알츠하이머병 마우스 뇌 절편에서 메톡시-X04 표지 아밀로이드 플라크의 시각화 및 매핑

초록

출처: Bisht, K., et. al. β-Amyloid Plaques와의 미세아교세포 상호 작용을 연구하기 위한 Correlative Light and Electron Microscopy. J. Vis. 특급. (2016)

이 비디오는 형광 및 명시야 현미경을 사용하여 알츠하이머병 마우스 뇌 절편에서 Methoxy-X04 표지 아밀로이드 플라크의 시각화 및 매핑을 보여주며, 알츠하이머 병리학 연구를 위한 플라크와 해부학적 구조의 정확한 상관관계를 가능하게 합니다.

프로토콜

동물 샘플과 관련된 모든 절차는 해당 동물 윤리 검토 위원회에서 검토되고 승인되었습니다.

1. 메톡시-X04 염색 플라크의 존재에 대한 섹션 스크리닝

1. 입체택시 마우스 뇌 지도의 도움을 받아 관심 영역(예: 본 예에서 사용된 해마 CA1)을 포함하는 뇌 절편을 선택합니다. 섹션이 건조되는 것을 방지하기 위해 충분한 동결 보호 용액이 들어 있는 24웰 배양 플레이트 내의 웰에 각 섹션을 놓습니다.
2. 다음 절차를 사용하여 섹션이 건조되지 않도록 각 섹션을 연속적으로 검사합니다.
   1. 일회용 피펫으로 현미경 슬라이드에 인산염 완충 식염수(PBS) 방울을 추가하고 해당 섹션을 방울에 놓습니다.
   2. 형광 현미경으로 단면을 검사하여 메톡시-X04로 표지된 Aβ 플라크가 포함된 영역을 식별합니다.
      참고: 메톡시-X04는 형광 자외선(UV) 필터(여기 340 - 380nm)를 사용하여 쉽게 시각화할 수 있습니다.
3. 현미경 스테이지를 이동하지 않고 명시야와 형광 모드에서 관심 영역(ROI)의 이미지를 캡처할 수 있는데, 이는 플라크의 존재를 조직 섹션의 구조적 영역과 직접 연관시키기 위해 각 이미지가 두 필드에서 동일한 영역을 표시해야 하기 때문입니다.
4. 동물 번호에 따라 촬영한 이미지를 저장하고 이름을 지정합니다. 또한 플레이트의 우물 번호와 촬영 한 사진의 필드를 기록하십시오. 예: 9978A1B; 동물 번호: 9978; 우물 번호 : A1; 필드: 밝음. 이미징이 완료되면 지정된 웰에 섹션을 다시 놓습니다. 위치
   참고: 결국, 조사된 각 섹션에 대해 명시야와 UV 필드에 대한 두 개의 사진이 얻어집니다.
5. 이미지 J에서 동일한 ROI의 두 이미지(하나는 명시야, 다른 하나는 UV 필드)를 열고 MosaicJ 플러그인을 사용하여 두 이미지의 가장자리를 정렬하고 출처의 웰 번호에 따라 정렬 및 결합된 이미지를 저장합니다.
6. 특정 동물의 번호가 적힌 별도의 폴더에 사진을 저장하십시오. 이미지를 결합하여 조직 섹션의 플라크를 식별하고 위치를 파악하고 두 개의 서로 다른 필드(밝은 필드 및 UV)에서 전체 섹션을 전체적으로 볼 수 있습니다.
7. 스크리닝 공정이 완료된 후, 면역염색 또는 추가 처리가 수행될 때까지 -20°C에서 검사된 절편을 동결보호제가 포함된 24웰 배양 플레이트에 보관합니다.

재료