이 비디오는 중대뇌동맥 폐색 마우스 모델에서 테스트 화합물의 신경 보호 효과를 평가하는 절차를 보여줍니다. 이 화합물은 뇌에 들어가 신경 사멸을 예방하고 경색 부피를 줄여 치료되지 않은 마우스에 비해 신경 보호 효과를 확인합니다.
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방법 논문
중대뇌동맥 폐색 마우스 모델에서 시험 화합물의 신경 보호 효과 평가
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2025년 8월 7일
이 논문에서
초록
프로토콜
동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.
1. 중대뇌동맥폐색(MCAO)의 마우스 모델생
- 후 6주, 체중 22-25g의 수컷 C57BL/6 마우스를 사용합니다. 모든 동물에게 표준 차우와 물을 무료로 제공하고 온도(22±1°C)가 제어되고 12시간의 명암 주기가 있는 환경에 사육합니다.
- 마우스를 각각 6마리의 마우스 그룹으로 나누며, 이는 가짜 수술로 수술된 정상군, 대조군 및 GRex(Glycyrrhizae Radix et Rhizoma) 치료군으로 구성되어야 합니다.
- 실체 현미경을 사용하여 대조군 및 GRex 치료군에 대해 MCAO 수술을 수행합니다.
- 70% 아산화질소(N₂O) 및 30% 산소(O₂)에 2% 이소플루란을 사용하여 마우스에 흡입 마취를 유도합니다. 마취는 마우스가 꼬리에 가해지는 기계적 자극에 반응하지 않을 때 충분한 것으로 간주됩니다. 체온계에 연결된 체온 유지 담요를 사용하여 마우스의 체온을 36.5 ± 0.5 °C로 유지합니다.
- 면도하여 쥐의 가슴과 목에 있는 털을 모두 제거한 다음 제모 크림을 사용합니다. 베타딘 스크럽과 알코올을 번갈아 가며 피부의 수술 부위를 2회 소독한 후 목 중앙에 수술용 칼날로 약 2cm 길이의 절개를 합니다. 좌측 총경동맥(LCCA), 외경동맥, 내경동맥 가지를 주변 결합 조직에서 조심스럽게 분리합니다.
- 수술 중 내경동맥으로의 혈류를 일시적으로 차단하기 위해 수술용 봉합사(4-0 실크 봉합사, 하프 히치 매듭)로 외경동맥과 총경동맥을 결찰합니다.
- 실리콘 코팅 나일론 봉합사(8-0 모노필라멘트, 길이 11mm)를 내경동맥을 통해 왼쪽 MCA의 기점까지 삽입합니다. 필라멘트의 실리콘 코팅 부분의 두께를 0.10-0.12mm 범위로 조정합니다.
- 레이저 도플러 유량계를 사용하여 MCA에서 상대 뇌 혈류(rCBF)의 감소를 측정합니다. MCAO는 rCBF가 전체 허혈 기간 동안 휴식 상태 값의 < 20%로 유지될 때 확인됩니다.
- 삽입된 필라멘트를 대뇌 동맥이 폐색된 상태에서 2시간 동안 혈관에 고정한 다음 필라멘트를 조심스럽게 빼내어 22시간 동안 혈류를 회복시킵니다. 5개소(실크 봉합사 3-0개, 반 매듭 2개)를 꿰매어 피부를 봉합하고 각 마우스가 마취에서 깨어나도록 합니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| Glycyrrhizae Radix et Rhizoma | Gwangmyoung Pharmaceuticals Co., Korea | ||
| 실체 현미경 | Leica | M50 | |
| Stereo Microscope | Nikon | SMZ745 | |
| 레이저 도플러 | 무어 기기 | moorVMS-LDF | |
| N₂O 및 O₂ 유량계 시스템이 있는 마취 탁상용 브래킷 | Harvard Appratus | 34-1352 | |
| 항온열 모니터링 시스템 | Harvard Appratus | 55-7020 | |
| 마우스 다이어트 | 두열 바이오텍 | 표준 설치류 차우 | |
| 이소플루란 | 중와A02104781 | ||
| 이소플루란 | TROIKAA | ISOTROY 100 | |
| 실크 봉합사 (4-0 블랙 실크) | 에일리 | SK47510 | |
| 실크 봉합사 (3-0 화이트 실크) | 백재 | 57 | |
| 나일론 봉합사 (8-0 모노필라멘트) | 에일리 | NB825 | |
| 겸자 | 정밀과학도구 | 11241-30 | |
| 겸 | 정밀과학도구 | 11254-20 | |
| 겸자 | 정밀과학 | 11260-20 | |
| 파인 겸자 | 밀과학도구 | 11274-20 | |
| 수술용 가위 | 파인 과학 도구 | 14001-12 | |
| 엑스트라 파인 본 가위 | 파인 과학 도구 | 14084-08 | |
| Moria Pascheff-Wolff 스프링 가위 | 파인 과학 도구 | 15371-92 | |
| 혈관 확장 겸자 | 파인 과학 도구 | 18153-11 |
