쥐 모델에서 상승된 안압 유도

초록

출처: Lani-Louzada, R., et al., 설치류의 외과적 유도 녹내장에 대한 변지 혈관신경총의 전원형 소작. J. Vis. Exp. (2022)

이 비디오는 쥐 모델에서 상승된 안압(IOP)의 유도 및 모니터링을 보여줍니다. 이 과정에는 변부 혈관을 소작하는 것이 포함되며, 그 결과 혈관 폐색과 안압 상승이 발생합니다. 그런 다음 쥐가 회복되도록 하고 IOP는 비교를 위해 실험 눈과 대조 눈 모두에서 정기적으로 모니터링됩니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

본 연구에서는 2-3개월, 체중 180-320g의 남녀 모두의 리스터 후드 쥐를 사용했습니다. 그러나이 절차는 다양한 연령대의 다른 쥐 균주에 적용될 수 있습니다.

안구 고혈압 수술 및 임상 후속 조치

1. {{}}표준 펠릿화 감마선 조사 식품(Nuvilab® CR-1, Quimtia S/A, Brazil) 및 물(3중 필터, 무독성 활성탄 포함) ad libitum.
2. 10% 케타민 염산염 3부와 2% 자일라진 염산염 1부(희석제: 멸균수)로 구성된 마취 칵테일 혼합물을 준비합니다.
3. 등쪽 피부를 잡고 동물을 부드럽게 제지하고 혼합물 체중 1μL/g(케타민: 75mg/kg, 자일라진: 5mg/kg)의 복강 내 투여로 마취를 유도합니다. 약 5분 후 발가락 꼬집음 반응을 수행하여 적절한 마취를 확인하십시오.
4. 프록시메타카인 하이드로클로라이드 0.5% 점안액을 주입하여 양쪽 눈 표면을 국소 마취합니다. 30-60초 동안 기다렸다가 작은 멸균 면봉으로 코 또는 외측 구결막을 부드럽게 만져 지구의 앞쪽에서 남은 용액을 제거합니다.
5. 각막 표면이 안압계 끝에 쉽게 접근할 수 있도록 동물을 벤치탑의 복부 욕창 위치에 배치하여 실험 및 반대쪽 대조 안구 모두의 기준선 IOP를 측정합니다.
6. applanation 또는 리바운드 휴대용 안압계를 사용합니다(그림 1A). 안압계 팁이 중앙 각막 영역에 수직으로 약간 닿도록 배치합니다. 3-5개의 신뢰할 수 있는 기계 생성 평균을 획득하고 평균화합니다. 각 평균은 6번의 성공적인 개별 측정 후 장치에 의해 자동으로 계산됩니다.
   1. 리바운드 안압계에 프로브를 로드하고 측정 버튼을 한 번 눌러 전원을 켜는 동시에 프로브가 떨어지지 않도록 장치 끝을 위쪽으로 놓습니다. 전원을 켜면 디스플레이에 00가 표시되어 장비가 측정할 준비가 되었음을 나타냅니다.
   2. 프로브 끝이 각막에서 1-4mm 떨어진 곳에 장치를 배치하고 장비를 움직이지 않고 측정 버튼을 빠르고 조심스럽게 눌러 측정값을 획득합니다. 각 성공적인 측정은 짧은 경고음으로 식별되며 6회 후에는 평균이 장치 화면에 표시됩니다.
      참고: 압평 안압계에 대한 오랜 경험에도 불구하고 전체 절차를 최적화하기 위해 저자는 신뢰할 수 있는 IOP 측정을 더 쉽게 얻을 수 있는 리바운드 안압계의 사용을 권장합니다.
7. 동물을 실체 현미경 아래 약간 옆으로 욕창 위치에 놓고 40배 배율로 실험용 눈을 검사하여 조심스럽게 수술 계획을 세웁니다. 시술 중에 카르멜로스 나트륨 또는 히알루론산 나트륨 한 방울을 주입하여 윤활된 반대쪽 제어 눈을 유지하는 것을 잊지 마십시오.
8. 구부러진 집게의 도움으로 실험용 안구를 부드럽게 앞으로 밀어 가장자리의 360°를 둘러싸고 있는 혈관 구조가 노출되도록 합니다. 다른 손으로 저온 안과 소작기(1,300°F; Bovie Medical, 미국) (그림 1B-E).
   참고: 언급된 소작기는 끝이 둥글고 있어 윤부 혈관 구조에 세로로 닿아야 합니다.
9. 각막 주변부를 소작하지 않도록 주의하면 수술 후 각막 혼탁이 발생하여 망막 기능에 대한 in vivo 평가가 불가능해질 수 있습니다.
10. 공막 변연계에 소작의 작은 원형 자국이 나타나는 것, 윤부 혈관 구조의 소멸, 수술된 눈의 동공 확장이 성공적인 수술 절차의 징후임을 관찰하십시오.
    참고: 쥐와 생쥐의 윤부 혈관 구조는 해부학적으로 유사하고 사용된 소작기는 부드러운 작은 팁을 가지고 있기 때문에 이 프로토콜은 적응 없이 쥐의 눈에도 작동할 수 있습니다.
11. 수술 후 1.5단계와 같이 양쪽 눈의 수술 직후 안압을 확인합니다.
12. 안과용 프레드니솔론 아세테이트(1.2mg/mL) 한 방울을 바르고 약 40초 동안 실험 안구의 전방 표면과 접촉을 유지한 다음 항생제(옥시테트라사이클린 염산염 30mg/g 및 폴리믹신 B 10,000U/g 또는 시프로플록사신 3.5mg/g)의 안과 연고로 교체합니다. 시술 후 통증을 예방하기 위해 트라마돌 염산염을 근육 주사(1회 용량, 2mg/kg)합니다.

결과

그림 1: 윤부 혈관 신경총의 열 소작 및 망막 기능에 미치는 영향 생체 내. (A) 쥐의 안압을 측정하는 대체 방법: 리바운드 안압계(우수) 및 압평 안압계(열등). (B-E) 수술; 화살촉: 변연계 혈관 신경총; 화살표: 안구의 앞쪽 표면을 노출시키고 윤부 혈관에 대한 외과적 평가를 최적화하는 데 사용되는 곡선형 집게; 해시(hash): 저온 안과 소작기의 둥근 끝; 별표: 소작 표시. 눈금 막대: 2mm. (D)에 삽입된 부분은 소작할 윤부 혈관 구조를 더 높은 배율로 보여줍니다. (F) OHT(빨간색) 및 대조군(검은...

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Cautery Low Temp Fine Tip 10/bx	Bovie Medical Corporation	AA00	저온 안과 소작기
Cetamin	Syntec do Brasil Ltda	000200-3-000003	케타민 염산염 10%
에코필름	Cristália Produtos Químicos Farmacêuticos Ltda	MS-1.0298.0487	카르멜로스 나트륨 0.5%
히아박	União química farmacêutica nacional S/A	MS-8042140002	히알루론산나트륨 0.15%
Icare Tonolab	Icare Finland Oy	TV02 ( 모델 번호)	리바운드 휴대용 안압계
Maxiflox	Cristália Produtos Químicos Farmacêuticos Ltda	MS-1.0298.0489	Ciprofloxacin 3.5 mg/g
Ster MD	União química Farmacêutica Nacional S/A	프레드니솔론 아세테이트 0.12%
테로락	크리스탈리아 프로두토스 퀴미코스 파르마케우티코스 유한회사	MS-1.0497.1286	케토롤락 트로메타몰 0.5%
테라미시나	Laboratórios Pfizer Ltda	MS-1.0216.0024	옥시테트라사이클린 염산염 30 mg/ g + 폴리믹신 B 10,000 U/g
Tono-Pen XL	Reichert Technologies	230635	디지털 압평 휴대용 안압계
	Carl Zeiss	-	수술 및 망막 박리를 위한 실체 현미경

{{TAG_ 74}}MS-1.0497.1287{{TAG_ 121}}