우리의 프로토콜은 홈 개선 스토어에서 구입 재활용 Invitrogen Nupage Novex minigel 카세트, 그리고 저렴한 재료로 한 번에 여러 개의 단백질 젤을 부어하는 방법을 보여줍니다. 이것은 경제적이고 능률적인 방법은 몇 주 동안 4 ° C에서 젤을 저장하는 방법을 포함하고 있습니다. 상용 젤, 자주 단백질 젤을 실행 실험실에서 플라스틱 겔 카세트를 다시 사용함으로써 상당한 비용을 절약하고 환경에 도움을 줄 수 있습니다.
이 콘텐츠를 보려면 JoVE 구독이 필요합니다. 로그인하거나 오늘 무료 평가판을 시작하세요.
이 논문에서
요약
초록
나트륨 dodecyl 황산염의 polyacrylamide 겔 전기 영동 (SDS-PAGE) 분석을 사용하여 단백질의 평가는 생화학 및 분자 생물학 연구 1-4에서 사용하는 일반적인 기법입니다. 단백질의 일상 분석을 수행하는 실험실의 경우 상용 polyacrylamide의 젤 (~ $ 10/gel)의 비용은 시간의 경과에 상당한 될 수 있습니다. 이 비용을 완화하기 위해 일부 연구자들은 자신의 polyacrylamide 젤을 준비합니다. 이러한 젤류를 따르고 전통적인 방법은 일반적으로 전문 장비와 비용이 많은 젤류를 따르고과 향후 사용을 위해 그들을 저장할 수 있습니다 배제 유리 겔 접시를 사용합니다. 또한, 붓는 청소 또는 젤 동안 유리 조각으로 취급하는 것은 대학 연구실 교실에서 자신들의 사용을 배제 있습니다 안전 위험을 작성, 우발적인 파손이 발생할 수 있습니다. 우리의 프로토콜은 재활용 Invitrogen Nupage Novex minigel 카세트에 의해 동시에 여러 단백질 젤을 잡다, 그리고 저렴한 mA하는 방법을 보여줍니다terials는 인테리어 가게에서 구입했습니다. 이것은 경제적이고 능률적인 방법은 몇 주 동안 4 ° C에서 젤을 저장하는 방법을 포함하고 있습니다. 상용 젤, 자주 단백질 젤을 실행 실험실에서 플라스틱 겔 카세트를 다시 사용함으로써 상당한 비용을 절약하고 환경에 도움을 줄 수 있습니다. 또한, 플라스틱 겔 카세트는 학부 실험실 교실에 이상적하게 파손에 매우 저항력이 있습니다.
프로토콜
1. 카세트를 준비
- 클린 앞면과 뒷면 사용 Invitrogen Nupage Novex minigel 카세트, 또는 기타 상업적 minigel 카세트의 접시.
- 플라스틱 에폭시의 약 1-3 ML을 준비하고 제조 업체의 지시에 따라 잘 섞는다.
- 카세트가 조립되면 두 접시가 접촉되는 전면 판의 안쪽 가장자리에 에폭시를 적용합니다.
- 오프닝을 막기에서 초과 에폭시을 방지하기 위해 카세트를 조립하면 다시 접시의 바닥 슬릿을 통해 필터 종이 또는 판지의 조각을 밀어 넣습니다. 즉시 두 접시가 조립되는대로 필터 종이를 제거합니다.
- 꽉 도장을위한 가장자리를 따라 바인더 클립을 놓고 카세트가 완전히 치료 에폭시를 위해 하룻밤 사이에 앉자.
- 전기 테이프로 다시 접시의 바닥에 슬릿을 봉쇄해.
2. 해결 젤을하고 있는걸
- 125 ML 사이드 암 플라스크에 다음을 추가합니다4X 트리스 - 자료 해결 젤 버퍼 산도 8.70, 30.8 %의 아크릴 아미드 / bisacrylamide의 3.50 ML, 유형 3.25 ML의 2.25 ML 9 ML의 총 부피를 위해서 시약 학년 물 (IRG-H 2 O).
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
토론
단백질 겔 전기 영동은 대부분의 분자 생물학 연구소를위한 indispensible 방법입니다. 상용 minigels의 편의를 높은 수준을 제공하지만, 치명타가 될 수 있습니다. 여기 상용 minigels의 인기 브랜드에서 minigel 카세트를 다시 사용하는 방법을 보여줍니다. 이 방법은 젤의 기성품 소스를 가지고있는 편리함을 유지하지만, 상용 minigels 비용의 분수에. 이 절차의 주요 단계는 완전히 유출을 방지하기 위해 unpolymerized 아크릴 아미드를 추가하기 전에 카세트를 봉인하기 위해 에폭시의 정확한 금액을 적용합니다. 플라스틱에 대한 평가에만 에폭시를 사용하여 제조 업체의 지침에 설명된대로 에폭시의 중합을위한 충분한 시간을 허용합니다. 추가 편의를 위해 여러 개의 카세트은 봉인된 수 있으며 사전 젤류 따르는 저장됩니다. 해결 젤 붓는 경우, T의 높이보다 일반적으로 약 0.5 cm 이상 스태킹 젤 충분한 공간을 두십시오우물을 형성하는 데 그 보겠습니다. 해결 겔의 중합하는 동안, 버퍼 포화 1-butano.......
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
공개 사항
관심의 어떠한 충돌 선언 없습니다.
감사의 글
저자는 AH에 생명 수상 University of Florida의 과학 하워드 휴즈 의학 연구소 감사
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 시약의 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
| Invitrogen Nupage Novex Minigel 카세트 (1.0 ㎜) | Invitrogen | NC2010 | 2, 5, 10, 12, 15 및 2D 우물에서 사용 가능 |
| 플라스틱 에폭시 | Loctite | 108,771 | |
| 전기 테이프 | 스카치 | ||
| 125 ML 사이드 암 플라스크 | Pyrex | 5360 | |
| 4X 트리스베이스 해결 겔 버퍼 | 1.5 M 트리스 -베이스 산도 8.7 | ||
| 아크릴 아미드 | 피셔 과학 | 01065-500 | |
| 비스 아크릴 아미드 | MP의 Biomedicals 주식 회사 | 800,173 | |
| 30.8 %의 아크릴 아미드 용액 | 30:0.8 아크릴 아미드 : 비스 아크릴 아미드 IRG-H 2 O의 | ||
| 10 % APS | 피셔 과학 | BP179-25 | 한 ML IRG-H 2 O에 0.1 g의 암모늄 persulfate는 사용하기 전에 즉시 준비 |
| TEMED | Arcos의 생명체 | 138,450,500 | |
| 1-butanol 1X 해결 젤 버퍼로 포화 | 1X 해결 겔 버퍼에 5시 2분는 1-butanol | ||
| 4X 트리스베이스 스태킹 겔 버퍼 | 1.5 M 트리스 -베이스 산도 6.8 | ||
| 젤 빗 | Invitrogen | NC3015 | 15 음, 1.0 밀리미터 두께 |
| 충동 실러 | TEW 전기 난방 장비 | ||
| 히트 Sealable 파우치 | Kapak / Scotchpak | 1 파인트 크기 (6.5 "X 8") | |
| 젤 저장 버퍼 | 1X는 0.1 %의 나트륨 azide와 겔 버퍼를 스태킹 | ||
| Novex SDS 트리스 - 글리신 샘플 버퍼 (2X) | Invitrogen | LC2676 | |
| DTT | FisherBiotech | BP172-5 | |
| 10X 트리스 - Gylcine 나오는 버퍼 | Invitrogen | LC2675 | 10X 재고 1L : 29.0 g 트리스베이스, 144.0 g 글리신, 10.0 g SDS |
| XCell SureLock 미니 셀 | Invitrogen | EI0001 | |
| 젤 나이프 | Invitrogen | EI9010 | |
| SimplyBlue 금고 청바지 | Invitrogen | LC6065 |
참고문헌
- Laemmli, U. K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature. 227, 680-685 (1970).
- Raymond, S., Weintraub, L. Acrylamide gel as a supporting medium for zone electrophoresis. Science. 130, 711-711 (1959).
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재인쇄 및 허가
