우리는 뉴런이나 폴리에틸렌 흡입 피펫을 사용하여 모든의 연결을 요로에 형광등과 칼슘에 민감한 염료의 높은 농도를 도입을위한 간단하고 저렴한 비용으로 기술을 설명합니다.
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이 논문에서
요약
초록
뉴런의 역행 라벨은 또한 뉴런 3-6 칼슘 및 전압에 민감한 염료를로드하는 데 사용되었습니다 표준 해부 방법 1,2입니다. 일반적으로 염료는 고체 크리스털이나 유리 pipettes를 사용하여 로컬 압력 주입에 의해 적용됩니다. 그러나 이것은 몇 시간이 염료 확산이 필요합니다 특히 때 염료 및 감소 라벨 강도의 희석이 발생할 수 있습니다. 여기 염료 용액으로 가득 폴리에틸렌 흡입 피펫을 사용하여 뉴런으로 형광등 및 이온에 민감한 염료를 도입을위한 간단하고 저비 용의 기술을 보여줍니다. 이 방법은 로딩 과정 전반에 걸쳐 axons과 접촉 염료의 높은 농도를 유지하는 안정적인 방법을 제공합니다.
프로토콜
형광등 dextrans은 해부 학적 도구로 및 이미징의 연결 활동 1-4 위해 사용되었습니다. 필드 외., 2009 년 4 모델 시스템으로 척수에 초점 axonal 책자로 이온 및 전압에 민감한 염료를 적용하기위한 프로토콜을 발표했다. 여기에서-체외 optophysiological 및 형태학의 연구를 위해 컷 복부 뿌리, 지느러미 뿌리 또는 척수의 넓이의 연결로 형광 및 / 또는 이온에 민감한 염료를 적용하기위한 자세한 절차를 설명합니다.
1. 타입 I과 타입 II의 Pipettes
테이퍼 팁과 pipettes를 생성하기 위해 알코올 램프 7 불꽃 위에 폴리에틸렌 튜빙의 두 단편 섹션 (PE90, 클레이 아담스 브랜드)을 벗어서 시작합니다. 한 피펫 (타입 I)은 단단히 대상 루트 또는 넓이를 (:; 내경 0.2-0.4 MM : 0.1-0.3 mm 외경) 저장할 수있는 작은 팁을 함께 (3-7밀리미터) 짧은이어야합니다. 그런 다음 두 번째 피펫 (Type을 끌어-II) 이상 (8~12센티미터) 얇고 축과 아주 좋은 팁 (외경과 : 0.2-0.3 mm, 내경 : 삽입할 수 0.1-0.2 ㎜) 타입 - 난....
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토론
여기 뉴런, 신경 및 척수의 책자로 염료를 도입을위한 간단하고 비용 효율적인 프로토콜을 설명합니다. 이 방법은 로딩 과정의 기간 동안 고도의 농축 염료 용액에 확인된 해부 학적 경로를 노출하는 것입니다. 약간의 배경과 대상 사이트의 역행 라벨이 결과 microinjections, 욕조 응용 프로그램과 electroporation 기술에 비해. 그러나 방법은 axons의 넓이는 격리 수 신경계의 사이트로 제한됩니다. 염료가 세포 기관에 도달 axons 따라 주워 나타나기 때문에 또한,, 로딩 시간의 연결을 somata에 염료 응용 프로그램의 사이트에서 거리에 따라 달라집니다. 이하 이상 체외에서 조건이 axonal 책자의 길이는 몇 mm로 방법을 제한합니다.
응용 motoneurons의 역행 라벨링 및 정상과 돌연변이 생쥐의 감각 afferents의 anterograde 라벨 포함 10,11
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공개 사항
우리는 공개 할게 없다.
감사의 글
이 작품은 국립 신경 장애의 연구소와 국립 보건원에서 뇌졸중의 교내 프로그램에 의해 지원되었다. 우리는 또한 메서드와 그림 3의 데이터에 대한 그의 이전 공헌 박사 조지 Mentis 감사드립니다.
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재료
세 방향 꼭지
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 | |
|---|---|---|---|---|
| 자재 명칭 회사 소개 카탈로그 번호 코멘트 | ||||
| 튜브 | PE90 (IDxOD : 0.034 "x0.050"; 벽면 Thikness : 0.008 ") | 클레이 아담스 브랜드 Intermedic | 427,421 | 타입 I & II 타입 pipettes위한 |
| NSF-51 (IDxOD : 1/16x1/8, 벽면 Thikness : 1 / 32) | PharMed BPT, 콜 - Parmer | AY242002 | 플렉시블 튜빙의 경우 | |
| 주사기 | 1ml 인슐린 주사기 U-100 | Becton Dickenson | 329,650 | |
| 니들 | 19G 1 개-1 / 2 "메탈 허브 니들 | MONOJECT | 200,136 | 주사기로 타입 II 피펫 연결하기 |
| 알콜 램프 | ||||
| 꼭지 | 박스터 헬스케어 주식 회사 | 2C6241 | 주사기와 함께 사용 | |
| 홀더 | H-1 전극 홀더 | Narishige | H-1/12 | |
| 자석 스탠드 | Narishige | GJ-8 | ||
| Micromanipulator | Narishige | M-3333 | ||
| 족집게 | S & T 뒤몽 스위스 00632-11 | 뒤몽 | JF-5 TC |
*들은 제안 자료입니다. 어떤 호환 제품으로 교체할 수 있습니다
참고문헌
- Nance, D. M., Burns, J. Fluorescent dextrans as sensitive anterograde neuroanatomical tracers: applications and pitfalls. Brain Res. Bull. 25, 139-145 (1990).
- Glover, J. C., Petursdottir, G., Jansen, J. K. Fluoresce....
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