이 비디오는 pH에 민감한 형광 염료 표지 시냅토솜을 사용하여 미세아교세포와 같은 세포의 식세포 능력을 연구하는 분석을 보여줍니다.
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방법 논문
인간 시냅토솜을 이용한 미세아교세포 유사 세포의 생세포 식세포작용 분석
953 조회수
⸱
2025년 4월 28일
이 논문에서
초록
프로토콜
- Live-cell phagocytosis assay
- Plate 20-30 × 100 μL의 iMG complete medium에서 96-well plates로 넣고 10일 동안 분화 과정을 따릅니다.
- 분석 당일, 2mL의 iMG 기저 배지에 살아있는 세포에 대한 핵 염색 1방울을 추가하여 핵 염색 용액을 준비합니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 세포 배양 재료 | |||
| Primaria 96-well Clear Flat Bottom Microplate | Corning | 353872 | |
| CellAttach Laminin-521 | STEMCELL Technology | 77004 | Corresponding to laminin 521 |
| Components: iMG base media< | |||
| 고급 DMEM/F12 | Gibco | 12634010 | 최종 농도 1x |
| GlutaMAX | Gibco | 35050061 | 최종 농도 1x |
| N2 supplement, 100x | Gibco | 17502-048 | 최종 농도 1x |
| 페니실린-스트렙토마이신 (10,000 U/mL) | Gibco | 15140122 | 최종 농도 100 U/mL |
| IMG의 구성 요소 complete media | |||
| 55 mM 2-메르캅토에탄 | Gibco | 21985023 | 최종 농도 55μM |
| IL-34 | PeproTech 또는 Biologend | 200-34 or 577904 | 최종 농도 100 ng/mL |
| iMG base media | 최종 농도 1x | ||
| M-CSF | PeproTech | 300-25 | 최종 농도 5 ng/mL |
| tgg-β< | 100-21 | 최종 농도 50 ng/mL | |
| Phagocytosis assay dyes | |||
| NucBlue Live Ready reagent | Invitrogen | R37605 | |
| pHrodo Red, succinimidyl ester | ThermoFisher Scientific | P36600 | pH에 민감한 염료 |
| 기타 세포 배양 시약 | |||
| Cytochalasin D | Sigma | 최종 농도 10 μM | |
| Software and Equipment | |||
| Centrifuge | Eppendorf | Model 5810R | |
| Cytation 5 live cell imaging reader | Biotek | ||
| Gen5 마이크로플레이트 리더 및 이미저 소프트웨어 | Biotek | 버전 3.03 |
