이 비디오는 여러 스토리지 형식으로 인간의 췌장을 처리를위한 해부 절차를 보여줍니다. 해부 학적 방향이 지역의 섬 조성 및 밀도의 정의를 허용하도록 췌장 영역에 걸쳐 유지됩니다.
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이 논문에서
요약
초록
이러한 해부 및 샘플링 절차는 시체 같은 장기 기증자에게서 채취한 췌장의 준비을 표준화하기 위해 당뇨병 (nPOD) 프로그램과 췌장 장기 기증자에 대한 네트워크를 위해 개발되었습니다. 췌장은 가로 축에 중간에 걸쳐 일련 가로 섹션에 다음 세 주요 영역 (머리, 몸, 꼬리)으로 나누어져 있습니다. 번갈아 섹션 고정 파라핀 및 신선한 냉동 블록 및 잔여 샘플에 사용되는가 DNA, RNA 또는 단백질 분리를 위해 함께 또는 RNAse 억제제없이도 스냅 냉동 시료 준비에 대한 다진있다. 췌장의 해부 절차의 전반적인 목표는 해부 학적 방향을 유지하면서 전체 췌장을 맛볼 것입니다.
섬 조성, 크기와 숫자의 관점에서 내분비 세포 이질은 쥐 islets 1로 비교해 인간 islets에 대해보고됩니다. 췌장의 머리에서 인간 islets의 대부분은 몸과 꼬리 영역은 인슐린 containin으로 구성되어 있습니다g의 β-세포의 낮은 비율이어서 글루카곤 함유 α-세포 및 δ-세포를 somatostatin 함유합니다. 췌장 폴리펩티드 함유 PP 전지 및 ghrelin 함유 엡실론 세포도 존재하지만, 작은 숫자입니다. 반대로, uncinate 지역은 주로 췌장 폴리펩티드 함유 PP 전지 2로 구성되어있다 islets가 포함되어 있습니다. 이러한 지역 섬 변형은 발달의 차이에서 발생합니다. 췌장 foregut과 위장과 십이지장, 지느러미 3 복부 엽 이동 및 퓨즈의 회전 후 복부와 지느러미 췌장 꽃봉오리에서 개발하고 있습니다. 복부 기억 상실증이 지느러미 엽은 장기 나머지 상승을 제공하면서 uncinate 과정을 포함한 머리의 후부 부분을 형성하고 있습니다. 지역 췌장 편차도 꼬리 지역은 1 형 당뇨병에서 선택적 위축을받은 다른 지역과 지느러미 엽 - 파생 부품에 비해 더 높은 섬 밀도를 갖는으로보고됩니다 추가 장기와 조직은 종종 장기 기증자로부터 복구 및 췌장 림프절, 비장 및 비 췌장 림프절을 포함합니다. 이러한 샘플은 cryopreserved 세포 분리의 추가와 췌장에 대한 이와 유사한 형식으로 회복됩니다. 근위 십이지장은 췌장에 포함된 경우, 십이지장 점막은 파라핀 및 냉동 블록과 다진 스냅 냉동 준비를 위해 수집됩니다.
프로토콜
1. 설정
- 연필로, 또는 자동으로 카세트 프린터 수동으로 파라핀 블록에 대한 라벨 카세트. 기증자 식별자 (CaseID), 샘플 종류, 나누어지는 번호 및 추가 고유 식별합니다 (사례 워크시트 등이 부록 1 ).
- 영구 마커와 카세트뿐 아니라 라벨 10월 금형. 알루미늄 호일의 5~10센티미터의 직사각형을 잘라 버릴거야.
- 영구 마커 모든 튜브와 튜브와 라벨을 인쇄하거나 수동으로. 신선한 배송의 RPMI 매체와 다진 스냅 냉동 샘플 튜브에 대한 충분한 튜브를 포함합니다. RNAlater과 스냅 냉동 튜브은 각 cryovial 1 ML의 RNAlater를 추가합니다.
- 멸균 절개 악기 (포셉, scalpels, 블레이드, 거즈 패드 (4x4))뿐만 아니라 카세트와 10월 금형과 biosafety 후드 및 카운터 상판의 설정 해부 보드 사용의 순서로 배열.
- 넣어 냉동 목욕 준비건조 적어도 3cm의 깊이로 중간 크기 스티로폼 상자 (10x10 ㎝)에 얼음과 드라이 아이스가 완전히 덮여 때까지 이소펜탄를 추가합니다.
- 옵션 : 액체 질소로 작은 ....
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토론
이 절차의 목적은 여러 컬렉션 사이트 전반에 걸쳐 조화가 될 수있는 표준 췌장 처리를 정의하고 있으므로 다른 그룹에 의해 얻은 결과의 비교를 허용하는 것입니다. 절개 방법은 내부 - 지역 제트 연료의 파이프 뒤에 주요 췌장 영역의 주석에 대한 추가 단계와 일반 외과 병리학 관행에 따라 달라집니다. biospecimen 처리 방법의 표준화와 같은 국립 암 연구소 6 등 국가 biobanking 기관 biospecimen 수집에 대한 모범 사례의 출판물에 의해 exemplified 고품질의 샘플 수집을 용이하게하는 데 필요합니다. 당뇨병과 적절한 통제 집단의 다양한 단계를 나타내는 기증자로부터 인간의 췌장 샘플 biobanking는 7-9를보고되었습니다. 그러나, 췌장 머리 지역에서 수집한 이들 시료에 대한 정확한 내용은 부족했습니다. 상당한 간 개별 섬의 이질은 잘 알려져 WI입니다최대 섬 크기 분포의 5 배 유사 번째 고유 heterogenity 10을 분석하면 췌장 .......
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공개 사항
관심의 어떠한 충돌 선언 없습니다.
감사의 글
저자는 기증자의 가족과 전문가의 도움이 연구와 마리아 마티노와 이리나 Kusmartseva에 관련된 장기 조달 기관 감사드립니다. 이 작품은 당뇨병과 췌장 장기 기증자를위한 네트워크를 지원 소아 당뇨병 연구 재단 (MC-T., MA)에 의해 재정 지원되었다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 시약의 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
| 22 블레이드와 scalpels 포함한 절개 악기 | 여러 | 여러 | |
| 원심 분리기 튜브 (15 및 50 ML) | 피셔 과학 | 05-539-5, 430,828 | 불모의 |
| Cryotubes (1.8 ml) 쇼핑 | VWR 북미 | 89004-300 | 멸균, 바코드 선택 |
| RNAlater | Ambion | AM7021 | |
| 외과 병리학 잉크 | |||
| 카세트 | 메르세데스 의료 | CAS ECO109 | |
| 일중립 0 % 포르말린 버퍼 | 피셔 과학 | 23-245-685 | |
| 10월 냉동 미디어 | TissueTek | 4583 | |
| 금형 | ThermoScientific | 58,952 | 다양한 크기 |
| 이소펜탄 | 피셔 과학 | O3551-4 | 10월 추워서 목욕 |
| 드라이 아이스 | 10월 추워서 목욕 | ||
| Dewar 플라스크에 액체 질소 | 냉동 cryovials 낚아채 | ||
| 세포 배양 접시 (100mm) | 코닝 | 430,167 | 불모의 |
| Hyclone DMEF | ThermoScientific | SH30023.01 | 멸균 가게에 냉장, 글루타민 포함 |
| 태아 소 혈청 | Cellgro | 35-010 - 이력서 | 멸균, 냉동 저장 aliquots |
| 페니실린 / 스트렙토 마이신 / Antifungal | GIBCO | 15240-062 | 멸균, 냉동 저장 aliquots |
| 9 파라핀을 입력 | 리차드 - 앨런 과학 | 8337 | |
| 1X D-PBS | GIBCO | 14190-144 | 불모의 |
| 16 % Paraformaldehyde | EM 과학 | 15,710 | 신선 저장소가 냉장하십시오 |
| 8 % 글루 타 알데히드 | EM 과학 | 16,019 | 신선 저장소가 냉장하십시오 |
| Biosafety 레벨 2 후드 | 여러 | ||
| 초저 냉동고 | 여러 | ||
| 사쿠라 카세트 프린터 | 사쿠라 | ||
| 사쿠라 VIP300 | 사쿠라 | 자동 파라핀 프로세서 | |
| 파라핀의 임베딩 역 | ThermoFisher |
표 1. 특정 시약 및 장비.
참고문헌
- Brissova, M. Assessment of human pancreatic islet architecture and composition by laser scanning confocal microscopy. J. Histochem. Cytochem. 53, 1087-1097 (2005).
- Rahier, J. The pancreatic polypeptide....
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재인쇄 및 허가
