척수 손상 동축 플랫폼을 이용한 마우스 모델에서 척수 타박상 유도

초록

출처: Elzat, E. Y. Y., et al., 최소 침습 기법을 기반으로 한 마우스 타박상 척수 손상 모델 구축. J. Vis. 특급 (2022).

이 비디오는 척수 손상 동축 플랫폼을 사용하여 마우스 모델에서 T9 수준의 척수에 타박상 부상을 유발하는 방법을 보여줍니다. T9 수준의 척수에 체중이 가해져 타박상이 발생하여 즉시 조직이 변색되고 부어오릅니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 9^번째 흉추(T9)

참고: 암컷 C57BL/6J 마우스는 9-10주 된 Jinan Pengyue Experimental Animal Company(중국 지난)에서 구입했습니다.

1. 실험을 위한 일련의 수술 기구를 오토클레이브하고 수술 전에 75% 알코올로 수술대를 살균합니다.
2. 진통제를 위해 부프레노르핀을 주사(0.05-2.0mg/kg, 피하주사) 부상 수술을 위한 마취 30분 전에 주사합니다. 그런 다음 이소플루란으로 마우스를 마취합니다(유도: ~3-5%, 유지: ~1.5-2%). 동물이 꼬리나 발가락 꼬집기의 반사 신경에 의해 완전히 마취되었는지 확인하십시오. 마취가 시작되면 수술대의 지정된 부분에 엎드린 자세로 마우스를 눕히고 안과 연고로 각막을 코팅합니다(수술 중 눈이 건조해지지 않도록 각막에 안과 연고를 바르십시오).
   1. 흉요추 위에 전기 면도기로 꼬리부터 꼬리까지 털을 면도합니다. 요오드로 30초 동안 원을 그리며 피부를 여러 번 살균한 다음 75% 알코올을 투여합니다. 멸균 수술용 드레이프를 바르고 메스와 칼날로 약 6^번째 흉추(T6)에서 13^번째 흉추(T13)까지 피부를 약 1.5cm의 세로 절개합니다.
      참고: 늑골 가장자리를 따라 12^번째 흉추(T12) - T13 척추 간 공간이 있는 정중선까지 촉진합니다. 주둥이를 1.5cm 절개하고 절개 부위가 T6-T13 척추와 거의 같은 높이가 됩니다.
3. 작동 현미경으로 뼈 부분에서 한쪽 면에 있는 13^번째 갈비뼈를 탐색합니다. costovertebral angle 영역을 가볍게 터치한 다음 rostral 쪽으로 이동하여 정중선의 spinous process를 탐색하여 T12-T13의 spinous space를 찾습니다. T12-T13의 공간에서 상부 쪽까지 T9 - 10^th 흉추(T10)의 척추 간 공간을 탐험합니다. (그림 1A, 2A)
4. T9의 척추돌기를 따라 양쪽의 전방 및 후방 관절까지 척추주위 근육을 마이크로 가위로 절개합니다(그림 2B). 마이크로 견인기로 척추 주위 근육을 수축시키고 얇은 판과 8^번째 흉추(T8) - T9 및 T9-T10의 척추 간 공간에서 마이크로 가위로 연조직을 청소합니다.
5. T9 후판 절제술을 시행하고, 미세 수술 겸자로 T9의 가시 과정을 고정하고, 약간 들어 올리고, 척수 손상을 피하면서 얇은 판의 오른쪽 배외측을 따라 평행하게 마이크로 가위를 삽입하고 마이크로 가위로 얇은 판을 잘라냅니다. 왼쪽에서도 반복하면 척수가 노출될 수 있습니다(그림 1B, 2C). 위치
6. 척추를 고정하기 전에 보편적인 팔을 풀고 척추 안정기의 마이크로 모기 집게로 척추 양쪽의 9^번째에서 10^번째 패싯 관절을 천천히 고정합니다. 마이크로 모기 집게의 나사를 조이면 척추뼈가 안정됩니다. 척수를 수평면으로 조정하고, 보편적인 팔을 조이고, 척추를 고정합니다(그림 2D).

2. T9 타박상 손상

1. T9 수준의 척수가 노출되고 척추뼈가 고정되면 작동 현미경 아래의 슬리브 안쪽 끝으로 척수를 조준합니다(그림 2E).
2. 현미경으로 척수와 팁의 관계를 관찰하기 쉽고 수술대를 쉽게 돌릴 수 있으므로 척수의 후방 및 측면 측면에서 팁의 표면이 척수와 평행한지 확인하십시오.
3. 팁이 척수와 평행한 자연적인 기준면이기 때문에 후판 절제술 후 팁이 척수와 접촉하기 전에 팁의 표면이 예비된 얇은 판의 양측 경계와 평행한지 확인하십시오.
4. T12-T13의 척추 간 공간을 찾은 후 임팩터의 끝이 관찰 창의 표시와 일치하고 지정된 높이인 22mm에 도달할 때까지 슬리브를 내립니다. 당김 핀을 당겨 무게를 해제합니다(그룹에 따라 1.3g, 2.0g 또는 2.7g, 각 그룹에는 3마리의 마우스가 포함되고 각 그룹에는 각 시점에 대해 하나의 마우스가 있음).
   참고: 척수는 지면과 평행해야 하며 끝에 수직이어야 합니다. 테이블이 매우 컴팩트하기 때문에 미세한 시야를 보장하기 위해 수술대를 이동합니다.
5. 타박상이 발생하면 임팩터를 제거하고 작동 현미경으로 척수 손상(SCI)의 정도를 관찰합니다. 경증 그룹에서는 밝은 붉은색의 변화를 볼 수 있는 반면, 중등도 그룹에서는 부상 부위가 3-4초 동안 짙은 빨간색을 나타내며 아마도 현저함을 관찰할 수 있습니다. 중증 그룹에서는 짙은 적색의 징후가 즉시 나타날 수 있으며 경막에서 명백한 탁월함이 나타날 수 있지만 경막은 여전히 일관된 모양을 유지하고 있습니다(그림 2F).

결과

그림 1. T13 늑골 척추 위치 확인 방법의 이미징 그래프. (A) 13^번째 갈비뼈와 T13은 비교적 일정한 해부학적 구조입니다. T13 늑골 측면은 현미경으로 쉽게 감지할 수 있으며, 작업자는 이를 통해 가시돌기 쪽을 탐사하고 T12-T13 척추 간 공간을 찾을 수 있습니다. 그런 다음 대상 부상 척추(예: T9)를 찾기 위해 로스트랄 쪽을 연속적으로 프로브합니다. (B) 최소 침습적 9^th 흉부 후판 절제술은 인접한 척추체 사이의 적절한 얇은 판 및 후관절을 보존할 수 있습니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Ethanol	Fuyu Reagent	64-17-5
형광 현미경	KEYENCE	BZ-X800
Mice	Jinan Pengyue Experimental AnimalCompany	C57BL/6J
Microsurgery apparatus	Shandong ULT Biotechnology Co., Ltd	모든 수술 기구는 맞춤 제작<
RWD Laboratory inhalation anesthetic station	RWD Life Science Co., Ltd	R550
Small animal in vivo microCT imaging system	PerkinElmer	Quantum GX2
척수 손상 동축 플랫폼	Shandong ULT Biotechnology Co., Ltd	Custom-made (Feng's standard)	(https://shop43957633.m.youzan.com/wscgoods/detail/367x5ovgn69q18g?banner_id=f.81386274~goods.7~1~ b0yRFKOq&alg_ id=0&slg=tagGood List-default%2COpBottom%2Cuuid %2CabTraceId&components_style_ layout=1&reft=1659409105184&sp m=g.930111970_f.81386274&alias =367x5ovgn69q18g&from_uuid=136 2cc46-ffe0-6886-2c65-01903dbacbb a&sf=qq_sm&is_share=1&shopAuto Enter=1&share_cmpt=native_ wechat&is_silence_auth=1)

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