고밀도 지단백질 모방 나노입자에 신경 성장 인자 캡슐화

초록

출처: Zhu, J., et. al., 신경 성장 인자 캡슐화를 위한 새로운 HDL 모방 나노입자의 준비 및 특성화. J. Vis. 경험. (2017년)

이 비디오는 잠재적인 신경 영양 전달 응용 분야를 위해 프로타민 보조 캡슐화 및 지질 기반 자가 조립을 사용하여 NGF 로딩 HDL 모방 나노입자의 단계적 조립을 보여줍니다.

프로토콜

1. NGF HDL 모방 나노입자의 제조

부

1. 형제, 포스파티딜콜린(PC), 스핑고미엘린(SM), 포스파티딜세린(PS), 콜레스테릴 올리에이트(CO) 및 D-α-토코페릴 폴리에틸렌 글리콜 숙시네이트(TPGS)를 에탄올에 용해시켜 1mg/mL의 원액을 제조합니다.
   참고: 원액을 분주하여 -20°C에서 보관했습니다. 콜레스테릴 올리에이트는 어두운 병에 보관되었습니다. PC, SM, PS 및 CO 원액은 -20°C에서 각각 최대 6개월, 3개월, 12개월 및 12개월 동안 안정적이었습니다. TPGS 용액은 -20°C에서 최소 12개월 동안 안정적이었습니다.
2. 10 μL의 NGF(1 mg/mL in water)와 10 μL의 protamine USP(1 mg/mL in water)를 1.5 mL 미세 원심분리기 튜브에 혼합하고 실온에서 10분 동안 방치하여 복합체를 형성합니다.
   참고: NGF 및 프로타민 스톡 용액을 분취하여 -20°C에서 보관했습니다. NGF 스톡에 대해 반복적인 동결 및 해동은 권장되지 않습니다.
3. 59μL의 PC, 11μL의 SM, 4μL의 PS, 15μL의 CO 및 45μL의 TPGS를 유리 바이알에 첨가합니다. 약 5분 동안 부드러운 질소 흐름 하에서 에탄올을 혼합하고 증발시킵니다. 모든 부형제는 유리 바이알 바닥에 기름진 얇은 막을 형성해야 합니다.
4. 바이알에 초순수(유형 1) 물 1mL를 넣고 실온에서 5분 동안 9,500rpm(8,600 x g)으로 균질화하여 프로토타입 나노입자(NP)를 형성합니다.
5. 1.2단계에서 제조된 복합체를 프로토타입 NP에 첨가하고 유리 바이알에 작은 교반 막대를 사용하여 교반하면서 37°C에서 30분 동안 배양합니다.
6. 실온에서 30분 더 저어주어 NP를 식힙니다. 냉각된 후 106μL의 Apo A-I(1.49mg/mL)를 첨가하고 실온에서 밤새 저어주어 최종 NGF HDL 모방 NP를 형성합니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
재조합 인간 베타-NGF	크리에이티브 바이오마트	NGF-05H
L-a-포스파티딜콜린(PC)	Avanti	131601P	95%, 계란, 치킨
스핑고미엘린(SM)	Avanti	860062P	Brain, 돼지
포스파티딜세린(PS)	Avanti	840032P	뇌, 돼지
콜레스테릴 올리에이트(CO)	시그마	C9253
D-α-토코페릴 폴리에틸렌 글리콜 숙시네이트(TPGS)	BASF	9002-96-4	비타민 E 폴리에틸렌 글리콜 숙시네이트
프로타민 설페이트	시그마	P3369	USP 테스트 사양
을 충족합니다.아포지단백 A1, 인간 혈장	아테네 연구 및 기술	16-16-120101	671 μl 10 mM 중탄산 암모늄, pH 7.4
균질화기	Tekmar	T 25-S1
Polytron 균질화기	Kinematica	PT 1200C

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