방법 논문

CD4의 분리 + Miltenyi 맥을 정제를 사용하여 마우스 림프절에서 T 세포

DOI:

10.3791/409

⸱

2007년 11월 1일

 , 
1Department of Physiology and Biophysics, University of California, Irvine (UCI)

이 논문에서

요약

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Miltenyi 맥스 키트를 사용 lymphocytes의 격리는 전체 림프 조직 homogenates에서 세포를 정화하는 안정적인 방법입니다. Miltenyi 시스템을 사용하여 정화 세포는 일반적으로 ≥ 96% 순수하고 있습니다. 여기, 우리는 CD4 + T 세포, Miltenyi에서 제공하는 많은 키트 중 하나를 분리하기 위해 취한 단계를 보여줍니다.

초록

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기본 소스에서 세포의 격리는 많은 복잡한 프로토콜에 필요한 단계입니다. Miltenyi 인간이 아닌 인간 영장류, 쥐, 그리고 우리가 여기에 설명된 것과 같이, 마우스를 포함한 여러 생물에서 세포를 분리하는 키트를 제공합니다. 마그네틱 비드 기반 세포 분리는 긍정적인 선택 (또는 세포 고갈)뿐만 아니라 부정적인 선택 중 하나를 허용합니다. 여기, 우리는 온전히 나 나 곳을 CD4 + T 헬퍼 세포의 부정적인 선택을 보여줍니다. 우리가 일반적으로 ≥ 96% 순수 CD4 + / 인 경우에는 3 번 CD + 아르 세포를 정화이 표준 프로토콜을 사용합니다. 이 프로토콜은 프로토콜 해부 및 adoptively 이미징 목적으로 전송하는 T 세포와 다른 세포 유형의 정화를 위해, 목성의 문제 7 출판 마우스에서 주변 림프절의 2 광자 영상과 함께 사용됩니다. 우리가이 프로토콜 비디오 외과 분석을 발휘하지 못했지만, 그것은 매우 외과를 통해 적절한 항체를 사용하여 격리 세포의 전반적인 순도를 확인하는 것이 좋습니다. 또한, 우리는 T 세포 격리의 비 멸균 방법을 보여줍니다. 무균 세포가 특정 최종 사용자 응용 프로그램에 필요한 경우, 표준 무균 조건 하에서 조직 문화 후드의 증명 절차의 모든 일을해야합니다. 자신의 실험과 관찰과 행운을 빌어 주셔서 감사합니다!

프로토콜

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에서 Miltenyi 키트 또는 온라인에 포함되어있는 프로토콜 읽고 따르십시오 http://www.miltenyibiotec.com/을 .

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토론

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기본 소스에서 세포의 격리는 많은 복잡한 프로토콜에 필요한 단계입니다. Miltenyi 인간이 아닌 인간 영장류, 쥐, 그리고 우리가 여기에 설명된 것과 같이, 마우스를 포함한 여러 생물에서 세포를 분리하는 키트를 제공합니다. 마그네틱 비드 기반 세포 분리는 긍정적인 선택 (또는 세포 고갈)뿐만 아니라 부정적인 선택 중 하나를 허용합니다. 여기, 우리는 온전히 나 나 곳을 CD4 + T 헬퍼 세포의 부정적인 선택을 보여줍니다. 우리가 일반적으로 ≥ 96% 순수 CD4 + / 인 경우에는 3 번 CD + 아르 세포를 정화이 표준 프로토콜을 사용합니다. 우리가이 프로토콜 비디오 외과 분석을 발휘하지 못했지만, 그것은 매우 외과를 통해 적절한 항체를 사용하여 격리 세포의 전반적인 순도를 확인하는 것이 좋습니다. 또한, 우리는 T 세포 격리의 비 멸균 방법을 보여줍니다. 무균 세포가 특정 최종 사용자 응용 프로그램에 필요한 경우, 표준 무균 조건 하에서 조직 문화 후드의 증명 절차의 모든 일을해야합니다.

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공개 사항

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저자들은 공개할 사항이 없습니다.

감사의 글

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우리는 맥 버퍼의 준비에 대한 레베카 Paquett 감사하고 싶습니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
MACS 버퍼시약없음없음Miltenyi의 설명대로 준비하십시오.
CD4+ T 세포 분리 키트: Untouched Isolation시약Miltenyi Biotec130-090-860Miltenyi 시스템과 함께 사용하십시오.
멸균 인산염 완충 식염수 (PBS)시약MACS 버퍼 준비에 사용합니다.
Corning 35mm Not TC-Treated 배양 접시기타Corning430588단일 세포 현탁액 준비에 사용합니다.
70 micron 세포 스트레이너도구BD Biosciences352350단일 세포 현탁액 준비에 사용합니다.
6 mL 주사기도구Tyco Healthcare, Covidien8881516051단일 세포 현탁액 준비에 사용합니다.
10x Dulbecco’s 인산염 완충 식염수 (DPBS)시약Invitrogen14200-075적혈구 용해에 사용합니다.
멸균 증류수시약Sigma-AldrichW4502적혈구 용해에 사용합니다.

참고문헌

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  1. Miller, M. J., Hejazi, A. S., Wei, S. H., Cahalan, M. D., Parker, I. T cell repertoire scanning is promoted by dynamic dendritic cell behavior and random T cell motility in the lymph node. Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 998-1003 (2004).
  2. Matheu, M. P., Deane, J. A., Parker, I., Fruman, D. A., Cahalan, M. D. Class IA phosphoinositide 3-kinase modulates basal lymphocyte motility in the lymph node. J Immunol. 179, 2261-2269 (2007).

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