$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.
- 중대뇌동맥폐색(MCAO):
- 마취된 마우스(두개골에 부착된 레이저 도플러 유량계(LDF) 프로브 포함)를 바로 누운 자세로 고정하고 수술 내내 열 램프를 사용하여 체온을 유지합니다. 70% 에틸 알코올로 목을 소독하십시오.
- 메스를 사용하여 목의 정중주위 피부 절개를 합니다. 집게로 연조직을 무뚝뚝하게 해부하여 혈관을 노출시킵니다. 노출된 조직에 식염수 한 방울을 첨가하여 수분을 유지합니다.
- 안과 겸자를 사용하여 주변 조직과 미주 신경에서 총경동맥을 해부합니다. 미주 신경이 손상되지 않도록 주의하십시오. 총경동맥이 노출된 후 요오도포로 목 피부를 다시 소독합니다.
- 총경동맥의 원위 끝에 미세혈관 클램프를 놓은 다음 근위 끝에 6-0 실크 봉합사로 죽은 매듭을 묶습니다. 후속 작업을 위해 클램프를 가능한 한 가까운 곳에 배치하십시오. 클램프와 데드 매듭 사이의 용기 길이가 후속 작업을 위해 가능한 한 길어야 합니다.
- 느슨한 매듭을 묶어 클램프 근위부에 임시 봉합사를 만듭니다. 모노필라멘트 삽입을 위해 두 매듭 사이에 충분한 공간이 있는지 확인하십시오.
- 미세 안과용 가위로 두 매듭 사이에 작은 세로 절개를 합니다. 후속 수술을 위해 절개 부위가 죽은 매듭에 최대한 가까운지 확인하십시오. 용기가 잘리지 않도록 주의하십시오.
- 절개 부위를 통해 12mm 팁이 무딘 모노필라멘트를 삽입하여 동맥 내강으로 들어가 몇 mm 전진시킵니다. 모노필라멘트 끝 주변의 느슨한 매듭을 조인 다음 클램프를 제거합니다.
- LDF 소프트웨어가 혈류의 급격한 감소(기준선 혈류에서 >80% 감소)를 보일 때까지 안과 겸자를 사용하여 필라멘트를 내경동맥(중대뇌 동맥을 폐색하기 위해 10mm)으로 전진시킵니다. 폐색 시작 시간을 기록합니다.
- 중대뇌동맥을 1시간 동안 폐색합니다. LDF 프로브를 절단하고 폐색 기간 동안 마우스를 30°C 인큐베이터에 넣습니다.
- 재관류 및 산성 후처리(APC):
- 폐색 시작 시간 55분 후에 위에서 설명한 대로 이소플루란으로 동물을 재마취합니다. 마우스를 바로 누운 자세로 놓고 고정합니다. 목 절개 부위를 열고 총경동맥을 다시 노출시킵니다.
- 폐색 기간 후 안과 겸자로 필라멘트를 부드럽게 당겨 재관류를 달성하고 매듭을 조여 임시 봉합사를 영구 봉합사로 바꿉니다.
- 산증 치료의 경우, 재관류 후 5분, 50분 또는 100분에 5분 동안 노즈콘에서 흡입하는 가스를 20% CO2, 20%O2 및 60% N2를 함유한 가스의 혼합물로 변경합니다. 중단된 수술용 봉합사로 절개 부위를 봉합합니다.
- 쥐가 의식을 회복할 때까지 쥐를 30°C 열 케이지에 넣은 다음 쥐를 깨끗한 개별 케이지로 돌려보냅니다. 쥐에게 페트리 접시에 물과 축축한 음식을 제공하십시오. 수술 후 과도한 통증과 사망에 대해 마우스를 면밀히 모니터링하십시오.