이 보고서에서는 마우스 좌골 신경을 파멸시키는 방법을 설명합니다. 이 방법은 쉽게 사용할 수 hemostatic 집게를 사용하여 쉽고 reproducibly 전체 좌골 신경 호감을 생산하고 있습니다. 또한 좌골 신경 호감 후 신경 재생의 분석에 적합한 근육 전체가 마운트를 준비하는 방법을 설명합니다.
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이 논문에서
요약
초록
말초 신경계 (PNS)의 중생은 널리 인간의 질병에 그것의 관련성을함으로써 가능한 CNS 재생 1의 실패를 계몽 PNS의 뉴런에 의해 탑재된 강력한 재생 반응을 이해하는 모두 공부하고 있습니다. 좌골 신경 호감 (axonotmesis)는 설치류 2 말초 신경 손상의 가장 일반적인 모델 중 하나입니다. 그 중생은 3,4 최적 수 있도록 인터럽트에게 반해 모든 axons하지만 Schwann 세포 기저 laminae는 보존됩니다. 이 조사가 정확하게 Schwann 세포 및 기저 laminae 사 모두와 상호 작용하는 성장 축삭의 능력을 공부하실 수 있습니다. 쥐 실험은 일반적으로 신경 호감을 위해 선호하는 동물 모델되었습니다. 그들은 널리 사용할 수 있으며 자신의 lesioned 좌골 신경은 인간의 신경 병변 5,4의 합리적인 근사치를 제공합니다. 쥐의 신경보다 크기가 작은 있지만, 마우스 신경은 많은 유사한 자질을 가지고 있습니다. 가장 중요한 것은 그래도 mous전자 모델 때문에 유전자 변형 라인의 넓은 가용성을 증가 가치는 이제 신경 재생 6, 7에 대한 중요한 개별 분자의 상세한 해부을 허용합니다. 이전 수사관은 단순 직각 포셉, 냉장 포셉, hemostatic 포셉, 혈관 클램프, 그리고 탐정 설계 클램프 8,9,10,11,12 포함한 신경 호감이나 부상을 생산하기 위해 여러 방법을 동원했습니다. 수사관은 또한 봉합, 탄소 입자와 형광 구슬 13,14,1 포함한 부상 사이트를 표시하는 다양한 방법을 동원했습니다. 우리는 정확하고 영구가 좋은 hemostatic 포셉 및 마킹 이후 탄소 호감이 사이트를 방문하여 호감이 사이트의 마킹으로 reproducibly 전체 좌골 신경 호감을 얻는 우리의 방법을 설명합니다. 좌골 신경 호감 절차의 설명의 일환으로 우리는 또한 근육 전체의 비교적 간단한 방법을 포함하는 것은 우리가 이후에 재생을 계량하는 데 사용할 탑재합니다.
프로토콜
1. 동물 과목
1.1. 치료
- 모든 동물의 절차는 고통과 불편을 최소화하기 위해 취한 조치로, 지방 기관의 동물 관리 및 윤리위원회의 승인을 보건 가이드라인의 사용 및위원회와 국립 연구소에 따라서 수행되어야한다.
- 우리 쥐들이 12 시간 역방향 빛과 어둠의 사이클에 대한 온도 제어 조건에서 지내게, 수사관 마우스 차우와 물 광고 libitum 동안 시작했다.
- 좌골 신경 호감이 수행될 때 성인 중생의 연구 내용은 마우스 연령 적어도 6 주가 걸릴한다. 이 나이 polyneural 신경근육학 분기점의 가지치기가 자리를 차지할되는 시간을 넘어선 것이다.
- 이 실험에서 우리는 6-8주 오래된 C57BL / 찰스 리버로부터 얻은 6 생쥐를 사용했습니다. 좌골 신경 호감 (예 : 축삭의 성장 속도) 이후에 재생을 비교하면 axonal 중생의 차이가되지 않은 것처럼 마우스 변종이 동일해야합니다다른 근친 변종 15,16 사이 에드. 유전자 조작 생쥐가 사용될 경우 littermate 컨트롤이 가장 적합합니다.
1.2. 외과 준비
- 동물 intraperitoneal 주사를 통해 케타민 (100 ....
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토론
우리는 호감이 사이트의 정확한 마킹과 함께 안정적으로 완전한 좌골 신경 호감을 얻을 수있는 방법을 제시했습니다. 이전에 언급했듯이, 좌골 신경 호감은 마우스 및 쥐의 말초 신경 손상의 일반적인 모델입니다. 호감의 각 방법의 장점과 단점을 가지고 있지만, 우리는이 방법을 쉽게 특수 장비 (예 : 특수 클램프 등)을 최소로 표시되었다 완전한 호감을 생산 발견.
호감 방법
마우스 좌골 신경 호감에 사용되는 가장 일반적인 악기가 5 호 직각 포셉 때문 이예요. 이런 방법을 사용하여 완전한 호감을 얻을 수 있지만, 우리는이 악기는 특히 새 사용자의 손에, 변수 호감을 (신경을 찢어 너무 작은 힘이 떠나 겪었던 axons 혹은 너무 큰) 생산 것으로 나타났습니다.
호감을 생성하는 데 사용되는 다른 덜 일반적인 방법은 작은 동맥류 클립, 액체 질소로 차게 포셉, 그리고 speciall 포함y.......
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공개 사항
우리는 공개 할게 없다.
감사의 글
이 작품은 또한 NIH 교부금 K08NS065157 (TAF까지)에 의해 지원되었다 Musculoskeletal 장애에 대한 펜은 센터, 관절염의 국립 연구소에서 보너스 번호 P30AR050950는 Musculoskeletal와 피부 질환이 작품을 (TAF와 스티븐 S. Scherer) 지원. 마지막으로, Shriners 소아 연구 센터 종자 기금 (TAF)이 작업을 지원합니다. 우리는 처음에는 그림 1의 스케치를 생산하는 그녀의 도움을 전체 장착 절차와 에이미 A. 김 시연을 위해 박사 영 진의 아들을 인정하고 싶습니다.
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재료
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참고문헌
- Pan, Y. A., Misgeld, T., Lichtman, J. W., Sanes, J. R. Effects of neurotoxic and neuroprotective agents on peripheral nerve regeneration assayed by time-lapse imaging in vivo. J. Neurosci. 23, 11479-11488 (2003).
- Magill, C., Tong, A., Kawamura, D., Hayashi, A., Hunter, D.
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