마우스 모델에서 신경교세포 재프로그래밍을 위한 바이러스 벡터의 정위 주입

초록

출처: Pereira, M. et. al., 바이러스 벡터의 뇌내 주사에 의한 상주 신경교세포를 인터뉴런으로 생체 내 직접 재프로그래밍. J. Vis. 경험. (2019년)

이 비디오는 형질전환 마우스의 대뇌 피질에 아데노 관련 바이러스를 정위 주사하여 Cre 의존성 뉴런 재프로그래밍 및 형광 리포터 유전자를 신경교세포에 전달하는 방법을 보여줍니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 뇌에 재프로그래밍 인자 주입

1. 동물 설정, 정위 배치 및 드릴링 참고: 이 프로토콜은 NG2(뉴런-신경교 항원 2) 아교세포를 중간 뉴런으로 재프로그래밍하기 위해 Ascl1, Lmx1a 및 Nurr1(ALN)을 사용하는 데 중점을 둡니다. 우리의 경험에 따르면, 유사한 표현형의 중간 뉴런은 다른 요인 조합을 사용하여 얻을 수 있습니다
   정
   1. 위 프레임의 M/L-D/V 팔을 제자리(동물 위)로 이동하고 고정합니다.
      참고: 정위 프레임을 사용하면 전방/후방(A/P, Y 축), 내측/외측(M/L, X 축)을 따라 주사기를 조정할 수 있습니다. 및 등쪽/복부(D/V, Z축) 축.
   2. 정위 고정 프레임의 다른 축을 따라 주사기를 움직여 유리 모세혈관의 끝을 브레그마(서로 다른 두개골판이 만나는 접합점) 바로 위로 가져옵니다.
   3. 모세관 팁이 A/P 및 M/L 평면 모두에서 완벽하게 직선인지 확인하십시오. 모호한 브레그마의 경우 측면 봉합사와 정중선 봉합사의 평균을 취합니다.
   4. 모세관의 끝이 브레그....

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
동물 모델
NG2-Cre 마우스	Jackson	NG2-CrexB6129, 재고 #008533
시약
물
식염수	Apoteket AB		70%
에탄올	Solveco
Isolfurane	Apoteket AB		따뜻한 물로 1% 용액으로 희석
Virkon	Viroderm	7511
Pentobarbital	Apoteket AB	P0500000	RSG의 60 mg/ml
자당	Merck	S0389-500G
Trypan Blu	Thermo Fisher Scientific 15250061
Retrobeads	Lumafluor	R170
Buprenorphine	Apoteket AB
장비			Solingen
가위	VWR	233-1552	생화학
핀셋	VWR	232-0007
겸자	VWR	232-0120
메스 홀더	VWR	RSGA106.621	번호 20
메스	VWR	RSGA106.200
정위 프레임	Stoelting Europe	51500D
마우스 이어 바	Stoelting Europe	51648	5 ul
주사기(탈착식 바늘 포함	Hamilton Company	65	0.75 내경 및 1.5 외경
유리 모세관	Stoelting	50811
유리 모세관 풀러	Sutter 회사	P-1000
치과용 드릴	Agnthos AB	1464
면도기	Agnthos AB	GT420
이소플루란 챔버 및 펌프	Agnthos AB		8323101 2mL
주사기	Merck	Z118400-30EA	25G
바늘	Merck	Z192414 Aldrich
위 프레임용 마우스 및 신생아 쥐 어댑터	Stoelting	51625
가열 패드	Braintree scientific, inc	53800M
면 거즈	Fisher Scientific	22-037-902
고무 튜브	Elfa Distrelec	HFT-A-9.5/4.8 PO-X BK 150
면봉	피셔 사이언티픽	18-366-473

용량의 최종 절차용 ) . 정