Visualization of a Cerebral Thrombus in a Mouse Using Micro-Computed Tomography Imaging(마이크로 컴퓨터 단층 촬영 이미징을 사용한 마우스의 대뇌 혈전 시각화)

Abstract

출처: Kim, D., et. al. 대뇌 혈전색증을 직접 시각화하기 위해 근적외선 형광 이미징과 마이크로 컴퓨터 단층 촬영을 결합했습니다. J. Vis. Exp. (2016)

이 비디오는 마이크로 컴퓨터 단층 촬영(micro-CT) 이미징을 사용하여 마우스의 뇌 혈전을 시각화하는 방법을 보여줍니다. 대뇌 혈전 마우스 모델에는 조영제 역할을 하는 피브린 표적 금 나노 입자가 주입됩니다. 마우스를 마이크로 CT 기계의 침대에 놓고 여러 각도에서 이미지를 획득합니다. 적절한 소프트웨어를 사용하여 이미지를 재구성하고 처리합니다.

Protocol

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 형광 마커로 표지된 외인성 응고의 준비(그림 1)

1. 30% 산소(1.5L/min, 100% 산소)와 혼합된 3% 이소플루란을 사용하여 유도 챔버에서 마우스를 마취합니다. 근육 긴장도를 관찰하고 발가락 핀치 반사가 없는지 확인하여 적절한 마취 깊이를 보장합니다.
2. 동물을 멸균 드레이프에 엎드린 자세로 눕히고 흡입 마스크와 30% 산소와 혼합된 2% 이소플루란을 사용하여 마취 상태를 유지합니다. 무균 기술과 멸균 가운/마스크/장갑/기구를 사용하여 다음 절차를 수행하십시오. 절차 전후에 70% 알코올로 실험 영역을 청소하고 소독하여 멸균 상태를 유지하십시오.
3. 심장 천자 후 약 300 ~ 1,000 μl의 동맥혈을 채취합니다. 70 μl 전혈을 30 μl C15 프로브(20 μmol/L 농도), 활성화된 인자 XIII(FXIIIa) 응고 효소의 피브린 가교 활성에 민감한 Cy5.5 형광 프로브와 혼합하여 응고를 형광으로 표시합니다(그림 1A). 3ml 주사기(23게이지 바늘)를 사용하여 20cm 길이의 폴리에틸렌 튜브(PE-50, ID 0.58mm)에 혼합된 혈액을 주입합니다. PE 튜브는 멸균(또는 제조업....

Results

그림 1: 형광 표지된 혈전의 준비 개요. (A) 혈전 성숙 과정에서 활성화된 응고 인자 XIIIa의 피브린 가교 효소 작용에 의해 혈전의 피브린 가닥에 공유 결합된 Cy5.5 근적외선 형광(NIRF) 프로브(C15)와 신선한 전혈의 혼합. 혼합된 혈액을 폴리에틸렌(PE)-50 튜브에 주입하고 혈전 형성 및 성숙을 위해 24시간 동안 방치합니다. (B) C15 프로브로 혈전의 광학 표지를 확인하기 위한 NIRF 이미징. PE 튜.......

Materials