신경 보호를 위한 쥐 모델의 비침습적 사지 허혈 전처리

초록

출처: Brandli, A. 원격 사지 허혈 전처리: 설치류의 신경 보호 기술. J. Vis. 경험. (2015년)

이 비디오는 전신 신경 보호를 유도하기 위한 쥐의 비침습적 사지 허혈 전처리 프로토콜을 보여줍니다. 이 절차에는 제어된 동맥 폐색 및 재관류가 포함되며, 보호 인자를 방출하는 세포 스트레스 경로를 유발합니다. 이러한 요인은 뇌 및 망막과 같은 원격 기관의 허혈성 및 대사 손상에 대한 저항력을 향상시킵니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 동물 준비

참고 사항: 가벼운 부상을 입을 동물은 원격 허혈 전날 밤에 어두운 적응이 필요합니다. 가벼운 손상을 입은 동물은 어두운 사육이 필요합니다(12시간 빛: 암흑 주기, 5럭스)

1. 깨어 있거나 마취된 설치류에서 원격 허혈을 수행합니다. 동물의 건강한 근긴장도를 가지고 있는지 확인하십시오. 상부 뒷다리를 꼬집어 적절한 근육이 있는지 확인하여 이를 확인하십시오. 가벼운 부상에 대한 RIP 유도 보호는 생후 6개월까지 앉아서 생활하는 쥐를 대상으로 테스트되었습니다.
2. 원격 허혈 전처리(RIP)를 위한 마취 준비
   1. 쥐에게 60mg/kg 케타민 및 5mg/kg 자일라진을 복강내 주사합니다. 다리를 펴고 발 밑의 피부를 꼬집어 마취의 깊이를 확인합니다. 동물은 깊은 마취를 하면 반사가 없습니다. 마취 상태에서 각막 건조를 방지하기 위해 인공 눈물을 바르십시오.
   쥐
   2. 를 가열 패드 또는 순환 온수기 튜브 위에 올려 37.5°C의 일정한 체온을 유지합니다. 하지의 발 패드가 위를 향하도록 쥐를 엎드린 자세로 눕힙니다. 오른쪽 또는 왼쪽 사지가 원격 허혈을 겪을 수 있습니다.

2. 피부 온도 프로브의 적용

1. 허혈을 겪을 쥐의 다리를 펴고 피부 프로브를 발판에 놓습니다. 온도 프로브와 피부 사이의 접촉을 최대화하도록 피부 프로브를 배치합니다. 프로브를 발판에 단단히 밀어 넣고 종이 테이프로 프로브를 부착합니다.
2. 온도 기록 소프트웨어에서 온도를 추적하여 스킨 프로브 배치를 확인하십시오. 피부 온도가 30-34°C 사이이고 안정적으로 유지되는지 확인하십시오. 1-2분 동안 피부 온도를 추적합니다. 온도가 불안정하거나 30°C 미만인 경우 스킨 프로브를 조정하십시오.

3. 원격 허혈

1. : 커프의 공기를 빼고 공기압 밸브가 닫혀 있는지 확인합니다. 다리를 펴고 뒷다리 상부의 커프를 느슨하게 감싸십시오. 집게손가락과 엄지손가락을 사용하여 다리를 펴고 아래쪽 손가락을 사용하여 느슨한 커프를 제자리에 유지합니다.
2. 마취된 동물의 커프 압력을 160mmHg로 올리고, 깨어 있는 동물의 경우 커프 압력을 180mmHg로 올립니다.
   참고: 쥐의 마취된 혈압은 120-140mmHg 범위이며 의식이 있을 때 160mmHg까지 상승합니다. 올바른 압력에 도달하면 타이머 및 발 온도 기록을 시작합니다.
   참고: 발 온도는 2분 동안 일정한 압력을 가한 후 5°C 떨어져야 합니다.
3. 허혈 내내 동물의 "무릎" 위에 커프의 위치를 유지하십시오. 커프 압력은 몇 분 후에 또는 쥐의 팔다리가 움직이면 떨어지기 시작합니다.
4. 원하는 커프 압력을 유지하기 위해 팽창 전구를 짧은 버스트로 반복적으로 펌핑
합니다. 원격
5. 허혈은 5분에서 15분 사이 지속적으로 전달될 수 있습니다. 허혈 재관류 프로토콜에는 5분 재관류가 중간에 있는 5분 허혈의 2개 기간이 포함됩니다.
6. 공기압 밸브를 풀어 커프 압력을 낮춥니다. 허혈 프로토콜 과정에서 온도 변화를 확인하십시오. 커프를 풉니다.
7. 부상 실험을 계속하십시오. 마취 효과를 받는 동물은 열 패드 위에 올려 놓아야 합니다. 걸을 수 있을 때까지 동물을 계속 모니터링하십시오. 동물은 걷기 전까지는 집으로 돌려보낼 수 없습니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Gold series DuraShock 핸드 아네로이드 혈압계	Welch Allyn	DS56	수동 혈압계
신생아 [크기 2] 1 튜브, 10 팩	Welch Allyn	5082-102-1	사지 혈압 커프
루어 잠금 어댑터	Welch Allyn	5082-178	신생아 커프용 어댑터
서미스터 포드	AD Instruments	ML 309	피부 온도 장치
피부 온도 프로브	AD Instruments	MLT 422/A
Powerlab, 4채널 획득 하드웨어	AD Instruments	PL 35044	피부 온도 레코더
Isoflo - 100% 이소플루란 -250ml	Abbot Animal Health	05260-05	선택 사항: 흡입 마취 원격 허혈
케타밀 - 케타민 100 mg/ml - 50 ml	Troy Laboratories Pty Ltd		선택 사항: 주사 가능한 마취 원격 허혈
자일륨 - 자일라진 100 mg/ml - 50 ml	Troy Laboratories Pty Ltd		선택 사항: 주사 가능한 마취 원격 허혈