마우스 모델에서 뇌부종을 줄이기 위한 수용체 차단제의 정맥 전달

초록

출처: Zeynalov, E. et. al., 지속적인 IV 주입은 뇌졸중 유발 뇌 부종을 연구하기 위한 마우스의 아르기닌-바소프레신 수용체 차단제 Conivaptan에 대한 선택 치료 경로입니다. J. Vis. 경험. (2016년)

이 비디오는 마우스 모델에서 아르기닌-바소프레신(AVP) 수용체 길항제의 정맥 전달을 보여줍니다. 일시적인 중대뇌동맥 폐색은 뇌부종을 유발합니다. AVP 수용체 길항제는 좌경정맥의 카테터를 통해 투여되어 부종을 완화합니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 생체 내 뇌졸중 유도

1. 수술 전에 필라멘트를 치과용 레진으로 미리 코팅합니다.
   1. 12-7 나일론 봉합사에서 0mm 길이의 필라멘트 조각을 자릅니다. 수지 2부와 경화제 1부를 섞은 다음 즉시 필라멘트 끝을 혼합물에 담가 전체 길이의 약 1/3을 덮습니다. 빠르게 제거하고 표면이 매끄러운 치과용 레진 코팅으로 덮여 있는지 확인하십시오.
   2. 사용하기 전에 필라멘트를 2시간 동안 자연 건조
시키십시오.
2. 마우스를 마취 유도 챔버(2L 부피)에 넣고 25% 산소가 풍부한 실내 공기에서 1.5% 이소플루란의 흐름을 챔버로 들어가는 2L/min으로 설정합니다.
3. 꼬리 꼬집음에 대한 반응 부족으로 결정되는 대로 완전히 마취될 때까지 마우스를 유도 챔버에 머물게 합니다.
4. 가열된 패드가 있는 수술대에 마우스를 놓고 노즈콘을 통해 자발적으로 전달되는 마취 유지를 위해 이소플루란 농도를 1%로 설정합니다.
5. 목 앞뒤의 머리카락을 자르고 목에 소독용 알코올을 뿌립니다. 양쪽 눈에 동물용 안과 연고를 바르십시오.
6. 체온을 지속적으로 모니터링하려면 수술 중 디지털 디스플레이에 연결된 직장 온도 프로브를 사용하십시오.
7. 마우스를 누운 자세로 놓고 소독을 위해 포비돈-요오드 10% 스크럽 용액을 바르고 멸균 드레이프로 덮은 다음 크기 10 수술용 메스날로 목을 따라 정중선 절개를 합니다.
8. 6.0 실크 봉합사로 왼쪽 총경동맥(CCA)을 일시적으로 결찰합니다.
9. 왼쪽 외경동맥(ECA)에 또 다른 타이를 놓습니다.
10. 내경동맥(ICA)에 미세혈관 클립을 놓습니다.
11. 미세혈관 가위로 외경동맥에 작은 구멍을 뚫습니다. 치과용 레진으로 코팅된 7-0 나일론 봉합사로 만든 필라멘트를 ECA의 개구부에 삽입하고 저항이 느껴질 때까지(CCA의 분기점에서 약 5-7mm) 클립을 제거하면서 두쪽으로 전진시킵니다.
12. 필라멘트를 제자리에 고정하기 위해 내경동맥에 임시 타이를 놓습니다. 그림 1A의 다이어그램을 참조하십시오. 실크 봉합사로 피부를 봉합하고 2.6단계와 같이 0.5% 부피바카인 0.2ml로 목 앞쪽 상처
에 침투시킵니다.
13. 마우스가 마취에서 깨어나 회복실에서 60분 동안 의식을 회복하도록 합니다. 동물이 흉골 누운 자세를 유지할 수 있을 만큼 충분한 의식을 회복할 때까지 동물을 방치
하지 마십시오.다음과
14. 같이 마우스의 신경학적 결손 점수(NDS)를 테스트합니다: 0 = 정상적인 운동 기능, 1 = 꼬리 들어 올릴 때 몸통 및 반대쪽 앞다리의 굴곡, 2 = 반대쪽으로 원을 그리지만 휴식 시 정상적인 자세, 3 = 휴식 시 반대쪽으로 기울기, 4 = 자발적인 운동 활동 없음.
    1. NDS 테스트의 경우 마우스의 꼬리를 들어 올려 평평한 표면에 놓아 관찰합니다(2-3분). 또는 회복실에서 쥐를 관찰하십시오. 중경동맥(MCA)의 폐색이 불충분하여 NDS가 2 미만인 마우스를 실험에서 제외합니다.
       참고: 레이저 도플러 유량 측정 기술을 사용하여 MCA 폐색을 확인할 수 있습니다.
15. 위에서 설명한 대로 유도실에서 60분 회복 후 동물을 재마취하고, 이전 피부 절개 부위를 10% 포비돈-요오드 스크럽 용액으로 다시 멸균하고, 실크 봉합사를 절단하여 목 앞쪽의 수술 상처를 다시 엽니다.
16. ECA에서 필라멘트를 제거하려면 다음 단계를 수행하십시오.
    1. ICA에 미세혈관 클립을 놓습니다. ICA의 봉합사를 풀고 클립을 연 상태에서 필라멘트를 당겨 빼냅니다.
    2. 클립을 닫고 ECA에 컷 근위부에
    타이를 놓습니다.
    3. CCA에서 클립과 합자를 제거하여 뇌로의 혈류를 복원합니다. 그림 1B의 다이어그램을 참조하십시오.

2. 48시간 연속 치료를 위해 경정맥에 정맥(IV) 카테터 설치

참고

: 마우스를 깨우지 않고 1.16.3단계 직후 카테터 설치를 진행합니다.

1. 두 가지 크기의 유연한 튜브를 사용하십시오: 내부 튜브(외경 0.94mm, 주입되는 약물을 담기 위해)를 외부 튜브(외경 3.18mm, 내부 튜브 보호용)에 삽입합니다.
2. 마우스를 엎드린 자세로 놓고 소독을 위해 10% 포비돈-요오드 스크럽 용액을 바르고 사이즈 10 수술용 메스날로 목 뒤쪽을 1cm 절개합니다. 마우스를 바로 누운 자세로 돌리고 10% 포비돈-요오드 스크럽 용액으로 목 앞쪽을 다시 살균한 다음 목 앞쪽의 수술 상처를 다시 엽니다. 뒤쪽에 절개한 부분에서 목 앞쪽까지 피부 아래 튜브를 터널링하고 열린 상처에서 1cm 외부로 만듭니다.
3. 정중선에서 측면으로 약 1cm 떨어진 목 앞쪽 왼쪽에서 피하 지방 조직을 제거합니다. 왼쪽 경정맥을 찾아 정맥을 따라 5mm 간격으로 두 개의 타이를 놓고 정맥을 약간 늘립니다. 미세혈관 가위로 두 개의 넥타이 사이의 경정맥에 작은 구멍을 만드십시오. 내부 튜브의 끝을 꼬리 쪽(심장 쪽으로) 5mm 깊이로 삽입합니다.
4. 경정맥에 양쪽 타이가 있는 튜브를 고정합니다. 3-0 실크 봉합사로 목 앞쪽의 피부를 닫습니다. 그림 1C의 다이어그램을 참조하십시오.
봉
5. 합사로 튜브를 목 뒤쪽 피부에 고정하고 스위블을 통해 튜브를 미세 주입 IV 펌프에 연결합니다. 회전을 통해 케이지 내부에서 쥐가 자유롭게 움직일 수 있으며 음식과 물에 완전히 접근할 수 있습니다.
6. 수술 후 통증을 예방하기 위해 0.5% 부피바카인 0.2ml로 목 앞뒤의 피부 절개 부위에 침투합니다.
   참고: 기관별 동물 프로토콜에 따라 동물은 수술 전후에 오피오이드, 비스테로이드성 항염증제(NSAID) 또는 항생제로 치료될 수 있습니다. 그러나 언급된 치료는 허혈성 뇌졸중 결과의 결과를 변경할 수 있습니다.
7. 동물이 회복실에서 깨어나도록 한 다음 실험이 끝날 때까지 동물을 별도의 케이지에 가둡니다. 동물이 흉골 누운 자세를 유지할 수 있을 만큼 충분한 의식을 회복할 때까지 동물을 방치
하지 마십시오.
8. 코니밥탄(5% 포도당에서 0.14mg/ml) 또는 비히클의 연속 48시간 IV 치료를 위한 주입 속도를 1.5ml/kg/hr로 설정하고 주입을 시작합니다.
   참고: IV 주입 코니밥탄의 총량은 총 부피 1.44ml에서 약 0.2mg/마우스/일이어야 합니다.

결과

그림 1: 뇌졸중 후 48시간의 실험적 뇌졸중 모델, IV 카테터 설치 및 대표 경색 부피의 다이어그램. 폐색(A) 및 재관류 시간(B) 동안 좌내경동맥(ICA)에 레진(녹색)으로 미리 코팅된 필라멘트(파란색으로 표시)의 위치. 좌경정맥(C)에서 유연한 튜브 팁의 올바른 위치. 마우스의 실험적 뇌졸중은 48시간에 동측 반구에 경색 부...

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
가열 패드	K&H Manufacturing Inc	1060
직장 프로브가 있는 온도 모니터	Physitemp	7029
실크 봉합사 스풀, 6-0	Surgical Specialties Corporation	SP114
바늘에 실크 봉합사, 3-0	Ethicon	1684G
나일론 봉합사, 7-0	Ethicon	1696G
경화제 함유 치과용 레진 폴리실록산	Heraeus Kulzer	65817930
Microinfusion IV 펌프	Kent Scietific	GT0897
스위블 22GA	Instech	375/22PS
실험실 튜브, 0.94 x 0.51 mm	Dow Corning	508-002
실험실 튜브, 3.18 x 1.98 mm	Dow Corning	508-009