우리는 ovalbumin 유도된 알레르기기도 염증의 설정에서 ovalbumin에 대한 응답으로 폐 돌기 세포의 성숙 및 마이 그 레이션을 모니터링하는 전략을 설명합니다. 이 전략은 감염의 설정에서 폐 돌기 세포의 이주를 평가하기 위해 수정할 수 있습니다.
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이 논문에서
요약
초록
돌기 세포 (DC가)는 항원에 특정한 T 세포를 활성화하여 적응 면역 반응의 개시에 관여 핵심 선수입니다. DC가가 안정된 상태에서 말초 조직에 존재 있지만 항원 자극에 대한 응답으로, DC가이 항원을 가지고 급속하게 그들이 항원에 대한 T 세포 1,2 응답을 시작 배수 림프절로 마이 그 레이션. 또한 DC가 또한자가 면역 질환뿐만 아니라 알레르기 면역 반응 3 시작에서 핵심 역할을한다.
DC가이 폐 환경 4 설정에서 관용의 면역 반응과 유도의 두 개시에 필수적인 역할을한다. 폐 환경은 환경 항원 5의 광대한 배열과 노출로 인하여, 크게 tolerogenic입니다. 그러나 어떤 사람은 알레르기와 천식의 유도로 연결 오차의 휴식,있다. 본 연구에서 우리는기도의 DC 성숙과 미그을 모니터링하는 데 사용할 수있는 전략을 설명sensitization에 사용되는 항원에 대한 반응으로 배급. 기도의 DC 성숙 및 마이 그 레이션의 측정은기도 알레르기 염증시 면역 반응의 동력학의 평가를 허용하며 기본 메커니즘과 함께 이후의 면역 반응의 정도를 이해하는데 도움이됩니다.
우리의 전략 sensitizing 대리인으로 ovalbumin의 사용을 기반으로합니다. Ovalbumin 유도된 알레르 기성 천식은기도 eosinophilia, 폐의 염증과 천식 6,7 중 발견된 상승된 IGE 수준을 재현하기 위해 널리 사용되는 모델입니다. sensitization 후, 마우스는 이해의 ovalbumin기도 DC가 특정 라벨링을 허용 FITC 분류 ovalbumin의 비강 전달에 의해 도전을하고 있습니다. 다음으로 여러 DC 특정 마커를 사용하여, 우리는 이러한 DC가의 성숙을 평가할 수 있으며 유동세포계측법를 채용하여 배수 림프절 자신의 마이 그 레이션을 평가할 수 있습니다.
프로토콜
1. Ovalbumin으로 마우스의 Sensitization
- OVA (학년 V, 시그마, MO)의 솔루션을 준비 한 MG / ML의 농도에서 멸균 PBS에서 (솔루션은 -80 ° C에 저장할 수 있습니다.)
- OVA-명반 혼합물을 준비하기 위해 튜브에서 명반을 가지고 1시 1분의 비율로 튜브를 vortexing하면서 dropwise 패션 OVA 솔루션을 추가합니다. 30 분간 혼합 저어과 믹싱 후 바로 사용하십시오.
- 1 ML의 주사기를 사용하여, 마우스 복막 캐비티로 혼합물의 0.2 ML 주사 2 주 후에 다시 주사를 반복합니다.
2. FITC 라벨 Ovalbumin와 마우스의 비강 도전
- OVA-명반의 두 번째 주사 후 칠일은 마우스 OVA-FITC와 intranasally 도전을받을 준비가 된 것입니다.
- -80에서 1 밀리그램 / ML 및 aliquots의 저장소의 농도에서 멸균 PBS를 사용 OVA-FITC (시그마)의 솔루션 ° C를 준비
- 50 ML 팔콘 튜브의 하단과 화학 H의 멸균 거즈를 놓으십시오ood는 거즈에 Aerrane의 5 ML에 추가합니다. 생쥐를 마취하기 위해, 약 5-10초위한 튜브로 동물을 직접.....
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토론
여기에 제시된 방법은기도 도전 OVA-FITC의 제공을 바탕으로 폐 DC가를 분석하기위한 유동세포계측법 기반 접근 방식을 제공합니다. 이것은 OVA-FITC을 가지고 감시 따라서 직류 인구가 효과적으로 OVA 유발 알레르기기도 염증 과정 중에기도 면역 반응에 참여하는 사람들입니다 폐동맥 DC가의 선택적 모니터링을 허용합니다. 컨트롤 마우스에서 알레르기기도 염증의 부재에서, MLN에서 확인된 철새 DC가의 숫자 (OVA-FITC + DC가)는 크게 증가의 결과로 알레르기기도 염증에 대한 응답으로 가속 DC 이주의 기저 속도의 지표로 MLN의 OVA-FITC + DC가의 절대 개수. 분석 짧은 타임 스팬에서 수행하고 효율 / 감도가 훨씬 높다 수 있기 때문에 설명하는 전략은 전통적인 immunostaining / immunohistochemical 기반의 접근 방법을 통해 이점을 제공합니다. 따라서 전자는방법에서 설명한대로 적절한 컨트롤이 유동세포계측법 분석 기간 동안 고용되는 것을 보장하기 위해 qually 중요합니다. 결과에 .......
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공개 사항
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감사의 글
이 작품은 박사 짐 후진타오에 CIHR과 CF 캐나다 보조금 의해 CF 캐나다로 라훌 Kushwah에게 수여 박사 학생이기 의해 재정 지원되었다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 시약의 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | |
| Ovalbumin | 시그마 - 올드 리치 | A5503 | |
| 명반 | 써모 과학 | 77,161 | |
| OVA-FITC | 시그마 - 올드 리치 | A9771 | |
| Collagenase D | 로슈 | 11088858001 | |
| 항체 | E-Bioscience |
참고문헌
- Kushwah, R., Hu, J. Role of dendritic cells in the induction of regulatory T cells. Cell Biosci. 20, (2011).
- Kushwah, R., Hu, J. Complexity of dendritic cell subsets and their function in the host immune system. Immunology. 133, 409-419 (2011).
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