실험 Subarachnoid의 출혈 후 뇌 지연 Vasospasm을 평가하기 위해 낮은 사망 쥐 모델

요약

Aneurysmal subarachnoid 출혈 (SAH)은 때 동맥 파열 subarachnoid 공간에 발생합니다 출혈이 있습니다. subarachnoid의 출혈이 몇 년 전 예전처럼 될 수 계속 한 후이 행사의 병적 상태와 사망률이 개선 치료 방법으로 인해 감소, vasospasm의 위험에 왔지만. 뇌성 vasospasm의 시작 이벤트를 식별하기 위해 포괄적이고 재현 동물 모델을 확립의 중요성은 배리의 1979 년 실험 vasospasm 모델 쥐의 첫 번째 사용하기 때문에 연구의 초점을했습니다 외. 쥐의 초기 작업은 cisterna 마그나에 autologous 피 한 분사가 급성으로 이어 (분 이내)하지만 뇌성 vasospasm을 지연하지 않는 것이 입증 ^{3, 6, 14}. 여기 낮은 사망률 SAH 쥐 모델을 특성화 그 재현 지연 vasospasm의 결과입니다.

초록

목표 : 특징과 시작 이벤트, pathophysiological 변경 및 치료를 위해 잠재적 인 공격 대상을 파악하기 위해 쥐의 aneurysmal subarachnoid 출혈 (SAH) 이후 지연 뇌성 vasospasm을 보여줍니다 재현 모델을 설정합니다.

방법 : 28 남성 Sprague-Dawley 쥐 (250~300g이) - SAH 또는 생리 제어 임의로 두 그룹 중 하나에 할당되었습니다. SAH 그룹 (N = 15)에서 쥐의 subarachnoid 출혈은 cisterna 마그나로, 48 시간 간격, autologous의 피를 두 번 주입에 의해 유도되었다. 마찬가지로, 정상적인 생리 (N = 13)은 cisterna 마그나 생리 제어 그룹의에 주입했다. 쥐가 두 번째 혈액 주입 후 일 곳곳에서 희생되었고 머리는 조직 학적 분석을 위해 보존되었습니다. vasospasm의 정도는 NIH 이미지-J 소프트웨어를 사용하여 내부 luminal 단면적을 측정하여, 뇌 바닥 동맥의 섹션을 사용하여 측정되었다. 의미했습니다Tukey / 크레이머의 통계 분석을 사용하여 테스트했습니다.

결과 : 조직 학적 섹션의 분석 후, 뇌 바닥 동맥 luminal 단면적은 이전 그룹에 뇌성 vasospasm과 일치, 생리 그룹에서보다 SAH의 작은습니다. SAH 그룹에서 뇌 바닥 동맥 내부 지역 (0.056 μm ± 3) 내부 공간과 생리 대조군 (0.069에 비해 5 일 두 번째 혈액 주입 (7 일 초기 혈액 주입 후) 후 vasospasm에서 훨씬 작했다 ± 3, P = 0.004). 뇌성 vasospasm로부터 mortalities이 없습니다.

결론 : 쥐를 두 번 SAH 모델은 작은 동물 모델에서 뇌성 vasospasm의 pathophysiological 메커니즘을 연구하는 데 사용할 수있는 순한, 생존, 뇌 바닥 동맥 vasospasm을 유도한다. 낮은 허용 사망률이 vasospasm의 메커니즘이 elucid 할 수 있도록 이상적인 SAH 동물 모델에 대한 만족해야하는 중요한 기준입니다ated ^{7, 8.} 모델의 추가 수정은 vasospasm과 신경 시험의 증가 정도에 대한 조정 만들 수 있습니다.

프로토콜

1. SAH 제목에 쥐 수술 0.15 ML Autologous 동맥혈으로 주사

1. 쥐가 0.1 밀리그램 / Xylazine / 케타민 쥐 칵테일 kg을 사용하고 5 분에 앉아서 할 수 anesthetized 있습니다.
2. 충분한 마취는 뒷다리 반사의 감소에 의해 확인된다.
3. 전자 면도기를 사용하여 하위 뒤통수 지역 주변 머리카락 영역을 코 목은 면도 있습니다.
4. 동물은 수술 테이블에 위로 향한 위치와 꼬리는 살균 절개를 보장하기 위해 betadine을 채취합니다.
5. 직선 1cm의 중간 선 절개는 꼬리의 복부 측면에서 이루어집니다
6. 꼬리 동맥이 확인하고 격리 될 때까지 절개가 연장됩니다.
7. 멸균 26 게이지 카테터를 사용하여 꼬리 동맥 cannulated되어 동맥 혈액의 0.15 ML은 주사기로 배출된다.
8. 멸균 거즈은 절개를 밀봉 할 수있는 vetbond의 적용 전에 지혈을 보장하기 위해 절개 감싸 있습니다.
9. 티그는 쥐가 betadine으로 채취되는 하위 뒤통수 지역을 통해 테이블​​과 면도 지역에 발생하기 쉬운 설정되어 있습니다.
10. 수직 중간 선 절개 액세스를 사용하면 cisterna 마그나에 받고있다.
11. 일단 확....

결과

위에 설명 된 프로토콜 내에서, 우리는 이전에 문학에 설명 된 것보다 모델의 더 나은 특성을 필요로한다고 생각되는 몇 가지 단계가 있습니다. 여기 재현 낮은 사망률 뇌성 vasospasm 작은 동물 모델을 달성하고 제대로하지 않을 경우이 모델과 관련된 잠재적 인 함정을 피하기 위해 필수적입니다 단계에 초점을 맞 춥니 다.

1. 꼬리 동맥의 Autologous 혈액 추첨 :

꼬리 동맥의 angiocatheter주의 위치는 모델에 필수적인 첫 단계입니다. 그림-1 쥐의 꼬리 동맥의 26 게이지 카테터의 위치를 보여줍니다. 이 최소한의 외상과 출혈이있는 좋은 위치를 나타냅니다. angiocatheter의 적절한 위치는 좋은 혈액 수익으로 확인 할 수 있습니다.

2. Cisterna 마그나에 Autologous 혈액의 주입 :

토론

영장류에 더 유사한 유전 조성과 해부학 적 특징을 갖는 인간 더 자세히 지연 뇌성 vasospasm의 사건을 모방하고보다 쉽게 쥐 ^8보다 동맥 변경 사항을 모니터링하는 비 침습적 영상을 (MRI 및 혈관 조영술) 받아야 할 수 있습니다. 그러나, 영장류 모델은 비용 금지 및 소형 동물 모델보다 더 복잡한 관리 및 윤리적 문제와 연결되어 있습니다. 개발 된 소형 동물 SAH 모델은 이전에 SAH를 일으킬 세 가지 방법에 초점을 맞추고 있습니다 : 1) Endovascular 동맥 혈액이 subarachnoid 공간으로 탈출하고 부상당한 동맥 주위에 수집 할 수 있도록 허락 해 intracranial 동맥의 천공 2) 동맥의 외과 노출 지역 autologous 응고 분사, subarachnoid 공간 ^8로 피 3) 직접 분사 (autologous 또는 기증자). 모든 모델은 자신의 장점과 단점이 있습니다. 예를 들어, endovascular 천공 모델은 가장 가까운 aneurys의 이벤트를 .......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
장비 / 시약의 이름	회사	카탈로그 번호
남성 SD 쥐 (250-300g)	Taconic	SD-M
26 G의 카테터	웹스터	8416683
25 G의 바늘	물소	305122
1 CC의 주사기	중앙 상점	54,245
케타민 / Xylazine 칵테일	동물 케어 (SUNY) *	-
Betadine	중앙 상점	51,458
자당	시그마	S9378-1kg
Paraformaldehyde	시그마	P6148-500G
인산염 완충 용액	어부	BP-399-4
외과 표	하버드	PY2 72-2590
10월 컴파운드 (cryoprotection)	VWR	25608-930
Superfrost 슬라이드	어부	12-550-15

* 실험실 동물 관리학과, SUNY 북부 출신 의과 대학에서 합성. 한 참조를 추가합니다 [100 MG / ML] [100 MG / ML] 케타민의 10 ML에 Xylazine의.