쥐 모델에서 급성 전기경련 발작 유도

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 급성 ECS의 유도

참고: 상단 패널의 그림 1B를 참조하십시오.

1. 이어 클립을 멸균 식염수로 적시고 포화 상태인지 확인하십시오.
2. 쥐의 귀를 식염수에 적신 거즈로 싸서 멸균 식염수로 적십니다. 젖으면 거즈를 제거하십시오.
3. 귀당 클립 1개를 부착하고 주 연골 밴드 너머에 위치시킵니다.
4. ECS 시스템에서 실제 루프가 설정되었는지 확인합니다. 그렇지 않은 경우 시스템에 오류 메시지 또는 "1" 판독값이 나타납니다.
5. 두꺼운 비금속 장갑을 착용하십시오. 장갑을 낀 손으로 쥐를 부드럽게 잡은 상태에서 "SHOCK" 버튼을 몇 초 동안 누르고 쥐의 손을 천천히 풀어 발작을 관찰합니다. 가짜 "발작 없음"(NS) 대조군의 경우 쥐를 동일하게 다루되 전류를 전달하지 마십시오.
6. 간대가 시작될 때 이어 클립을 분리하고 "입 및 얼굴 움직임"(1단계), "고개를 끄덕이기"(2단계), "앞다리 간대"(3단계), "앞지 간대로 양육"(4단계) 및 "앞지 간대로 양육"(5단계). 발작은 약 10초 동안 지속되어야 합니다. 타이머를 사용하여 발작 기간을 기록합니다.
7. 발작이 종료된 후 쥐를 집 케이지로 돌려보냅니다. 쥐가 발작에서 회복되었는지 확인하기 위해 5분 동안 쥐를 모니터링합니다. 케이지에 단독으로 보관하고 케이지를 회복실로 돌려보내십시오.
8. 다음 쥐에 대해 ECS 유도를 반복합니다.
9. 실험을 위해 안락사될 때까지 하루 종일 남은 시간 동안, 그리고 적어도 오전에 한 번, 다음날 오후에 한 번 쥐를 모니터링합니다.
   참고: ECS 유도 방법은 우발적인 부작용으로 임상 징후를 유발할 수 있으므로 주의가 필요합니다. 예를 들어, ECS 유도 프로토콜은 15초 이상 지속되는 발작을 유도하고 쥐에게 불필요한 고통을 줄 수 있습니다. 이 경우 디아제팜(10mg/kg, i.p.) 또는 펜토바르비탈(25 - 30mg/kg, i.p.)을 사용하여 발작을 종료합니다. 쥐가 발작 중단 후 호흡 곤란이나 심각한 행동 이상이 나타나면 이산화탄소 흡입 후 참수하여 안락사시킵니다.

그림 1: 급성 ECS 및 만성 ECS 유도를 위한 스키마. (A) 쥐를 귀 클립 전극을 통해 펄스 발생기에 연결하고 전기 충격(55mA, 0.5초 동안 100펄스/s)을 가하여 4-5기 강직-간대 발작을 유도했습니다. (B) 급성 ECS는 한 번의 감전에 의해 유발되었습니다. 만성 ECS는 연속 7일 동안 하루에 한 번의 감전으로 유발되었습니다. 표시된 시점은 급성 ECS 유도 후 지속 기간 또는 해마 해부 전 만성 ECS 유도를 위한 마지막 ECS를 나타냅니다. 가짜 "발작 없음"(NS) 대조군 쥐는 동일하게 취급되었지만 전기 충격을 받지 않았습니다.