이 문서에서는 높은 처리량 방법은 항원 제시 세포의 특정 수용체를 타겟에 더 이상 사용할 수 polyanhydride의 nanoparticles의 표면에 oligosaccharides과 첨부 파일의 합성을 위해 제공됩니다.
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방법 논문
Polyanhydride의 Nanoparticles의 높은 처리량 탄수화물의 합성과 작용화
* These authors contributed equally
이 논문에서
요약
초록
이러한 자료 디자인, 나노 테크놀로지, 화학, 면역학 등의 분야를 포함 Transdisciplinary 방법은 이성적 효능 백신 캐리어를 디자인하는 데 활용해야합니다. Nanoparticle 기반 플랫폼은 백신에게 immunogenicity 1을 향상시킬 수있는 백신 항원의 지속성을 연장하실 수 있습니다. 여러 생분해성 폴리머는 백신 배달 차량 1로 연구되어, 특히 polyanhydride 입자는 안정적인 단백질 항원의 지속적인 출시를 제공하고 항원 제시 세포를 활성화하고 면역 반응에게 2-12를 조절하는 능력을 증명하고있다.
이러한 백신 운반선의 분자 설계 폴리머 속성의 합리적인 선택뿐만 아니라 적절한 타겟팅 대리인의 법인을 통합해야합니다. 리간드와 작용 입자를 대상으로 높은 처리량을 자동으로 지어낸 다양한 R을 공부하는 능력을 향상시킬 수있는 강력한 도구입니다속성의 엔지와 재현성 백신 전달 장치의 디자인으로 이어질 것입니다.
면역 세포의 특정 수용체에 의해 인식되는 수있는 리간드를 타겟팅 이외는 10,11,13 C 형 렉틴 수용체 (CLRs가)에 탄수화물이 존재 인식 패턴 인식 수용체 (PRRs)입니다 변조 및 재단사 면역 반응을 보여줘왔다 병원균의 표면. CLRs 통해 면역 세포의 자극은 항원과 더욱 T 세포 활성화 14,15위한 후속 프레 젠 테이션의 향상된 내면화을 허용합니다. 따라서 탄수화물 분자는 면역 반응의 연구에 중요한 역할을하지만, 이러한 biomolecules의 사용은 종종 구조적으로 잘 정의되고 순수한 탄수화물의 가용성의 부족을 앓고. 솔루션 위상 반응을 반복을 바탕으로 자동화 플랫폼은 크게 낮은 B를 사용하여 이러한 synthetically 도전 분자의 신속하고 제어 합성을 활성화할 수 있습니다전통적인 고체 상 16,17 방법보다 블록 수량 uilding.
여기에 우리는 이러한 중간 정화를위한 fluorous 고체 상 추출과 mannose 기반 타겟팅 리간드로서 oligosaccharides의 자동화 솔루션 상 합성을위한 프로토콜을보고합니다. 탄수화물 기반 타겟팅 요원이되기 위해 자동화된 방법을 개발 후, 우리는 이전에 10 설명된대로 LabVIEW에서 운영하는 자동화된 로봇 세트를 고용 polyanhydride nanoparticles의 표면에 그들의 부착을위한 방법을 설명합니다. 탄수화물과 표면 작용화는 CLRs에게 10,11을 대상으로하고 발굴 다중 파라메 트릭 시스템과 관련된 복잡 아주 가치 (그림 1A)이 될에게 제조 방법의 처리량 증가에 효험을 보이지 않고있다.
프로토콜
1. 높은 처리량 탄수화물 합성
- 이전 dimannoside의 자동화 합성, 적절한 보호 설탕 기증자, 일반적으로 trichloroacetimidate 및 수용체 주로 알케닐 fluorous 알코올에이 벤치 위에 합성됩니다.
- 프로그램 dimannoside의 자동 합성을 위해 쓰여집니다. 기본적인 자동화된 절차의 도식 표현은 그림 2에 표시됩니다. 프로그램에서, 그것은 발기인의 추가하기 전에 기증자와 수용체의 혼합물은 최소 30 분 동안 흔들 것을 보장합니다.
- 합성 기증자, 수용체 및 trimethylsilyltrifluoromethanesulfonate의 솔루션은 dichloromethane으로 만들어집니다. 톨루엔과 dichloromethane는 글리코 실화 반응을 위해 가장 자주 사용됩니다.
- 또한, 80 % 메탄올 및 100 %의 메탄올에 임시 보호 그룹 deprotection위한 시약의 솔루션을 준비합니다.
- 프로그램의 시작하기 전에되도록 그 relat방에있는 필자 습도는 자동화 챔버 30 % 이하이다. 높은 습도는 글리코 실화 반응에 대한 해로운 것입니다.
- 프로그램이 시작되면 로봇 팔이 순차적으로 반응 유리병에 기증자와 수용체의 솔루션을 전송합니다.....
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토론
면역 세포에 직접 nanoparticle의 상호 작용에 에이전트를 대상으로 같은 탄수화물의 약효는 이전 10, 11을 입증되었습니다. 우리 실험실에서 이전 연구는이를 더욱 T 세포 활성화 10, 11 중요할 수도 면역 세포의 활성을 향상 polyanhydride의 nanoparticles에 연결된 특정 설탕은 항원 제시 세포 (APCs)에 다른 CLRs를 타겟팅할 수있는 것으로 나타났습니다. 그러나 몇 가지 매개 변수 - 같은 polyanhydride 화학, 크기, 설탕이나 표면 설탕의 종류 밀도 - 필요 최적화되어야하므로 이러한 다중 파라메 트릭 시스템과 관련된 복잡 발굴에 제조 방법에 처리량을 증대 등을 대상으로 최적의 달성을 위해 큰 도움이 될 것입니다. 또한, biosensing, 효소 고정 및 foodb의 검출을 포함하여 연구의 다른 관련 분야에 큰 가치를 지닌 경우 작용 nanoparticles의 사용오른의 병원체.
탄수화물 .......
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공개 사항
NLBP는 cofounder이며 탄수화물 회사 LuCella Biosciences 주식 회사의 지분을 보유하고
감사의 글
저자는 미국 육군 의학 연구 및 Materiel 명령을 감사드립니다 (권한 부여 # W81XWH-10-1-0806)와 재정 지원을위한 국립 보건원 (권한 부여 # U19 AI091031-01 및 권한 부여 # 1R01GM090280)는 것이다. BN은 화학 및 생물 공학 Balloun 교수를 인정하고 NLBP은 학제간 공학 윌킨슨의 교수로 인정한다. 우리는 nanoparticle의 작용화 실험을 수행하는 그녀의 도움 줄리아 벨라 감사드립니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
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| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | |
| 동력 XYZ 스테이지 : 배 T-LSM050A, 축 당 50 밀리미터 여행 | Zaber 기술 | T-XYZ-LSM050A-KT04 | |
| NE-1000 단일 주사기 펌프 | 새로운 시대 펌프 시스템 | NE-1000 | |
| Pyrex * 비스타 * 무테 재사용 유리 문화 튜브 | 코닝 | 07-250-125 | |
| ASW 1000 | Chemspeed 기술 | ||
| LabVIEW | 내쇼날 인 스트 루먼트 | 776671-35 | |
| SGE 가스 타이트 주사기, Luer Loc 데이 | 시그마 알드리치 | 509,507 | |
| XL-2000 Sonicator | Qsonica | Q55 | |
| 미니 튜브 회전 | 피셔 과학 | 05-450-127 |
참고문헌
- Zepp, F. Principles of vacine design-lessons from nature. Vaccine. 28, C14-C24 (2010).
- Ulery, B. D., Phanse, Y., Sinha, A., Wannemuehler, M. J., Narasimhan, B., Bellaire, B. H. Polymer chemistry influences monocytic uptake of polyanhydride nanospheres. Pharm. Res. 26, 683-....
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재인쇄 및 허가
