척수 손상이 있는 마우스 모델 생성

초록

출처: Kumar, S., et. al. 척수 손상 후 욕창의 마우스 모델. J. Vis. Exp. (2019)

이 비디오는 마우스의 척수 손상에 대한 자세한 유도를 보여줍니다. 마취된 쥐를 절개하여 T9-T10 척추뼈를 노출시키고 가시돌기를 제거합니다. 그런 다음 노출된 척수를 절제하여 부상을 입힙니다. 그런 다음 수술 부위를 닫고 마우스가 회복할 수 있도록 합니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 수술 및 비수술 기구의 준비

1. 오토클레이브에서 수술 및 비수술 기구를 멸균합니다.
2. 70% 에탄올로 수술대를 세척하고 발열 패드를 37°C로 예열합니다.
3. 발열 패드를 수술대에 놓고 멸균 수술용 드레이프로 덮습니다.
   참고: 모든 생존 절차에서 불임 상태를 유지하기 위해 "노 터치" 기술이 사용됩니다.

2. 동물 준비 및 T9-T10 척추 후판 절제술 수행

1. 성체(Balb/c) 10주 된 수컷 마우스를 조달합니다. 흡입기를 사용하여 각 동물에서 마취를 유도하되, 5% 이소플루란으로 시작하여 나머지 절차 동안 진정을 유지하기 위해 2-3%로 줄입니다.
2. 꼬리/발 꼬집음으로 인한 통각 자극에 대한 반응을 유도하지 않음으로써 완전한 마취를 확인합니다.
3. 전기 가위기로 등쪽 모발(머리에서 꼬리까지)을 면도한 다음 제모 크림을 바르고(3분) 남은 모발을 제거합니다. 마지막으로 흐르는 물/젖은 스크럽으로 등쪽을 씻고 동물을 우리로 되돌립니다.
   참고: 피부 상처 시 피부에 대한 추가적인 자극 및 화학적 오염을 피하기 위해 필요합니다.
4. 다음날, 수술 중 눈이 건조해지지 않도록 각막에 안과 연고를 도포합니다. 그런 다음 베타딘 스크럽과 70% 에탄올의 3가지 대안으로 피부를 문지른다.
5. 메스로 T8-T12 척추 수준에서 뒤쪽 정중선을 따라 피부 절개(~1.0-1.5cm)를 수행합니다.
   참고: 척추의 수준은 T13 척추에 해당하는 떠 있는 갈비뼈의 위치를 사용하여 T13의 척추를 역계산하여 식별됩니다.
위치
6. 척추주위 근육에 접근하기 위해 피하 지방 조직을 청소한 다음 천천히 절개하여 양쪽의 가시돌기와 얇은 판을 노출시킵니다.
   참고: 이 시점에서 과도한 출혈이나 척수 부상을 방지하기 위해 이 절차를 매우 신중하게 수행하십시오.
7. 미세절제 겸자를 사용하여 척추 층을 부드럽게 벗겨내어 척수(T9-T10 척추뼈)를 노출시키는 후판 절제술을 시행합니다.
   참고: 부상의 생성을 용이하게 하기 위해 과도한 척수가 노출되도록 후판 절제술을 수행합니다. 대조군에서는 후판 절제술만 시행합니다.

3. T9-T10 완전 척수 손상(SCI)

1. 겸자를 사용하여 척추를 T8에 고정하고 척추 만곡을 과장하기 위해 들어 올립니다.
2. 가는 가위를 사용하여 T9와 T10 척추 사이의 척수를 척추관 바닥까지 절단하여 완전한 절개를 보장합니다.
3. 수술용 현미경으로 완전한 절개를 관찰한 후, 수술 부위를 봉합하기 전에 척수를 추가로 보호하기 위해 후판 절제술 부위에 피하 지방 조각을 바르십시오.
4. 마지막으로 상처를 봉합하고 연속 봉합사를 사용하여 척추주위 근육과 표재성 근막을 봉합한 다음 봉합 클립을 사용하여 피부를 봉합합니다.
5. SCI 이후, 다음 날 배변을 관찰합니다. 그러나 수동 방광 배출로 방광을 관리하십시오.
   참고: Basso Mouse Scale(BMS)은 SCI 후 2일차와 매주 뒷다리 기능 회복의 진행 상황을 모니터링하는 데 사용할 수 있습니다.

재료