이 프로토콜은 세포에서 유리 및 에스테르화된 생체 활성 지방산의 추출 및 분석을 보여줍니다. 지방산은 안정 동위원소 희석, 키랄 액체 크로마토그래피, 전자 포획, 대기 화학 이온화, 다중 반응 모니터링 질량 분석법(SID-LC-ECAPCI-MRM/MS)을 사용하여 정확하게 정량화됩니다.
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이 논문에서
요약
초록
아라키돈산(AA) 및 리놀레산(LA)과 같은 지방산의 대사는 수많은 입체이성체를 포함하여 산화된 생체 활성 지질의 형성을 초래합니다1,2. 이러한 대사 산물은 유리 또는 에스테르화 지방산으로 형성될 수 있습니다. 이러한 산화된 대사 산물의 대부분은 생물학적 활성을 가지고 있으며 심혈관 및 신경 퇴행성 질환, 천식 및 암을 포함한 다양한 질병과 관련이 있습니다3-7. 산화된 생체 활성 지질은 효소 또는 활성산소종(ROS)에 의해 형성될 수 있습니다. 지방산을 대사하는 효소에는 사이클로옥시게나제(COX), 리폭시게나제(LO) 및 시토크롬 P450(CYPs)1,8이 있습니다. 효소 대사는 거울상 선택적 형성을 초래하는 반면 ROS 산화는 제품의 라세미 형성을 초래합니다.
이 프로토콜은 주로 AA 및 일부 LA 유래 생체 활성 대사 산물의 분석에 중점을 둡니다. 다른 지방산의 대사 산물에 쉽게 적용될 수 있습니다. 생체 활성 지질은 액체-액체(L-L) 추출을 사용하여 세포 용해물 또는 배지에서 추출됩니다. l-l 추출 공정 초기에는 시료 전처리 중 오류를 설명하기 위해 안정 동위원소 내부 표준물질이 추가됩니다. 안정 동위원소 희석(SID)은 또한 질량분석법(MS) 분석9 중에 대사 산물이 경험할 수 있는 이온 억제와 같은 차이를 설명합니다. 추출 후 전자 포획(EC) 시약인 펜타플루오릴벤질 브로마이드(PFB)를 사용하여 검출 감도를 높입니다10,11. 다중 반응 모니터링(MRM)은 MS 분석의 선택성을 높이는 데 사용됩니다. MS 분석 전에 키랄 순상 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)를 사용하여 지질을 분리합니다. HPLC 조건은 모니터링된 지질12의 거울상 이성질체와 다양한 입체이성체를 분리하도록 최적화되어 있습니다. 이 특정 LC-MS 방법은 프로스타글란딘(PG), 이소프로스탄(isoP), 히드록시에이코사테트라엔산(HETE), 하이드록시옥타데카디에노산(HODE), 옥소에이코사테트라엔산(oxoETE) 및 옥소옥타데카디에노산(oxoODE)을 모니터링합니다. 그러나 HPLC 및 MS 매개변수는 모든 지방산 대사 산물을 포함하도록 최적화할 수 있습니다13.
현재 사용 가능한 대부분의 생물 분석 방법은 거울상 이성질체의 별도 정량화를 고려하지 않습니다. 이것은 대사 산물이 효소로 형성되었는지 아니면 ROS에 의해 형성되었는지 여부를 추론하려고 할 때 매우 중요합니다. 또한, 거울상 이성질체의 비율은 특정 효소 형성 경로에 대한 증거를 제공할 수 있습니다. SID를 사용하면 대사 산물을 정확하게 정량화할 수 있으며 전처리 중 샘플 손실과 이온화 중에 발생하는 차이를 설명할 수 있습니다. PFB 전자 포획 시약을 사용하면 기존 APCI 방법보다 검출 감도가 두 자릿수 증가합니다. 전반적으로 이 방법인 SID-LC-EC-대기압 화학 이온화 APCI-MRM/MS는 생체 활성 지질에 대한 가장 민감하고 선택적이며 정확한 정량 방법 중 하나입니다.
프로토콜
1. 표준 및 내부 표준 믹스
- 지질 추출 전에 표준 혼합물(SM)과 내부 표준 혼합물(ISM)을 준비해야 합니다. SM의 경우, 보정된 주사기를 사용하여 아래 시약 표에 나열된 각 표준물질(총 25개)의 1μg과 동등한 부피를 10mL 부피 플라스크에 분취합니다. 표준물질을 질소로 건조시키고 10mL의 아세토니트릴(ACN)로 재용해합니다. 표준 혼합물의 최종 농도는 100pg/μL입니다. 1mL 부분 표본으로 나누고 필요할 때까지 -80°C에서 보관합니다.
- 이 표준 혼합물에서 총 7개의 보정 표준(1pg/ μL, 2pg/ μL, 5pg/ μL, 10pg/ μL, 20pg/ μL, 50pg/ μL 및 100pg/ μL)에 대해 6개의 표준 희석을 만들 수 있습니다. 이러한 표준은 정량 분석에 사용되는 검량선을 개발하기 위해 준비된 각 샘플 배치와 함께 실행됩니다.
- ISM의 경우, 아래 시약 표에 나열된 각 IS(총 14개)의 1μg과 동등한 부피를 보정된 주사기를 사용하여 10mL 부피 플라스크에 분취하고 질소로 건조합니다. ACN 10mL에서 ISM을 재구성하고 1mL 부분 표본으로 나눕니다. ISM의 최종 농도는 100pg/μL이어야 합니다. 1000개의 샘플을 처리할 수 있는 충분한 ISM이 있습니다.
- SM 및 ISM은 -80°C에서 보관하십시오.
2. 배지 및 세포 용해물 수집
- 부착 세포 10cm 플레이트당 (~ 1 X 107)에 대해 10mL 유리 원심 분리 튜브에 3mL의 배지를 수집합니다. 다음으로, 인산염 완충 식염수(PBS)로 세포를 2회 세척합니다. PBS 1mL를 플레이트에 추가하고 플레이트에서 세포를 긁어낸 후 두 번째 10mL 유리 원심분리 튜브에 피펫을 넣습니다. 이 시점에서 절차가 계속되지 않을 경우 셀과 미디어가 저장될 수 있습니다. 장기 보관을 위해 -80°C에서 샘플을 보관하거나 일주일 미만 동안 -20°C에서 샘플을 보관하십시오.
3. 미디어에서 지질 추출
- 유리 생체 활성 지질은 세포 배지에서 발견되며 이는 1단계 L-L 추출 절차로 쉽게 추출됩니다. 수집된 배지(2.1)에 10μL의 ISM을 추가합니다. 이때 8개의 추가 10mL 유리 원심분리 튜브에 검량 표준물질에 대해 #0-7로 표시해야 합니다. 각 튜브에 PBS 3mL를 추가한 다음 튜브 1-7(1.1에서 1-7)에 적절한 SM 10μL를 추가합니다.
- ISM이 각 보정 표준물질 및 샘플에서 10분 동안 평형을 이룰 때까지 기다린 다음 5mL의 디에틸 에테르를 추가합니다. 그런 다음 샘플과 보정 표준물질을 실온에서 30분 동안 저속으로 셰이커에 넣습니다.
- 진탕 후 모든 보정 표준물질과 샘플을 1935 x g에서 10분 동안 원심분리합니다. 다음으로, 파스퇴르 피펫을 사용하여 상상(유기)을 새로운 10mL 유리 원심분리 튜브로 옮기고 질소로 건조시킵니다.
4. 세포 용해물에서 지질 추출
- 유리 원심분리기 튜브의 세포 샘플을 1935 X g에서 5분 동안 스핀다운합니다. 상층액을 폐기하십시오. 각 튜브에 PBS 2mL를 넣고 잠시 소용돌이칩니다. 단백질 정량화를 위해 25μL의 샘플을 제거합니다. 총 단백질은 세포 용해물 정상화에 사용됩니다.
- 다음으로, 용해물/PBS 혼합물의 절반을 별도의 10mL 유리 원심분리 튜브로 옮깁니다. 각 샘플에 10μL의 ISM과 함께 2mL의 PBS를 추가합니다. 3.2 및 3.3의 미디어에 대해 설명된 l-l 추출 프로세스를 따릅니다. 이 분취액은 세포 내 유리 지질을 측정하고 프로스타글란딘과 같은 지질의 알칼리성 분해를 방지하는 데 사용됩니다. 이 부분 표본은 아래에 설명된 4.3 및 4.4 단계를 거치지 않습니다.
- 에스테르화된 지질 l-l 추출 공정의 첫 번째 단계에서는 각 샘플에 5mL의 CHCl3/MeOH(2:1)를 추가해야 합니다. 샘플은 셰이커에서 저속으로 30분 동안 설정됩니다. 진탕 후 샘플을 1935 x g에서 10분 동안 원심분리합니다. 다음으로, 파스퇴르 피펫을 사용하여 l-l 추출의 바닥(유기) 층을 새로운 10mL 유리 원심분리 튜브로 옮기고 샘플을 질소로 건조시킵니다.
- 에스테르화된 지질은 정량화 전에 비누화해야 합니다. 샘플이 건조되면 각 튜브에 80% MeOH에 0.4N KOH 0.5mL를 추가합니다. 그런 다음 샘플을 60°C에서 1시간 동안 배양합니다. 배양 후 PBS 2mL를 첨가합니다. 농축된 HCl산(~30μL)으로 pH를 6으로 조정합니다. 각 샘플에 10μL의 ISM을 추가합니다. 나머지 절차는 배지에서 지질을 추출하는 것과 동일하며 3.2 및 3.3에서 따를 수 있습니다.
- 이러한 추출이 매체 샘플과 동시에 실행되는 경우 동일한 보정 표준을 사용하여 보정 곡선을 개발할 수 있습니다. 그러나 이러한 샘플이 다른 시간에 실행되는 경우 보정 표준도 3.1-3.3에 설명된 대로 처리해야 합니다.
5. 펜타플루오릴벤질브로마이드(PFB) 유도체화
- 건조된 샘플 및 보정 표준물질에 100μL의 무수 디클로로메탄(CH2Cl2)을 추가한 다음 무수 CH2Cl2 에 100 μL의 20% (v/v) N,N-디이소프로필에틸아민 100 μL를 추가하고, 마지막으로 무수 CH2Cl2 에 20% (v/v) PFB 100 μL를 추가합니다.
- 유도체화 시약을 첨가한 후 샘플을 볼텍스화하고 60°C에서 1시간 동안 배양하고 질소로 건조합니다. 샘플 및 보정 표준물질은 즉시 분석하지 않는 경우 -80°C에서 보관하거나 최대 1주일 동안 -20°C에서 보관할 수 있습니다.
6. 안정 동위원소 희석 키랄 액체 크로마토그래피, 전자 포획, 대기압, 화학 이온화, 질량 분석법(SID-LC-ECAPCI-MS) 분석
- 건조된 샘플과 보정 표준물질은 100μL의 헥산/에탄올(97:3)로 재구성됩니다. 그런 다음 전체 샘플을 인서트와 함께 HPLC 바이알로 옮길 수 있습니다. 샘플을 냉각된 자동시료주입기(4°C)에 넣고 분석을 위한 시료 목록을 만듭니다.
- 다음으로, 하기 표 1 및 표 2에 설명된 파라미터를 사용하여 HPLC 및 MS 방법을 설정합니다. 표 3에는 각 지질에 대한 MRM 전이 및 충돌 에너지(CE)와 Waters 2695/Thermo Fisher TSQ Quantum Ultra 분석의 예상 머무름 시간을 포함한 특정 화합물 정보가 포함되어 있습니다. CE는 분석법 개발 중에 각 개별 지질을 조정하여 결정됩니다.
- 순상 분리에는 30°C로 가열된 Chiralpak AD-H 컬럼(4.6 X 250mm, 5 μ)이 사용됩니다. 시작 이동상은 98% 헥산 및 2% 메탄올/이소프로판올(1:1)입니다. HPLC 분리 후 메탄올을 컬럼 후(0.75mL/분)에 첨가하여 민감도 감소를 유발할 수 있는 코로나 바늘의 침착을 방지합니다. MS는 APCI 소스를 사용하여 음이온 모드로 설정됩니다. 소스를 ESI에서 APCI로 변경해야 하는 경우 코로나 바늘을 삽입해야 합니다.
- 실행해야 하는 첫 번째 샘플은 항상 헥산 블랭크입니다. 이렇게 하면 컬럼이 평형을 이루고 컬럼에 보정 표준 및 샘플 분석을 방해할 수 있는 오염이 있는지 여부도 알 수 있습니다.
- 다음 샘플 실행은 0-7(SM 농도 증가) 순서의 보정 표준 샘플이어야 합니다. 이러한 표준은 y축의 표준 영역/IS 영역과 x축의 표준 농도 또는 질량의 비율을 포함하는 보정 곡선을 만드는 데 사용됩니다. 이 플롯에서 파생된 y = mx + b 방정식에서 샘플 면적/IS 면적(y)의 비율을 사용하여 샘플(알 수 없음)의 양 또는 농도(x)를 결정할 수 있습니다.
- 배지에서 발견되는 생체 활성 지질의 양은 배지의 총 부피로 정규화될 수 있으며 세포 용해물에서 발견되는 지질의 양은 총 세포/플레이트 수 또는 총 단백질/플레이트의 양으로 정규화될 수 있습니다. 프로토콜의 4.1 동안 세포가 계수되거나 단백질이 정량화되도록 조치를 취해야 합니다.
7. 대표 결과:
그림 1의 크로마토그램은 표적 지질체학 프로파일을 나타냅니다. 첫 번째 패널(그림 1A)은 리놀레산에서 파생된 해당 13 및 9-oxoODE와 함께 13-HODE 및 9-HODE를 보여줍니다. 또한, 15-HETE의 산화된 대사산물인 15-oxoETE도 두 번째 패널에 나타나 있습니다. 아래쪽 두 패널에는 20-HETE 및 20-HETE-IS, [2H6]-20-HETE가 표시됩니다. 그림 1B는 AA의 효소 산화 또는 ROS에 의한 HETE 입체이성질체에 대해 결정된 분리 및 고유한 전이를 보여줍니다. 그림 1C는 PG, isoPs 및 LTB4를 나타낸 것입니다. 일부 표준에는 상업적으로 이용 가능한 중수소 IS가 없습니다. 따라서 머무름 시간이 유사한 IS가 정량화에 사용됩니다. 예를 들어, [2H8]-12(S)-HETE는 12(R)-HETE 및 12(S)-HETE 외에 11-HETE 및 8-HETE 종을 정량화하는 데 사용됩니다.
대표적인 크로마토그램을 통해 라벨링되지 않은 표준물질과 비교하여 중수소화된 IS의 머무름에 약간의 변화가 있음이 분명합니다. 이러한 더 늦은 머무름 시간으로의 전환은 순상 컬럼과의 중수소 상호 작용의 결과입니다. 중수소는 수소보다 극성이 더 큽니다. 따라서 컬럼의 정상 위상과 더 강한 상호 작용이 있습니다. 이러한 분리가 역상 컬럼을 사용하여 이루어지는 경우, 극성이 더 높은 부분이 역상과의 상호 작용이 더 약하기 때문에 더 빠른 머무름 시간으로 전환됩니다.
그림 1. 이 수치는 표적 지질체학 분석의 대표적인 예입니다. 그림 1A는 첫 번째 패널의 13-oxoODE 및 9-oxoODE, 두 번째 패널의 15-oxoETE, 13-HODE 및 9-HODE(패널 3 및 5) 및 20-HETE(패널 7)를 포함한 여러 LA 및 AA 산화 대사산물에 대한 총 이온 크로마토그램(TIC)을 보여줍니다. HODE 및 20-HETE는 아래 패널(4, 6 및 8)에 해당 중수소 IS가 있습니다. 그림 2B의 TIC는 AA에서 파생된 HETE 입체이성체의 분리 및 고유한 전이를 보여줍니다. 그림 2C는 PG, isoP 및 LT를 나타낸 것입니다. 충돌 에너지(CE), MRM 전이 및 머무름 시간(RT, min)은 Thermo Fisher TSQ Quantum Ultra에 결합된 Waters 2695 LC를 사용하여 최적화되었으며 각 화합물에 대해 표 3에 나열되어 있습니다.
표 1. 키랄 정상상 지질체학 분리를 위한 HPLC 그래디언트 조건. 용매 A는 100% 헥산이고 용매 B는 메탄올/이소프로판올(1:1)입니다.
<테이블 테두리="1"> 질량 분석기 파라미터 설정 근원 APCI (태평양 표준시) 모드 음이온 방법 길이 40분 MRM 스캔 폭 0.002m/z MRM 스캔 시간 0.15 초 MRM 피크 폭 0.70 FWHM 튜브 렌즈 164 볼트 출처: CID 10 eV Q2 충돌 가스 1.5 유닛 기화기 온도 450°C 모세관 온도 250°C 방전 전류 0 μA 칼집 가스 압력 25대 이온 스윕 압력 3 유닛 보조 가스 압력 5대표 2. 위에는 생체 활성 지질 측정을 위해 최적화된 질량 분석 파라미터가 나열되어 있습니다. 이러한 매개변수는 Thermo Fisher TSQ Quantum Ultra에서 가져온 것입니다.
<테이블 테두리="1"> 화합물 전이 세륨 (eV) RT (분) 13-옥소드 293.03 → 113.10 21분 9.9 조 9-옥소드 293.03 → 113.10 21분 17.9 15-옥소ETE 317.05 → 113.18 18분 8.1 13(R)-호드 295.03 → 195.12 18분 12.5 13(S)-호드 295.03 → 195.12 18분 14.8 [2H4] -13 (S) -HODE 299.03 → 198.12 18분 14.9월 9(R)-호드 295.03 → 171.10 18분 13.7 9(S)-호드 295.03 → 171.10 18분 21.2 [2H4] -9 (S) -HODE 299.03 → 172.12 18분 21.2 20-헤테 319.03 → 289.10 18분 12.4 [2H6] - 20 - 헤테 325.03 → 295.10 18분 12.4 5(R)-HETE 319.04 → 115.04 16세 15.7 5(S)-HETE 319.04 → 115.04 16세 16.2 [2H8] -5 (S) -HETE 327.04 → 116.04 16세 16.4년 12(R)-헤테 319.04 → 179.11 14분 11.7년 12(S)-헤테 319.04 → 179.11 14분 12.3년 [2H8] -12 (S) -HETE 327.13 → 184.11 14분 12.5 15(R)-HETE 319.04 → 219.12 13세 12.4 15(S)-헤테 319.04 → 219.12 13세 15.9 호 [2H8] -15 (S) -HETE 327.03 → 226.12 13세 16.1 11(R)-헤테 319.04 → 167.11 16세 11.1 11(S)-헤테 319.04 → 167.11 16세 12.5 8(R)-HETE 319.04 → 155.09 16세 11.7년 8(S)-헤테 319.04 → 155.09 16세 12.6 LTB4 335.03 → 195.10 18분 32.0년 [2시간4]-LTB4 339.03 → 197.10 18분 32.0년 페이지2 351.03 → 271.15 18분 31.2년 [2H4]-PGE2 355.03 → 275.15 18분 31.2년 PGD2 (중부) 351.03 → 271.15 25분 32.5 조 [2H4]-PGD2 355.03 → 275.15 25분 32.5 조 재질 보기 8-iso-PGE 2 351.03 → 271.15 18분 37.4 재질 보기 11β-PGF2 353.03 → 193.11 25분 27.6 [2H4] -11β-PGF2 357.03 → 197.11 25분 27.6 PGF2α 353.03 → 193.11 25분 33.1 [2H4] -PGF2α 357.03 → 197.11 25분 33.1 8-iso-PGF2α 353.03 → 193.11 25분 34.4 [2H4] -8- iso-PGF 2α 357.03 → 197.11 25분 34.4표 3. 이 표에는 그림 1A-C의 총 이온 크로마토그램에서 검출된 화합물이 나열되어 있습니다. 두 번째 열은 MRM/MS에 사용되는 전이를 제공하고, 세 번째 열에는 충돌 에너지(CE, eV)가 나열되며, 마지막 열에는 머무름 시간(RT, min)이 나열됩니다. 매개변수는 Thermo Fisher TSQ Quantum Ultra에 결합된 Waters 2695 분리 모듈을 사용하여 최적화되었습니다.
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토론
이 프로토콜에 사용된 표준 및 내부 표준은 표적 지질체학 방법을 나타냅니다. A: LC-MS 분석에는 Waters 2695 분리 모듈과 Thermo Fisher TSQ Quantum Ultra가 사용되었으며 최적의 파라미터 설정은 표 1 및 2에서 확인할 수 있습니다. 또한 이 추출 프로토콜은 부착 세포용으로 설계되었지만 소변, 혈액 및 조직을 포함한 다른 생물학적 매트릭스뿐만 아니라 다른 세포 유형에 대해 수정될 수 있습니다. 많은 지질 표준이 상업적으로 이용 가능하며 이 분석에 통합될 수 있습니다. 유도체화 절차의 경우 무수 용매와 최고 순도 N,N-디이소프로필에틸아민을 사용하는 것이 중요합니다. LC-MS 분석의 경우 최고 순도의 용매를 사용하는 것도 중요합니다. 이러한 용매는 시약 목록에 나열되어 있습니다. 메탄올의 사후 컬럼 첨가는 코로나 바늘에 증착이 축적되는 것을 방지하는 데에도 중요하므로 분석법의 감도를 크게 감소시킵니다.
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공개 사항
이해 상충이 선언되지 않았습니다.
감사의 글
생체 활성 지질 측정에 사용할 수 있는 대부분의 최신 생물 분석 방법은 키랄 순상 크로마토그래피 또는 SID를 포함하지 않기 때문에 광범위하지 않습니다. 키랄 순상 LC는 거울상 이성질체의 분리와 효소 또는 ROS 매개 대사를 구별할 수 있는 능력에 중요합니다. SID를 사용하면 추출 또는 분석 중에 발생하는 인적 오류나 합병증이 정량화 중에 고려됩니다. ECAPCI-MRM과 함께 이러한 추가 성분으로 인해 이 방법은 생체 활성 지질 분석에 사용할 수 있는 가장 민감하고 선택적인 방법입니다.
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재료
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| 5R-하이드록시-6E,8Z,11Z,14Z-에이코사테트라엔산 | 케이맨 화학 | 34225 | 5(R)-HETE 표준 |
| 5S-하이드록시-6E,8Z,11Z,14Z-에이코사테트라엔산 | 케이맨 화학 | 34230 | 5(S)-HETE 표준 |
| 8R-하이드록시-5Z,9E,11Z, 14Z-eicosatetraenoic acid | Cayman Chemical | 34350 | 8(R)-HETE 표준 |
| 8S-hydroxy-5Z,9E,11Z,14Z-eicosatetraenoic acid | Cayman Chemical | 34360 | 8(S)-HETE 표준 |
| 11R-hydroxy-5Z,8Z,12E,14Z-eicosatetraenoic acid | Cayman Chemical | 34505 | 11(R)-HETE 표준 |
| 11S-hydroxy-5Z,8Z,12E, 14Z-eicosatetraenoic acid | Cayman Chemical | 34510 | 11(S)-HETE 표준 |
| 12R-hydroxy-5Z,8Z,10E,14Z-eicosatetraenoic acid | Cayman Chemical | 34560 | 12(R)-HETE 표준 |
| 12S-hydroxy-5Z,8Z,10E,14Z-eicosatetraenoic acid | Cayman Chemical | 34570 | 12(S)-HETE 표준 |
| 15R-hydroxy-5Z,8Z,11Z, 13E-에이코사테트라엔산 | 케이맨 화학 | 34710 | 15(R)-HETE 표준 |
| 15S-하이드록시-5Z,8Z,11Z,13E-에이코사테트라엔산 | 케이맨 화학 | 34720 | 15(S)-HETE 표준 |
| 20-하이드록시-5Z,8Z,11Z,14Z-에이코사테트라엔산 | 케이맨 화학 | 90030 | 20-HETE 표준 |
| 9R-하이드록시-10E,12Z-옥타데카디에노산 | 케이맨 화학 | 38405 | 9 (< > R< / em>) -HODE 표준 |
| 9S-hydroxy-10E, 12Z-octadecadienoic acid | Cayman Chemical | 38410 | 9 ( S< / em>) -HODE 표준 |
| 13R-hydroxy-9Z, 11E-octadecadienoic acid | Cayman Chemical | 38605 | 13 ( R< / em>) -HODE Standard |
| 13S-hydroxy-9Z, 11E-octadecadienoic acid | Cayman Chemical | 38610 | 13 ( S < / em >) -HODE 표준 |
| 9 α , 11 α , 15S - 트리 하이드 록시 - 프로스타 -5Z, 13E- 디엔 -1- 오익 산 | 케이맨 화학 | 16010 | PGF < 서브 > 2 α 기준 |
| 9α,11α,15S-trihydroxy-(8β)-prosta-5Z,13E-dien-1-oic acid | Cayman Chemical | 16350 | 8-iso-PGF2α 표준 |
| 9 α , 11 &# 946; , 15S- 트리 하이드 록시 - 프로스타 -5Z, 13E- 디엔 -1- 오익 산 | 케이맨 화학 | 16520 | 11 &# 946; -PGF < 서브 > 2 < / 서브 > 표준 |
| 9 α , 15S- 디 하이드 록시 -11- 옥소 - 프로스타 -5Z, 13E- 디엔 -1- 오익 산 | 케이맨 화학 | 12010 | PGD < 서브 > 2< / 서브 > 표준 |
| 9- 옥소 -11 &알파, 15S- 디 하이드 록시 - (8 &# 946;)-prosta-5Z,13E-dien-1-oic acid | Cayman Chemical | 14350 | 8-iso-PGE2 Standard |
| 9-oxo-11α,15S-dihydroxy-prosta-5Z,13E-dien-1-oic acid | Cayman Chemical | 14010 | PGE2 Standard |
| 5S,12R-dihydroxy-6Z,8E,10E,14Z-eicosatetraenoic acid | Cayman Chemical | 20110 | LTB4 Standard |
| 9α,11,15S-trihydroxythromba-5Z,13E-dien-1-oic acid | Cayman Chemical | 19030 | TxB2 Standard |
| Phosphate Buffered Saline | GIBCO, by Life | 14190 | |
| 디에틸 에테르 | 시그마-알드리치 | 346136 | |
| 디클로로메탄 | 아크로스 유기물 | 61030-1000 | 무수 |
| N,N-디이소프로필에틸 아민 | 시그마-알드리치 | 387649 | |
| 펜타플루오릴벤질 브로마이드 | 시그마-알드리치 | 101052 | |
| 염산 | 시그마-알드리치 | 320331 | |
| 수산화칼 | 플루카 | 00650 | |
| 아세토니트릴 | 피셔 사이언티픽 | A996-4 | |
| 메탄올 | 피셔 Scientific | A454-4 | |
| 클로로포름 | Fisher Scientific | 366927 | |
| Hexane | Fisher Scientific | H303-4 | |
| 이소프로판올 | Fisher Scientific | A464-4 | |
| 에탄올 | Decon Laboratories | 2716 | |
| Water | Fisher Scientific | W7-4 | |
| 파스퇴르 피펫 | Fisher Scientific | 13-678-200 | |
| 10 mL 유리 원심분리기 튜브 | Kimble Chase | 73785-10 | 스크류 캡 |
| 페놀 스크류 캡 | Kimble Chase | 73802-13415 | |
| Chiralcel ADH 컬럼 | Chiral Technologies | 19325 | |
| HPLC 바이알 | Waters | 60000751CV | |
| HPLC 인서트 | Waters | WAT094171 |
참고문헌
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