ChR2을 표현 성인에서 태어난 뉴런은 후각 신경 회로의 기능들에 대한 그들의 기여를 검토하기 위해 슬라이스 electrophysiological 준비로 조작할 수 있습니다.
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이 논문에서
요약
초록
표준 슬라이스 전기 생리학은 연구자가 전기 또는 약리 조작 1,2에 대한 응답으로 단일 세포의 전기적 반응을 기록하여 신경 회로의 개별 구성 요소를 프로브 수 있습니다. 광학 유전자 타겟으로 뉴런을 (optogenetics) 제어 방법의 발명과 함께, 연구자들은 이제 표준 슬라이스 준비 뉴런의 특정 그룹을 제어할의 전례없는 수준을했습니다. 특히, channelrhodopsin - 2 (ChR2) 감광성의 연구자들이 빛을 3,4과 뉴런을 활성화 할 수 있습니다. 표준 슬라이스 전기 생리학과 ChR2의 LED 기반 photostimulation주의 교정을 결합함으로써, 우리는보다 세부와 후각 망울, 후각 시스템의 첫 번째 중앙 릴레이에 성인 태어나 interneurons의 역할을 탐침 수 있습니다. 성인에서 태어난 뉴런에 특별히 ChR2 - YFP의 바이러스 표현을 사용하여, 우리는 선택 이전의 환경에서 젊은 성인에서 태어난 뉴런을 제어할 수 있습니다D 성숙한 뉴런. 우리 광학 제어는 간단하고 저렴한 LED 시스템을 사용하고, 우리는이 시스템이 더 많은 햇빛이 하나의 뉴런의 활동을 급상승 연상하는 데 필요한 방법을 이해 조정 할 수있는 방법을 보여줍니다. 따라서, 파란색 빛을 짧은 깜박 원격 ChR2 - transduced 신생아 세포의 발사 패턴을 제어할 수 있습니다.
프로토콜
1. 광학 보정 : 측정 LED 전원
- 적극적으로 collimating 렌즈에 팬 부착이 LED / 방열판의 aparatus에 의해 냉각 방열판에 LED 배열을 연결합니다.
- LED / 히트싱크 / 팬 / 렌즈 장치와 brightfield 조명에 사용되는 램프를 교체하십시오. 이 장치는 조심스럽게 collimated LED 광선은 콘덴서 렌즈를 향해 직선 광 경로를 따라 여행 있도록 배치해야합니다. 히트싱크 / 팬 제대로 시스템의 공통 접지에 접지되어 있는지 확인하십시오.
- 현재의 신속하고 사각형 펄스를 줄 수있는 전원 공급 장치와 LED 배열을 드라이브. 이 전원 공급 장치는 펄스 발생기에서 발생하는 5V TTL 펄스에 의해 제어 수 있습니다.
- 필드 다이아 프램과 condensor 렌즈 사이에 정의된 빛의 경로를 따라 센터는 collimated 빔. 이상적으로, LED 광선은 약간 완전히 오픈 필드 다이어프램을 너무 많이 넣다 것입니다. 일반적으로, 더 단단히 collimated LED 빔 덜이 조리개를 채울 것이며, mor을 생산합니다균일의 비용으로 전자 파워. 우리의 설정에 우리는 consenser 다이어프램에의 활용 비행기에서 LED 배열의 약간 확장된 이미지를 투영 collimating 렌즈를 선택하여 빛을 균일 ....
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토론
최근 몇 년 동안은 신경 과학 연구 6 optogenetic 도구의 인기가 폭발을 보았다. 결과적으로, 이러한 새 도구를 사용하여 시작하고자하는 실험실에 대한 항목의 장벽을 낮출 점점 더 중요합니다. 여기서 우리는 channelrhodopsin - 표현 뉴런의 전체 필드 광 자극을 할 수 있도록 기존 패치 - 클램프 장비의 간단하고 저렴한 비용 retrofitting 및 교정을 실시하는 방법을 설명합니다. 특히, 우리는 특별히 빛으로 새로 태어난 뉴런을 제어하는 후각 망울의 성인 neurogenesis의 연구에이 기술을 적용할 수 있습니다.
우리는 LED 광원이 ChR2 활성화에 충분한 전력을 생산하는지 확인하고, 쉽게 뉴런에게 주어진 빛을 복용량을 조절하는 방법을 본질적으로 빠른 ON / LED가 속도에서 입증하는 방법을 보여줍니다. 저희 연구소가 성공적으로이 기술을 사용한 반면, 빛의 각 w의 통제 복용에 신경을 노출하는 다른 방법있다ith 자신의 .......
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공개 사항
관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.
감사의 글
이 작품은 "ERA - NET 신경 세포의 프레임에있는 생명 보험 회사"AG2R 라 Mondiale "가르슈 DES Neurosciences 드 파리 (ENP), 회사 직원 Nationale 드 라 공들인"ANR - 09 - NEUR - 004 "에 의해 지원되었다 "유럽위원회, 그리고 파스퇴르 재단 FP7 프로그램의. ㅁ 와그너는 Letten 재단에 의해 지원되었다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 케타민(Ketamine) | Imalgène 1000 | 100 mg/ml | |
| 자일라진(Xylazine) | Rompun | 2% | |
| NaCl | Sigma-Aldrich | S5886 | &nbps; |
| KCl | Sigma-Aldrich | P5405 | |
| MgSO4 | Sigma-Aldrich | M1880 | |
| NaHCO3 | Sigma-Aldrich | S5761 | |
| NaHPO4 | Sigma-Aldrich | S5011 | |
| 포도당(Glucose) | Sigma-Aldrich | G7021 | |
| CaCl2 | Sigma-Aldrich | C7902 | |
| 아가로스(Agarose) | Sigma-Aldrich | A9539 | |
| 피펫 풀러(Pipette Puller) | Sutter Instrument Co. | P-97 | |
| 유리 모세관(Glass Capillaries) | Harvard Apparatus | GC150T-10 | 1.5 mm O.D./1.17 mm I.D. |
| LED 어레이(LED array) | Bridgelux | BXRA-C2000 | |
| 콜리메이팅 렌즈(Collimating lens) | Thorlabs Inc. | LEDC1 | 40 mm 빔 직경 |
| 전원 공급 장치(Power supply) | A1W Electronik | HKO2800 | 2.8 amp |
| 광출력계(Optical power meter) | Thorlabs Inc. | PM 100 | |
| 방열판(Heatsink) | Thermaltake | A1838 | Silent Boost K8 |
| 냉각팬(Fan) | Thermaltake | A1838 | Silent Boost K8 |
| 바이브라톰(Vibratome) | Leica Microsystems | VT1200S |
참고문헌
- Nissant, A. Adult neurogenesis promotes synaptic plasticity in the olfactory bulb. Nature Neuroscience. 12, 728-730 (2009).
- Apicella, A. Pyramidal Cells in Piriform Cortex Receive Convergent Input from Distinct Olfactory Bulb Glomer....
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재인쇄 및 허가
