과립에 따라 달라 Autoantibody 유발 피부 젖어

요약

콜라겐 VII 200 아미노산 (AA 757-967)의 스트레치에 대한 IgG 항체를 정화, 우리의 현재 작업에 설명 된 동물 모델에서 젖어 표현형뿐만 아니라 인간을 특징 조직을과 immunopathological 기능을 재현 마우스에 반복적으로 주입 아르 epidermolysis bullosa acquisita (EBA) ¹.

초록

자가 면역 현상은 건강한 개인에서 발생하지만, 자기 내성이 실패하면 면역 반응은 특정 병리 될 수 있습니다. 에 따르면 Witebsky의이 면역으로 질병을 진단하는 기준 중 하나를 여긴다는 autoantibodies의 수동 송금을 통해 실험 동물의 질병의 재현입니다. epidermolysis bullosa를 들어 acquisita (EBA), 피부와 점액을 분비하는 세포막의 prototypic 기관이 특정 면역 질환은 여러 실험 모델은 최근에 설립되었다. 콜라겐 VII 200 아미노산 (AA 757-967)의 스트레치에 대한 IgG 항체를 정화, 우리의 현재 작업에 설명 된 동물 모델에서 젖어 표현형뿐만 아니라 인간을 특징 조직을과 immunopathological 기능을 재현 마우스에 반복적으로 주입 아르 EBA ^1. 본격적인 확산 질환은 보통 첫 번째 주사 후 5-6일 볼과 질병의 정도는 관리 C의 복용량과 상관 관계있다ollagen VII 특정 IgG. 실험 EBA의 조직 손상 (물집 형성)은 ^-4 조직에 바인딩 autoantibodies ^2에 의해 과립 성 백혈구의 모집 및 활성화에 따라 수 있습니다. 모델이 efferent 면역 반응은 T 세포 독립적 인 위상을 재현 그러므로,이 모델은 면역 조직 손상에 참여 과립에 의존 염증 경로의 해부 할 수 있습니다. 또한, 그 값은 생체에 autoantibodies의 물집을 유발하는 잠재력을 입증하고 EBA ^{1,3, -6에} 물집 형성의 메커니즘을 조사 연구 수에서 빨간 밑줄이 있습니다. 마지막으로,이 모델은 크게 autoantibody 유발 질병의 새로운 항 염증성 요법의 개발을 촉진합니다. 전반적으로, EBA의 수동 전송 동물 모델은 접근과 유익 질병 모델 및 연구자 EBA의 pathogenesis뿐만 아니라 분석하는 것이 아니라 기본적인 생물학적 및 임상 답변을하는 데 도움이됩니다필수 autoimmunity 질문.

프로토콜

1. 병원성 항체의 작성

참고 : 항체가 하룻밤 사이에 0.1 M 글리 산도 2.5-3 (용출 버퍼) (ON)에 저장 할 수 없기 때문에 정제 및 항체의 농도가 같은 날에 수행되어야합니다.

IgG의 친 화성 정화 : 면역 토끼 혈청의 25 ML을 사용 :

1. 4에 ON 토끼 혈청을 해동 ° C, 20 ° C.에 1xPBS (버퍼를 실행)와 그것에게 1:1 혼합 10 분에 1,260 XG에서 원심 분리기를 선택적 필터 종이 필터링 단계는 혈청은 지방산입니다 경우에 원심 분리 한 후 포함 될 수 있습니다.
2. 한편, G 매트릭스는 1XPBS (버퍼를 실행) 10 침대 볼륨 (침대 볼륨 = 매트릭스 볼륨)에 열을 가득 단백질을 씻는다.
3. 희석과 컬럼에 혈청 필터링을 적용하고 실온 (RT)에 흔들 플랫폼에서 1 시간을 품다.
4. 수집 흐름을 통해 (FT) 50 ML의 Flacon 튜브 인치주세요 을 삭제하지 마십시오 농도까지그리고 정화 IgG의 titer가 알려져있다.
5. 1XPBS 5 침대 볼륨과 매트릭스을 씻고 동안 용출 IgG 분획을 수집 50 ML 팔콘 튜브를 준비합니다. 피펫 1 ML의 산도를 중화 버퍼 : 각 ....

결과

임상 조직 학적 및 immunopathological 수준에서 인간의 EBA 닮은 마우스에서 전체 고장 질병의 항원 특정 항체 결과의 수동 전송됩니다. 수포, 빵 껍질, erosions과 탈모는 귀, 코, 손, 다리, 뒤로 생쥐의 눈 주변에 개발할 수 있습니다. 이 질병의 첫 번째 임상 증상은 대부분의 경우 귀 및 / 또는 머리 영역에 나타납니다. 특정 토끼 IgG 및 마우스 보완 C3의 증착은 IF perilesional 피부 cryosections의 피부 표피 교차로에 직접 감지되어 있습니다. lesional 피부 subepidermal 물집과 염증에 침투는 조직학으로 볼 수 있습니다.

병원성 콜라겐 VII 특정 항체의 주입이 단종되는 경우에는, 질병 활동이 점차 낮은되고, 몇 주 이내에 병변이 치유. 그럼에도 불구하고, postinflammatory cicatricial 탈모증의 특정 정도는 무기한 계속 될 수 있습니다.

C.......

토론

실험 동물에 autoantibodies의 수동 전송은 pathogenicity ^{7, -12를} 입증 할 주요 접근 방법입니다. 이 방법을 통해 얻은 동물 모델은 autoimmunity ¹³ 간접적 인 증거 할뿐만 아니라, 병원성 메커니즘의 efferent 단계의 조사를 할 수 있습니다. epidermolysis bullosa acquisita (EBA)으로 젖어 항체 유발 과립에 의존 피부의 수동 전송 모델은 면역 dermatoses에서 조직 손상의 메커니즘을 해부하는 데 사용되었다. 그것은 잘 콜라겐 VII에 대한 autoimmunity의 한계 넘어 확장 항체로 인한 장기 별 면역 질환의 기본, 생물학적 및 임상 중요한 측면을 연구 할 수있는 정교하게 될지는 모델 병으로도 나타났다. 마지막으로,이 모델은 지하 막 생물학 등의 기초 생물학 및 pathophysiological 프로세스,, 면역 단지의 과립 활성화를 공부하는 데 사용할 수 있습니다d 개의 보완 활성화.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
시약의 이름	회사	카탈로그 번호	코멘트
재조합 항원			손쥐 콜라겐 VII의 재조합 형태의 plasmids 인코딩은 해당 저자에서 사용할 수 있습니다.
면역 토끼 혈청	www.eurogentec.com		우리 항원 200 μg, 2 주 간격 3 회와 예방 접종 뉴질랜드 화이트 토끼했다. 이러한 목적을 위해 우리는 Eurogentec SA, 벨기에의 서비스를 사용했습니다.
단백질 G 아가로 오스	로슈 응용 과학	11243233001
Balb / C 마우스	찰스 강 (Charles River) 연구소
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