Performing Crush Axotomy on the Facial Nerve in a Mouse 모델

초록

출처: Olmstead, D. N., et al., Facial Nerve Axotomy in Mice: A Model to Study Motoneuron Response to Injury. J. Vis. 특급 (2015).

이 비디오는 마우스의 안면 신경 파쇄 절차를 보여주며, 주요 랜드마크를 둔기로 해부하면 스타일로마스토이드 구멍에서 안면 신경 줄기가 노출됩니다. 그런 다음 겸자를 사용하여 신경 줄기를 압박하여 축삭 손상을 유도하고 신경 신호 전달을 방해합니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 외과적 접근법

1. 입체경을 수술 필드에 맞춰 정렬하고 초점을 맞춥니다. 노즈콘을 조정하고 테이프로 붙여서 시야의 가장자리를 따라 위치하도록 합니다.
2. 마우스를 왼쪽으로 눕힌 상태에서 오른쪽 귀 가장자리를 콧방울에 테이프로 붙여서 절개할 귀 뒤쪽 부위를 노출시킵니다. 후방 이정맥이 귀를 가로질러 수평으로 이동하는지 확인합니다. 동물의 올바른 위치와 귀의 테이핑은 안면 신경을 빠르게 찾는 데 중요합니다.
3. 귀 위와 뒤의 털을 70% 에탄올로 적시고 면도기나 메스 날로 수술 부위를 면도합니다. 털을 미리 적시면 이 해부학적 위치에서 더 쉽게 면도할 수 있습니다.
4. 베타딘 수술용 스크럽(7.5% 포비돈-요오드)과 같은 요오드 용액과 70% 에탄올로 피부를 청소합니다. 이 청소를 두 번 더 반복하여 해당 부위를 철저히 소독하십시오.
5. 절개 위치를 결정하려면 귀에서 꼬리 방향으로 귀 뒤쪽 정맥을 따라 귀 돌출부 뒤쪽 영역까지 추적합니다. 스프링 가위를 사용하여 돌기 뒤쪽 2 - 3 mm를 4mm 절개합니다.
6. 둔기 박리를 사용하여 피하 지방과 근막을 통해 절개합니다. 혈관이나 근육 조직이 쉽게 손상될 수 있으므로 가위로 직접 절단하지 마십시오.
7. 출혈이 발생하면 멸균 면봉으로 최소 30초 동안 수술 부위를 압박합니다. 상당한 체액 손실이 발생하는 경우, 25g 또는 27g 바늘을 사용하여 최대 0.5ml의 멸균 0.9% 식염수를 마우스에 복강내 주입합니다.
8. 척추 부속 신경, 외이도 및 전방 이복근(아래 설명 참조)과 같은 몇 가지 주요 랜드마크를 사용하여 안면 신경을 찾습니다. 안면 신경의 가지가 시각화될 때까지 이러한 랜드마크 주위를 해부합니다. 신경은 드러날 때 상당히 단단한 흰색 구조로 나타나며, 근막층이 기본 구조에 부착됩니다.
   1. 척추 부속 신경을 찾으세요, 이 신경은 피하 지방과 근막이 절개된 후 두개골의 꼬리 부분에서 승모근에 신경을 공급하기 위해 이동합니다. 안면 신경은 척추 부속 신경 깊숙한 곳에 있습니다.
   2. 진주처럼 하얗게 보이고 안면 신경에서 볼 수 있는 연골 외이도를 찾습니다.
   3. 안면 신경 위와 꼬리 위에 있는 전방 위장 근육의 배꼽 근육을 찾습니다.
9. 안면 신경의 주요 가지가 시각화되면 등쪽으로 추적하여 스타일로마스토이드 구멍에서 기원을 찾습니다. 끝이 가는 Dumont 겸자 #5/45를 사용하여 수술 부위를 열린 상태로 유지하고 신경의 경로를 따라 스프링 가위식 끝을 전진시킨 다음 겸자를 등쪽으로 움직여 새로 전진한 영역을 열린 상태로 유지합니다.
10. 이 시점에서 안면 신경의 몸통을 zygomatic, buccal, marginal mandibular branches와 함께 시각화합니다.
    위치 참고: 측두부 가지는 구멍에 더 가깝게 발견됩니다. 가장자리 하악 신경은 턱에 더 가까운 상부와 하부로 분기되므로 이러한 신경 분기는 이 수준에서 볼 수 없습니다.
    1. 압착 부상을 입은 경우 Dumont #5/45 겸자를 사용하여 일정한 압력을 사용하여 30초 동안 신경을 압박하여 모든 축삭을 절단한 다음 첫 번째 압착 부위에 수직인 두 번째 각도로 이 압착을 반복합니다. 30초 동안 분쇄하는 동안 다양한 양의 압력을 가하지 마십시오, 그렇지 않으면 부상이 동물들 간에 일관되지 않을 것입니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Stereo Microscope	Leica	M60
labeling tape	Fisher Scientific	15-952
Vannas-Tübingen Spring Scissors - Straight/Sharp/8.5cm/5mm cutting edge	Fine Science Tools	15003-08	Sterilize before use
Dumont #5/45 Forceps - Standard 팁/각진 45°/Dumoxel/11cm	Fine Science Tools	11251-35	사용 전
0.9% 염화나트륨 주입, USP	Hospira	0409-4888-10
Betadine, 16 oz, with dispenser	Fisher Scientific	19-027132
70% Ethanol
Glass Bead Sterilizer

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