쥐에서 신경 활동의 억제 및 전기생리학을 사용한 검출

초록

출처: Lai, J., et al. 설치류 뇌에서 억제제의 동시 전기생리학적 기록 및 미세 주사. J. Vis. 경험. (2015년)

이 비디오는 쥐 상골에서 동시 신경 기록 및 억제를 위한 미세 주입 기반 기술을 보여줍니다. 이 절차에는 정위 표적화, 두개골 드릴링, 신경 활동을 기록하면서 억제성 신경 전달 물질을 전달하는 주사대 삽입이 포함됩니다. 빛 자극은 활동 전위를 유발하는 반면 약물 미세 주사는 신경 흥분성을 억제합니다. 신경 전달 물질 수치가 감소함에 따라 신경 활동이 기준선으로 돌아가 억제와 회복에 대한 연구가 가능해집니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 기록 주입 피펫 조립

1. 피펫 풀러를 사용하여 약 7cm 길이의 유리 모세관(외경 1mm)을 당깁니다.
2. 모세관의 끝을 부수고 광학 현미경으로 조리개를 확인하십시오. 내경이 30μm에서 40μm 사이인지 확인합니다.
3. 유리 피펫의 가늘어지지 않은 끝에서 약 1cm 돌출된 7cm 길이의 은선을 유리 모세관에 삽입합니다.
4. 여분의 필라멘트를 유리 모세관에 직교로 구부립니다.
5. 30G 피하 주사 바늘의 샤프트에 유연한 플라스틱 접착제 방울을 도포합니다.
6. 그림 1에 제시된 회로도에 따라 유리 피펫에 30G 피하 주사 바늘을 삽입합니다.
7. 유리 피펫과 피하 주사 바늘 사이의 접합부에서 적절한 밀봉을 보장하기 위해 접착제의 두 번째 코팅을 추가합니다.
8. 접착제가 적절하게 경화되도록 팁이 위쪽을 향하도록 피펫을 약 12시간 동안 건조시킵니다. 완성된 결과는 그림 2에 나와 있습니다.

참고: 이 절차는 급성 실험에서 수행되며 피펫 팁의 멸균이 필요하지 않습니다.

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결과

그림 1: 인젝트로드 어셈블리의 개략도. 마이크로 주사기(A)는 유리 피펫(D) 내부의 은선(C)에 부착된 30G 피하 주사 바늘(B)으로 구성된 기록 주입 피펫에 부착됩니다. 동그라미로 표시된 영역(EF)은 누출에 취약할 수 있는 영역을 강조 표시합니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
주입 펌프(UltraMicroPump III)	WPI	#UMP3
주입 콘솔(Micro4 컨트롤러)	WPI	#SYS-MICRO4
해밀턴 주사기	Hamliton	(80301) 701LT 10 μL SYR	5-10 μL 사이의 주사기 사용
젤 시아노아크릴레이트 접착제	Krazy Glue	KG86648R	형태는 30G 피하 주사 바늘의 샤프트에 적용하기가 더 쉽습니다
. 유리 피펫	WPI	#TW100F-4	얇은 벽, 1mm OD, 필라멘트 피펫이 있는 0.75mm ID 사용
720 바늘 피펫 풀러	Kopf	720
실버 와이어	A-M Systems, Inc.	782500	베어 0.010"

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