마우스 뇌의 TRPV1 탈감작을 위한 Resiniferatoxin을 사용한 뇌실내 치료

초록

출처: Fukushima, A., et al. 생쥐의 Resiniferatoxin을 사용한 뇌실내 치료 및 통증 검사. J. Vis. 경험. (2020년)

이 비디오는 뇌의 TRPV1 수용체를 탈감작화하기 위해 마우스에 레시니페라톡신을 뇌실내 주사하는 절차를 보여줍니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. RTX의 뇌실내 주사

펜

1. 토바르비탈 나트륨염(60mg/kg, 복강내)으로 마우스를 마취하고 교정 반사의 상실을 확인합니다.
2. 뇌실내(i.c.v.) 치료를 위해 5μL의 레시니페라톡신(RTX)(20μg/mL)을 우측심실에 주입합니다. 대조군의 경우 비히클(10% 에탄올, 10% 폴리옥시에틸렌(20) 소르비탄 모노올리에이트 및 80% 인공 뇌척수액(ACSF))을 같은 방법으로 주입합니다.
   1. 일회용 27G 바늘을 금속 튜브(0.8mm ID)에 통과시켜 바늘의 3.0-3.5mm 끝을 노출시킵니다(그림 1A).
   2. 마우스의 머리를 70% 알코올로 소독하고 마우스의 편평 뼈를 손가락으로 단단히 잡습니다(그림 1B). 메모: 편평 돌출부의 위치는 주사의 랜드마크 역할을 하므로 주의하십시오.
   3. 바늘을 두피에서 옆으로 움직이고 바늘 끝이 봉합사에 걸려 시상 봉합사를 찾습니다.
   4. 팁을 오른쪽으로 약 1mm 이동한 다음 팁을 주둥이쪽으로 움직여 관상 봉합사를 찾습니다. (그림 1B).
   5. 바늘을 천천히 수직으로 삽입하고 약 10초 후에 RTX 용액을 주입한 후 약 10초 동안 유지합니다.
   6. 바늘을 천천히 빼내고 마우스를 홈 케이지로 되돌립니다. 출혈은 일반적으로 미미하거나 없습니다. 큰 출혈이 발생하면 다른 마우스 사용을 고려해야 합니다.

결과

그림 1: 뇌내(i.c.v.) 주사의 사진 및 개략도. (A) i.c.v. 주입에 사용되는 바늘. (B) 쥐 두개골의 스키마와 바늘 끝의 움직임. 편평 뼈는 파란색으로 표시됩니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Resiniferatoxin	LKT Laboratories	R1774	s.c./i.c.v. 전처리 및 RTX 테스트
펜토바르비탈 나트륨염	취에 사용되는	도쿄화학공업	P0776
에탄올(99.5%)	와코 퓨어 케미컬 인더스트리	057-00456	RTX 용해에 사용
옥시에틸렌(20) 소르비탄 모노올리에이트	와코 순수 화학 공업	161-21621	용해에 사용
25mL 마이크로시린지	밀턴	1702LT	i.c.v. 주입에 사용
26게이지 일회용 바늘	TERUMO	NN-2613S	i.c.v. 주사용

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