 필터 어셈블리에서 30mL 주사기를 제거하고 30mL의 배지를 다시 채웁니다. 그런 다음 주사기를 필터 어셈블리로 교체합니다.
7. ICP(상단) 챔버 설정
   1. ICP(상단) 챔버/뚜껑을 후방 세그먼트 뒤쪽에 놓습니다. 시신경이 상부 챔버 내에 있는지 확인하십시오. 4개의 나사로 상단 챔버를 밀봉합니다.
   2. 튜브를 ICP(상단) 챔버의 IN 및 OUT 포트에 삽입합니다. 매체를 함유한 튜브가 있는 ICP 유입 주사기를 IN 포트에 삽입하고 튜브가 있는 빈 ICP 유출 주사기를 OUT 포트에 삽입합니다.
   3. 매체를 IN 포트에 부드럽고 천천히 주입하여 ICP 챔버를 채우고 푸시/풀 방법을 사용하여 라인에서 기포를 제거합니다. ICP 챔버와 IN 및 OUT 튜빙에 기포가 없으면 배지 주입을 중지하십시오.
   4. 스톱콕을 꺼짐 위치에 잠급니다. ICP 인 포트 필터 어셈블리에서 30mL 주사기를 제거하고 30mL의 배지를 다시 채웁니다. 그런 다음 주사기를 필터 어셈블리로 교체합니다.

Materials