유전자 발현을 평가하기 위한 마우스 척수에서 연막하 유전자 전달

초록

출처: Tadokoro, T., et al. 성인 마우스에서 연하 아데노 관련 바이러스 9(AAV9) 벡터 전달. J. Vis. 경험. (2017년)

이 비디오는 마우스의 척수에 유전자 전달을 위한 연막하 주입 기술을 보여줍니다. 이 절차에는 경막을 노출시키고, 연막을 천공하고, 형광 단백질 발현 유전자를 운반하는 재조합 아데노 관련 바이러스(rAAV)를 연막하 공간에 주입하는 과정이 포함됩니다. 주사 및 회복 후 바이러스는 척수 세포의 유전자 발현을 촉진하여 표적 유전자 발현을 연구할 수 있습니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 일반 동물 및 수술 준비

1. 수술 절차를 시작하기 전에 바이러스를 해동합니다(AAV9-UBI-GFP [UBI: UBIQUITIN PROMOTER, GFP: GREEN FLUORESCENT PROTEIN]; 5 μL 분취량). 증류수에 덱스트란 분말을 혼합하여 5% 덱스트란(10,000MW) 용액을 준비합니다. 바이러스 용액을 5% 덱스트란 용액과 1:1로 혼합하여 최종 덱스트란 농도를 2.5%로 만듭니다.
   1. 바이러스 용액을 얼음(4°C)에 보관합니다.
2. 성체 C57BL/6J 마우스(수컷 및 암컷, 20-30g)를 사용하십시오. 5% 이소플루란(O₂, 1 L/min)을 사용하여 마우스를 마취하고 호흡수 및 발 꼬집기 반응에 따라 수술 중 코콘에 의해 2-3% 흡입 이소플루란(O₂, 1 L/min)으로 유지합니다.
3. 면도 가위로 동물의 등을 면도하고 2% 클로르헥시딘으로 피부를 깨끗이 닦습니다.
4. 만성 회복 연구에서는 엄격한 멸균 기술을 따르십시오.
5. 요추 연막하 주사를 시행하는 경우 ....

결과

그림 1: 성인 마우스에서 척추 연막하 주사를 수행하기 위한 실험적 설정. (A) 성체 마우스에서 척추 연막하 주사를 수행하기 위해 두 개의 개별 XYZ 조작기(I 및 II)가 사용됩니다. (B) 각 매니퓰레이터의 Z-암에는 유리 모세관 홀더가 있습니다. 하나의 모세관 홀더는 연막을 관통하는 34G 바늘을 고정하고 두 번째 홀더는 뭉툭한 3.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
C57BL/6J 마우스	잭슨 연구소	664
실험실 마우스용 표준 정위 고정 하	버드 장치	72-9568
마우스 척추 어댑터	하버드 장치	72-4811
XYZ 매니퓰레이터	Stoelting	51604
수동 주입 펌프	Stoelting	51218
34G 경사진 나노필 바늘	월드 정밀 기기	NF34BV-2
36G 무딘 나노필 바늘	월드 정밀 기기	NF-36BL-2
플루리소, 이소플루란	MWI 수의학 공급	502017
클로르헥시딘 용액	MWI 수의학 공급	501027
20G 스테인리스 스틸 바늘	Becton-Dickinson	305175
23G 스테인리스 스틸 바늘	Becton-Dickinson	305145
30G 스테인리스 스틸 바늘	Becton-Dickinson	305128
면 팁 어플리케이터	MWI 수의학 공급	27426
유리 모세관 베벨러	나리시게 인터내셔널	SM-25B
슬라이드 현미경 슈퍼프로스트	라이카 마이크로시스템	M80
50μl 마이크로시린지	해밀턴	81242
BD 인트라메딕 PE-20 튜빙	벡톤, 디킨슨	427406
BD Intramedic PE-10 튜빙	Becton, Dickinson	427401
4-0 모노필라멘트 봉합사	VetOne	V1D397
유리 모세관 베벨러	Narishige	피펫 마이크로 그라인더 EG-40
5분 에폭시(에폭시 클리어)	Devcon	14310
덱스트란	폴리사이언스, Inc	19411
AAV9-UBC-GFP	UCSD 바이러스 벡터 코어 연구소