뇌종양 신경구 절편에서 바이오마커의 면역조직화학적 염색

초록

출처: Núñez, F. J., et al. 파라핀 함유 3D 신경교종 신경구 배양에 대한 면역조직화학에 의한 신경교종의 바이오마커 평가. J. Vis. 특급. (2019).

이 비디오는 파라핀이 포함된 뇌종양 신경구에서 종양 바이오마커를 라벨링하기 위한 면역조직화학 기술을 보여줍니다. 신경구 절편은 파라핀 제거 및 재수화 과정을 거친 후 바이오마커 부위를 노출시키는 치료를 받습니다. 그런 다음 1차 및 2차 항체를 적용하여 이러한 바이오마커를 라벨링합니다. 2차 항체는 아비딘 접합 과산화효소(avidin-conjugated peroxidase enzyme)에 결합되어 있으며, 이 효소는 발색 기질을 산화시켜 바이오마커 위치를 나타냅니다. 마지막으로, 현미경 분석을 위해 핵 counterstaining 및 slide preparation이 완료됩니다.

프로토콜

1. 파라핀 포매 신경구(NS)의 면역조직화학(IHC)

1. 슬라이드를 금속 랙에 넣고 60°C에서 20분 동안 배양하여 파라핀을 녹입니다.
2. 실온(RT)에서 재수화 트레인에서 배양하여 슬라이드를 탈파라핀화합니다. 3x 크실렌 5분, 100% 2x 에탄올 2분, 95% 2x 에탄올 2분, 70% 1x 에탄올 2분, 1x 탈이온수 2분. 이제, 건조되면 비특이적 항체 결합이 발생하므로 항원 회수가 있을 때까지 슬라이드를 수돗물에 보관하십시오.
3. 시트를 시트르산 완충액(10mM 구연산, 0.05% 비이온 세제, pH 6)에서 125°C에서 30초 동안, 90°C에서 10초 동안 배양합니다. 식힌 다음 증류수로 슬라이드를 5번 헹굽니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
토끼 다클론 항-ATRX,	산타크루즈 생명공학	sc-15408	IHC, 1:250 희석
토끼 다클론 항-Ki-67	Abcam	Ab15580	IHC, 1:1000 희석
토끼 다클론 항-OLIG2	밀리포어	AB9610	IHC, 1:500 희석
염소 다클론 항 토끼 비오틴 접합	Dako	E0432	IHC, 1:1000 희석
Vectastain Elite ABC HRP 키트	Vector Laboratories Inc	PK-6100
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