운동 종판을 따라 근육 주사를 통해 추적자를 쥐 운동 뉴런으로 직접 셔틀

초록

출처: Mohan, R., et al. 운동 종판을 따라 근육 주사: 추적자를 운동 뉴런으로 직접 셔틀하는 최소 침습적 접근 방식. J. Vis. 경험. (2015년)

이 비디오는 모터 종판(MEP)에서 근육 주사를 통해 형광 뉴런 추적자를 운동 뉴런으로 표적으로 전달하는 방법을 보여줍니다. 쥐를 준비하고, 추적자를 주입하고, 신경 치료 잠재력에 대해 표지된 운동 뉴런을 평가하는 것과 관련된 단계를 간략하게 설명합니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 모터 엔드 플레이트에서 근육 주사

1. 마이크로피펫 풀러로 유리 마이크로피펫을 당깁니다(플런저가 있는 등급이 매겨진 마이크로피펫 사용을 권장함). 해부 현미경을 사용하여 마이크로피펫 내강의 내경이 약 0.5mm가 되도록 한 쌍의 집게로 마이크로피펫의 끝을 부수십시오.
2. 사용된 모든 수술 기구가 새로 고압멸균되었는지, 수술 부위가 멸균되어 있는지 확인하십시오.
3. 마이크로피펫에 Fluoro-Gold(증류수에 5%)를 채웁니다.
4. 유도 챔버에서 Isoflurane(O₂에서 4%)을 사용하여 동물에게 마취를 유도합니다. 교정 반사를 확인하고 유도 챔버에서 제거하기 전에 반사가 없는지 확인하십시오. 쥐의 위에 노즈콘을 고정하고 마취 유지를 위해 이소플루란(O₂에서 2%)을 전달합니다. 동물의 발가락을 꼬집고 동물의 눈을 부드럽게 만져 페달 철회와 각막 반사가 모두 없는지 확인합니다.
   참고: 케타민과 자일라진의 혼합물도 사용할 수 있습니다(각각 80 및 10mg/kg, 복강 내 전달). 케타민은 스케줄 8("통제") 약물이며 약물의 구매, 사용, 보관 및 폐기와 관련된 필수 프로토콜을 준수해야 합니다.
5. 시술 중 눈의 건조를 방지하기 위해 눈 윤활제를 바르십시오.
6. 대상 팔다리를 면도하고 거즈를 사용하여 클로르헥시딘과 70% 알코올을 번갈아 세 번 번갈아 가며 면도 부위를 닦습니다. 동물을 수술 부위로 옮깁니다.
7. 동물을 깨끗한 언더패드 위에 놓고 대상 근육에 잘 접근할 수 있도록 적절하게 배치합니다.
8. 치아 그립이 있는 한 쌍의 집게를 사용하여 대상 근육 위의 피부를 밑에 있는 근육 조직에서 들어 올리고 수술용 가위로 피부를 절개합니다. 절개 부위가 관심 있는 근육을 완전히 노출시킬 수 있을 만큼 충분히 큰지 확인하십시오. 근막에 대한 중단을 최소화하십시오.
9. 모터 엔드 플레이트(MEP) 사진을 사용하여 MEP 영역의 위치와 모양을 근육에 정신적으로 전치합니다.
   참고: 미세한 펠트 마커는 사진에서 관심 있는 근육으로 MEP 영역을 재현하는 데 도움이 될 수 있습니다.
10. MEP 영역의 전체 길이를 따라 여러 번 주입을 수행합니다(Fluoro-Gold의 경우 각각 1-2μl씩 3-4회 주입하면 충분함). 근육을 부드럽게 닦아 스며드는 부분을 제거합니다.
11. 절개한 피부의 양쪽 끝을 무딘 겸자로 가깝게 가져오고 수술용 클립으로 상처를 봉합합니다. 상처의 전체 범위를 따라 0.1ml 부피바카인(물 중 0.5%)(또는 기타 국소 마취제)
을 침투시킵니다.
12. 마취 기계를 끄고 동물이 마취에서 완전히 회복될 때까지 동물을 모니터링하십시오.
13. 근육 주사 투여와 동물 관류 사이에 14일 동안 기다리십시오.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Fluoro-Gold	Fluorochrome, LLC	5%로 희석	Drummond
PCR 마이크로피펫 1-10 μl	Drummond Scientific	5-000-1001-X10	런저 포함
Isothesia	Provet	ISOF00	1000 mg/g 이소플루란 흡입 증기
오토클립 9mm 상처 클립	텍사스 사이언티픽 인스트루먼트, LLC	205016

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