장시간 높은 볼륨의 소리 노출을 통해 마우스의 청력 상실 유도

초록

출처: Lee, D. et. al., 마우스의 소음성 난청 및 청력 기능 및 외부 유모 세포 손상 평가에 대한 수정된 실험 조건. J. Vis. Exp. (2023)

이 비디오는 마우스의 소음성 난청 절차를 보여줍니다. 높은 볼륨의 소리는 내이의 유모 세포를 손상시키고 청각 경로를 방해하여 청각 장애를 초래합니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 생쥐의 소음성 난청(NIHL) 유도

1. 실험용 쥐를 위한 케이지 준비
   1. 이렇게 하려면 14cm × 17cm × 24cm 크기의 쥐덫 케이지를 사용하십시오. 골판지 플라스틱 보드 4장을 적절한 크기로 잘라 케이지에 맞도록 합니다(13cm × 23cm 및 13cm × 16cm).
   2. 쥐가 메쉬 그리드에 발이 잘리는 것을 방지하려면 두 조각을 각각 바닥과 뒷면에 놓습니다. 다른 두 조각을 서로 수직으로 맞물려 놓아 케이지 내부의 공간을 4등분합니다.
2. 방음 상자에서 이 연구를 수행하십시오. 케이지 앞에 스피커를 8.5cm 정도 놓고 스피커와 케이지를 모두 방음 상자에 넣습니다.
3. CLIO 응용 프로그램 소프트웨어를 엽니다.
4. 커서를 스피커 아이콘으로 이동한 다음 TwoSin을 클릭합니다. Freq 1의 값을 1000Hz로, Freq 2를 6000Hz로 입력하고 OK 를 클릭하여 사운드 재생을 시작합니다.
5. Leq 탭에서 데시벨 볼트(dBV)를 데시벨 음압 레벨(dBSPL)로 변경합니다. 소프트웨어 인터페이스에서 시간을 설정한 후 녹색 삼각형 버튼을 클릭하여 사운드를 재생합니다.
6. 스피커 앞에 마이크를 8.5cm 거리에 배치하여 소음 수준을 보정합니다(그림 1). 소음 수준을 125dB SPL-A로 조정하고 3분 이상 지속적으로 모니터링하여 소음 수준이 충분히 안정적인지 확인합니다. 발생기, 분석기 및 증폭기를 사용하여 노이즈를 생성하고 제어합니다. (그림 2)
   참고: 작업자의 청력 손상을 방지하기 위해 방음 상자에서 이 단계를 수행하십시오.
위치
7. 소음 노출을 위해 4마리의 수컷 C57BL/6J 마우스를 케이지(각 분기당 하나씩)에 넣습니다. 소음이 노출되는 동안 각 분기에 마우스를 무작위로 할당합니다. 케이지 상단에 마이크를 배치하여 소음 노출 중 소음 수준을 모니터링합니다(그림 3).
   참고: 작업자의 청력 손상을 방지하기 위해 방음 상자에서 이 단계를 수행하십시오.
8. 마우스를 1kHz 및 6kHz의 주파수에서 하루 6시간 동안, 연속 5일 동안 지속적으로 소음에 노출시킵니다.

결과

그림 1: 캘리브레이션을 통한 전압 계산. 각 특정 주파수에 대해 선택한 전압(수평 축)의 값이 보정 곡선에 입력되어 해당 사운드 레벨(수직 축)을 얻습니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
1/4" CCP 프리필드 표준 마이크 세트	GRAS	428158	소음 노출용
랫 트랩 케이지			14 cm x 17 cm x 24cm
사운드 증폭기, MT-1000	유니카		소음 노출용
소리 발생기/분석기/기타, FW-02	클리오	620300719	소음 노출용
방음실	IEA 전기 음향 기술		용 소음 노출 및 ABR
스피커	IEA 전기 음향 기술		소음 노출용