쥐 척수로 감각 afferents의 틀에 박힌 예상 단일 axons의 추적을 통해 axonal 분기를 공부하기 위해 쉽게 액세스할 실험 시스템을 제공합니다.
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이 논문에서
요약
초록
여기서 우리는 lipophilic 추적 1,1 '- dioctadecyl - 3, 3,3', 퍼클로레이트 (DiI 1) 3' - tetramethylindocarbocyanine를 사용하여 잘 퍼지는 얼룩하여 배아 척수로 DRG 뉴런의 작은 그룹의 탄도를 레이블에 기술을 제시 . 유전자가 변이된있는 마우스 라인의 사람과 야생 타입의 axonal 경로의 비교는 신경 시스템의 배선에 필수적인 메커니즘입니다 axonal 분기의 제어 후보 단백질의 기능 역할에 대한 테스트를하실 수 있습니다. Axonal 분기되므로 정보의 병렬 처리를위한 물리적 기초를 제공하고, 복수의 타겟과 연결하는 개별 신경 세포 수 있습니다. axonal 성장의 중간 타겟 지역에 파급 효과가 터미널 arborization 구분할 수 있습니다. 또한, axonal 지점 형성의 다른 모드는 성장 원추의 활동 (분할 또는 지연 브래지어의 여부 분기 결과에 따라 분류있을 수 있습니다nching) 또는 과정에서 축삭 축에서 민간인 피해의 신진부터 중간 분기 2 (그림 1)했다.
DRG에서 뉴런의 중심 예상 axonal 분기 두 가지 유형의 연구를하는 유용한 실험 시스템을 제공합니다 : 자신의 수입 성의 axons시 10 분 13 일 (E10 - E13) 배아 일 사이에 척수의 지느러미 루트 항목 영역 (DREZ)를 도달할 때 틀에 박힌 패턴의 T 또는 Y 형 분기를 표시합니다. 두 결과의 딸 axons 다음 코드의 dorsolateral 여백에서 각각 주동이의 또는 꼬리 방향으로 진행하고 대기 기간 민간인 피해는 특정의 릴레이 뉴런에 회색 물질 (중간 분기) 및 프로젝트를 침투 이러한 줄기 axons에서 새싹 후에만 그들은 더 이상 (터미널 분기) 3 arborize 척수의 laminae. DiI의 tracings은 PR에 나타나 척수의 지느러미 루트 항목 영역에서 성장 콘 감을 잡을수있다그 분기점을 제안 분할의 ocess이 성장 원추 자체 4 (그림 2) 분할로 인해 발생하지만, 다른 옵션은 물론 5 논의되었습니다.
이 비디오는 DRG가 첨부된 떠나는 E12.5 생쥐의 척수를 해부하다하는 방법을 첫째 보여줍니다. DiI의 표본 작은 금액의 다음 고정은 모세관 튜브에서 나온 유리 바늘을 사용하여 DRG에 적용됩니다. 부화 단계 후, 표시된 척수는 형광 현미경을 사용하여 개별 axons을 분석 거꾸로 오픈 책을 준비로 마운트됩니다.
프로토콜
1. 해부 절차
참고 : 마우스의 실험적 사용이 공식적으로 실험실 동물 관리 및 사용에 대한 지침을 승인 따라야합니다.
- 준비하기 전에, 해부 현미경을 설정하고 집게를 (내부 - 광택 조언을 두 중) 해부 크고 작은 가위, 큰 톱니 포셉, 곡선 포셉 및 뒤몽 제 5의 4 세트를 포함하여 해부에 필요한 수술 도구를하다 ( 자세한 내용은)는 특정 시약 및 장비의 테이블을 참조하십시오. 100 mm Sylgard - 코팅 배양 접시에있는 필터 종이를 놓습니다. 12 잘 판, 100 mm 페트리 접시와 12 ML 관의 우물에서 차가운 PBS를 붓고 얼음을 두십시오. 얼음 두 번째 12 잘 플레이트와 장소의 각 우물에 고정 버퍼의 피펫 2ml (PBS, pH를 7.4에서 4 % paraformaldehyde).
- anesthetization 후, E12.5 (질 플러그 감지 E0.5로 지정)에 초과 임신 댐을 희생, 마우스를 장소세 종이 수건의 시트 및 70 % 에탄올로 복부 영역을 흡수에 미치는 복부 측면까지 함께.
- abdominopelvic 구멍을 열고, 양국 자궁 뿔을 분리하고 차가운 PBS로 100 mm 요리 중 하나에 그들을 전송합니다.
- 미세한 통제, 소....
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토론
DiI 라벨에 대한 고정 조직의 사용과 함께 준비의 용이성과 함께 axonal 지점 형성의 두 가지 유형으로 구성된 틀에 박힌 프로젝션 패턴 분기 axonal 연구에 유리한 모델을 DRG 붙어있는 배아 척수를합니다. 코팅 유리 바늘을 사용하여 DiI 미세한의 응용 프로그램이 있습니다 - DRG 뉴런의 작은 그룹의 시각화함으로써 개별 axons과 분기 패턴의 분석 - DRG의 대량 라벨과는 달리 인치 설명한 방법은 더욱 더 분류 뉴런 8 수를 감소 lipophilic 추적의 iontophoretic 주입 향상 수 있습니다. 그러나 이것은 더 많은 시간이 걸리는 것입니다.
배아 척수 전체 마운트 준비에 하나의 axonal 궤도의 DiI 라벨은 cGMP 신호 층계를 함유 리간드 CNP 그 수용체 Npr2의 식별 수단이되었고,cGMP 의존 키나제 cGKIα - axonal 분기 한 가지 유형의 조절 : DREZ 4,5,9-12에 신경을 DRG의.......
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공개 사항
저자는 공개 아무것도 없어.
감사의 글
저자가 도움이 덧글에 대한 박사 알리스 테어 Garratt을 (최대 Delbrück 센터, 베를린) 감사하고 싶습니다. 이 작품은 독일 연구 협회 (DFG)의 공동 연구 센터 (SFB665)에 의해 지원되었다.
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 시약의 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 (옵션) |
| Stereomicroscope Stemi DRC | 자이스 혈구 | ||
| 인산 버퍼 용액 (PBS) | Biochrom AG | L182 - 50 | |
| Paraformaldehyde | 머크 | 8.18715.1000 | |
| 표준 외과 가위 | 파인 과학 도구 | 14001-13 | |
| 톱니 표준 포셉 | 파인 과학 도구 | 11021-14 | |
| 추가 벌금 홍채 가위 | 파인 과학 도구 | 14088-10 | |
| 곡선 포셉 | 파인 과학 도구 | 11003-13 | |
| 뒤몽 5 번 좋은 팁 포셉 | 파인 과학 도구 | 11254-20 | |
| 뒤몽 제 5 미러 마무리 포셉 | 파인 과학 도구 | 11252-23 | |
| Vannas - 튀빙겐 봄 가위 | 파인 과학 도구 | 15008-08 | |
| 필터 종이 | 피셔 과학 | FB59041 | |
| Sylgard 184 | 세계 Precission 악기 | SYLG184 | |
| 100 mm 배양 접시 | Greiner | 663,102 | |
| 12 ML의 폴리 프로필렌 튜브 | 칼 로스 GmbH의 | ECO3.1 | |
| 12 물론 문화 플레이트 | Becton 디킨슨 | 35-3043 | |
| 에탄올 | 머크 | 1.00983.2500 | |
| / 브라운 micropipette 풀러 P - 97을 불타는 | 셔터 악기 (주) | ||
| Borosilicate 유리 모세관 | 하버드 장치 | 30-0066 | |
| DiI는 (1,1 '- Dioctadecyl - 3, 3,3', 3' - tetramethyl - 퍼클로레이트를 indocarbocyanine) | 시그마 - 올드 리치 | 468,495 | |
| 현미경 SuperFrost 플러스를 슬라이드 | 칼 로스 GmbH의 | H867.1 | |
| 유리 커버 풀렸는데 | 칼 로스 GmbH의 | 1870.2 |
참고문헌
- Honig, M. G., Hume, R. I. Dil and diO: versatile fluorescent dyes for neuronal labelling and pathway tracing. Trends. Neurosci. 12 (9), 333-333 (1989).
- Acebes, A., Ferrus, A. Cellular and molecular features of axon collaterals and dendrites. Trends. Ne....
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재인쇄 및 허가
