중대뇌동맥 폐색 마우스 모델에서 시험 화합물의 신경 보호 효과 평가

초록

출처: Lee, SE, et al. 일시적인 중대뇌동맥 폐색 마우스 모델을 사용하여 Glycyrrhizae Radix et Rhizoma 추출물의 신경 보호 효과 평가. J. Vis. 경험. (2018년)

이 비디오는 중대뇌동맥 폐색 마우스 모델에서 테스트 화합물의 신경 보호 효과를 평가하는 절차를 보여줍니다. 이 화합물은 뇌에 들어가 신경 사멸을 예방하고 경색 부피를 줄여 치료되지 않은 마우스에 비해 신경 보호 효과를 확인합니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 중대뇌동맥폐색(MCAO)의 마우스 모델생

1. 후 6주, 체중 22-25g의 수컷 C57BL/6 마우스를 사용합니다. 모든 동물에게 표준 차우와 물을 무료로 제공하고 온도(22±1°C)가 제어되고 12시간의 명암 주기가 있는 환경에 사육합니다.
   1. 마우스를 각각 6마리의 마우스 그룹으로 나누며, 이는 가짜 수술로 수술된 정상군, 대조군 및 GRex(Glycyrrhizae Radix et Rhizoma) 치료군으로 구성되어야 합니다.
   2. 실체 현미경을 사용하여 대조군 및 GRex 치료군에 대해 MCAO 수술을 수행합니다.
2. 70% 아산화질소(N₂O) 및 30% 산소(O₂)에 2% 이소플루란을 사용하여 마우스에 흡입 마취를 유도합니다. 마취는 마우스가 꼬리에 가해지는 기계적 자극에 반응하지 않을 때 충분한 것으로 간주됩니다. 체온계에 연결된 체온 유지 담요를 사용하여 마우스의 체온을 36.5 ± 0.5 °C로 유지합니다.
3. 면도하여 쥐의 가슴과 목에 있는 털을 모두 제거한 다음 제모 크림을 사용합니다. 베타딘 스크럽과 알코올을 번갈아 가며 피부의 수술 부위를 2회 소독한 후 목 중앙에 수술용 칼날로 약 2cm 길이의 절개를 합니다. 좌측 총경동맥(LCCA), 외경동맥, 내경동맥 가지를 주변 결합 조직에서 조심스럽게 분리합니다.
4. 수술 중 내경동맥으로의 혈류를 일시적으로 차단하기 위해 수술용 봉합사(4-0 실크 봉합사, 하프 히치 매듭)로 외경동맥과 총경동맥을 결찰합니다.
5. 실리콘 코팅 나일론 봉합사(8-0 모노필라멘트, 길이 11mm)를 내경동맥을 통해 왼쪽 MCA의 기점까지 삽입합니다. 필라멘트의 실리콘 코팅 부분의 두께를 0.10-0.12mm 범위로 조정합니다.
6. 레이저 도플러 유량계를 사용하여 MCA에서 상대 뇌 혈류(rCBF)의 감소를 측정합니다. MCAO는 rCBF가 전체 허혈 기간 동안 휴식 상태 값의 < 20%로 유지될 때 확인됩니다.
7. 삽입된 필라멘트를 대뇌 동맥이 폐색된 상태에서 2시간 동안 혈관에 고정한 다음 필라멘트를 조심스럽게 빼내어 22시간 동안 혈류를 회복시킵니다. 5개소(실크 봉합사 3-0개, 반 매듭 2개)를 꿰매어 피부를 봉합하고 각 마우스가 마취에서 깨어나도록 합니다.

재료