도파민 부하 엑소좀 캐리어 시스템 공식화

초록

출처: Yavuz, B., et al. 엑소좀 기반 도파민 운반체 시스템 공식화 및 특성화. J. Vis. 경험. (2022년)

이 비디오는 엑소좀 내에서 도파민 캡슐화를 향상시키기 위해 사포닌 유도 막 투과화에 초점을 맞춘 도파민 로드 엑소좀의 제형을 보여줍니다.

프로토콜

1. 엑소좀에 도파민 로딩

참고: Wharton's Jelly 중간엽 줄기 세포(WJ-MSC) 엑소좀의 특성화가 완료된 후 약물 전달 시스템으로 도파민 로딩 엑소좀을 얻었습니다. 엑소좀으로의 약물 로딩은 배양 방법을 사용하여 수행됩니다.

1. 엑소좀 현탁액에 인산염 완충 식염수(PBS) 3mL를 첨가합니다. 0.22μm 필터를 사용하여 여과하여 희석된 현탁액을 멸균합니다. 멸균된 엑소좀 현탁액 500μL를 다른 튜브로 옮깁니다.
증
2. 류수로 도파민 용액(0.5mg/mL)을 준비합니다. 엑소좀이 들어 있는 튜브에 500μL의 도파민 용액을 첨가합니다.
3. 1.2단계의 현탁액에 사포닌을 첨가합니다. 준비된 엑소좀-도파민 현탁액을 37°C에서 24시간 동안 배양합니다. 참고: 사포닌 농도는 전체 용액의 0.002%를 초과해서는 안 됩니다.
현
4. 탁액을 90,000 × g에서 70분 동안 초원심분리하여 배지에서 유리 도파민과 사포닌을 제거합니다. 분리된 엑소좀은 추가 분석을 위해 사용할 때까지 -20°C에서 보관합니다. 메모: 준비된 도파민 용액의 안정성을 위해 0.02% 아스코르브산을 첨가합니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
0.22 μm 멤브레인 필터	Aisimo		멸균 공정에 사용 15
mL Falcon tube	Nest		세포 배양 단계에 사용
50 mL Falcon tube	Nest		세포에 사용 배양단계
원심	타치	CF16RN	소좀 분리단계에 사용
H8502-10G	시그마	H8502-10G	엑소좀 도파민 로딩에 사용
티마 XPN-100 초원심분리기	Beckman Coulter		소좀 분리단계에 사용
PBS 정제	Biomatik	43602	PBS 용액의 제조에
사포닌	시그마	47036-50G-F	엑소좀 도파민 로딩 과정에서 전액에 첨가하여 사용하였다.
와튼 젤리 중간엽 줄기 세포	ATCC

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