태아기 쥐의 뇌병증을 모델링하기 위한 저산소성 허혈성 및 염증성 질환 유도

초록

출처: Jantzie, L. L., et. al입니다. Modeling Encephalopathy of Prematurity Using Prenatal Hypoxia-ischemia with Intra-amniotic Lipopolysaccharide in Rats(쥐에서 양막내 지방다당류를 사용한 산전 저산소증-허혈을 사용한 미숙아 뇌병증 모델링). J. Vis. Exp. (2015)

이 비디오는 자궁 혈류를 제한하고 LPS를 주입하여 태아 쥐에서 저산소성 허혈성 및 염증성 상태를 유도하는 프로토콜을 보여주며, 조산 연구와 관련된 신경 염증 및 뇌 발달 장애를 모델링합니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 동맥류 클립 배치

1. 각 자궁 동맥에 쥐 30G 동맥류 클립을 놓습니다. 근위부 및 원위 맥박을 포함한 혈류의 중단과 개별 태반을 포함한 자궁 혈관의 어두워짐을 확인합니다. 노출된 뿔과 수술 부위 전체를 거즈로 덮고 멸균 식염수로 세척합니다. 밭을 촉촉하게 유지하기 위해 약 10분마다 관개하십시오.
2. 60분 후 거즈를 제거하고 밭에 관개합니다. 성공적인 클립 제거를 위해 자궁 뿔과 혈관이 적절하게 촉촉하게 적셔졌는지 확인하십시오. 집게를 사용하여 각 동맥류 클립을 부드럽게 제거합니다. 혈관에 외상을 입히지 않도록 주의하고 제거하는 동안 조직의 무결성을 유지하십시오.
3. 자궁 뿔과 밭을 철저히 세척하고 양막에서 흩어진 거즈 실을 제거하도록 주의하십시오.

2. 양막에 지방다당류 주입

1. 태반판 바로 앞쪽에 있는 각 양막낭 기저부에 100μl의 지질다당류(LPS)(4μg/sac)에 희석된 Evan's blue dye를 양수에 주입합니다. 뭉툭한 집게를 사용하여 각 양막낭을 안정화하고 주사를 위한 최적의 위치로 회전시킵니다. Dilute Evan의 파란색 염료는 적절한 주사기 배치 및 주입을 확인하는 데 도움이 되는 조영제입니다.
   참고: 양수 내 주사에는 8mm 31G 바늘이 부착된 초미세 0.3ml 인슐린 주사기만 사용하십시오. 더 큰 게이지 바늘을 사용하면 만성 양수 손실, 태아 사망 및 임신의 재흡수를 초래할 수 있습니다. 주사기 제거 시 소량의 양수 누출은 양수낭에 대한 직접적인 압력으로 완화할 수 있습니다. 일부 쥐 태아는 어느 정도의 희소수다증을 견딜 수 있습니다. 그러나 큰 게이지 바늘로 인한 천공으로 인한 급성 양수 손실이나 만성 체액 누출을 초래하는 우발적인 천공은 태아 손실과 심한 경우 이웃 임신의 상실을 초래합니다.
2. 자궁 뿔에 멸균 식염수로 3번 세척합니다.

3. 개복술 봉합

1. 겸자를 사용하여 자궁뿔을 조심스럽게 복막강으로 되돌립니다. 양막과 정중선 절개 사이에 적절한 공간을 확보하고 러닝 3-0 실크 봉합사를 사용하여 근막층 가장자리를 다시 근사화합니다. 근육 절개 부위를 봉합하는 동안 양막의 위치에 주의하십시오. 주머니 안이나 주머니를 통해 봉합사하지 않도록 주의하십시오.
2. 러닝 3-0 실크 봉합사를 사용하여 피부층을 다시 근사화하고 피부층을 닫습니다.
   참고: 개복술은 임신 기간 증가와 함께 피부와 근육이 확장될 수 있도록 두 겹의 연속 봉합사로 닫아야 합니다. 연속 봉합사는 상처 장력을 고르게 분산시킬 수 있습니다. 중단된 봉합사는 여러 개의 매듭이 자극적이고 마취에서 회복된 후 쥐가 쉽게 씹을 수 있기 때문에 바람직하지 않습니다. 수술용 스테이플은 바람직하지 않습니다. 수술 매듭의 꼬리는 매우 짧게 잘라야합니다 (<3mm).
3. 위치 26G 바늘을 사용하여 0.125% 부피바카인 1ml를 상처 가장자리 주위에 피하주사합니다. 0.1mg/kg의 부프레노르핀을 목덜미에 1회 피하투여합니다.
4. 이소플루란을 끄고 필요에 따라 쥐를 수건으로 말리십시오. 쥐를 깨끗한 집 케이지에 넣고 마취에서 회복하는 것을 모니터링합니다. 쥐가 저체온증에 걸리지 않도록 하십시오.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Saline Solution, 0.9%	Sigma	S8776
LPS 011B4	Sigma	L2630
Evan's Blue Dye	Sigma	E2129
Surgical gloves	Biogel	40870
또는 타월	Cardinal Health	287000-008	멸균
PDI 알코올 준비 패드	Fisherbrand	06-669-62
미니 아르코 충전식 가위	켄트 사이언티픽 코퍼레이션.	CL8787
Blunt Forceps	Roboz	RS-8100
Scissors	Roboz	RS-6808
수술용 가위	Roboz	RS-5880
Surgical Scissors	F.S.T.	14002-16
Syringe	BD	309628	1 ml
Needle	BD	305122	25G 5/8
Needle	BD	305128	30G 1
솜 팁 어플리케이터	Fisherbrand	23-400-114	Small, 6 inch sterile
Cotton Gauze sponge	Fisherbrand	22-362-178
Needle Holders	Kent Scientific 공사.	INS600109	12.5 CM STR
Vessel Clips	켄트 사이언티픽 코퍼레이션.	INS600120	30G Pressure
3-0 Perma Hand Silk Sutures	Ethicon	1684G	Black braided, 3-0 (2 metric), 18", non-absorbable, PS-1 24mm needle, 3/8 circle
Insulin Syringes	BD	328438	0.3cc 3mm 31G