이 문서의 관리에 대해 설명합니다 룩스 태그 마우스에 세균 및 이후 생체 내 분석.
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이 논문에서
요약
초록
이 동영상은 암 유전자 및 세포 치료 박테리아의 사용에 중점을두고, 라이브 쥐 세균 매매의 연구 전신 bioluminesce 이미징 (BLI)의 사용에 대해 설명합니다. 박테리아가 조직 관리에 따라 종양 내에 우선적으로 성장하는 자연 능력을 보유하고 암 치료를위한 벡터의 매력적인 클래스를 제시한다. 박테리아는 박테리아와 동시에 종양 사이트의 럭스 유전자 카세트 허가 BLI 검색을 표현하는 설계. 시간이 지남에 따라 종양 내에 위치와 박테리아의 수준은 쉽게 검토 할 수 있습니다, 2, 3 차원 시각화. 방법은 박테리아 종과 종양 이종 이식 유형의 다양한 적용됩니다. 이 문서는 피하 종양 베어링 마우스에서 발광 생물 박테리아의 분석을위한 프로토콜을 설명합니다. BLI하여 위장관 (GIT)의 공생 박테리아의 시각화도 설명되어 있습니다. 이 강력하고 저렴한, 실시간 이미징 전략 represenTS 암 특정 유전자 치료의 연구, 그리고 전염성 질병의 맥락에서 생체 내 박테리아의 연구를위한 이상적인 방법입니다. 이 동영상은 럭스 태그 E.을 공부에 대한 절차를 설명 IVIS 시스템 공간과 측두엽 판독 달성 활용 BLI을 보여주는 라이브 쥐 대장균.
프로토콜
1. 종양 유도
- 일상적인 종양 유도를 들어, 혈청이없는 배지 200 μl에 떠있는 셀의 최소 tumorigenic 선량은 무료로 감염의 측면 6~8주 세 여성 Balb / C 또는 athymic MF1-nu/nu 마우스로 (SC) 피하 주입 된 N 21 게이지 주사기 바늘을 사용하여 = 6 (할렌, 옥스퍼드 셔, 영국) (1 X 10 6 4T1 세포). 혈구와 Trypan 파랑 염료 제외 (Gibco)를 사용 시각적 개수에 의해 결정으로 접종에 사용되는 세포의 생존 능력은보다 큰 95%했다.
- 종양 설립 후, 종양은 성장하고 발전 할 수 있었고, 2 회 모니터링했다. 종양 볼륨이 종양의 가장 긴 직경이며, B는 직경을에 가장 긴 직경 수직 공식 V = (AB 2) Π / 6에 따라 계산되었습니다.
2. 세균 준비
- 이 protoco에 사용 된 세균의 변형난 E.했다 대장균 K-12 MG1655, 비 단백질 독소 표현 세균에 의해 감지 할 수 있도록 그 luxABCDE 인코딩 플라스미드을 품고, 스트레인을 BLI. E. 통합 luxABC....
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토론
유전자 치료의 맥락에서 환자에게 치료 유전자 전달을위한 생화학 제제의 사용은 큰 약속 3-5 나타났습니다. 바이러스처럼, 박테리아의 본래 생물학적 특성은 특히 암의 맥락에서, 셀이나 조직에 효율적으로 DNA 전달을 허용합니다. 그것은 박테리아가의 자연스럽게 할 수있는 것으로 표시되었습니다 체계적으로 중 외부 로컬 복제 높은 수준의 (비 침습적 종) 또는 종양 세포 (병원균)에 발생하는 종양으로 관리 들어가고. 암 특정 박테리아 복제는 초기 혐기성 및 facultatively 혐기성 균의 성장을 촉진 종양 내에서 hypoxic / 괴사 영역의 혐기성 자연과, 고체 종양의 hypoxic 성격 (낮은 O 2 층)로 표시되었습니다. 최근에는 불규칙, 새는 혈액 공급 및 종양의 현지 면역 억제 등의 요인이 역할을 제안했습니다. 대부분의 잠복기 연구 xenogr를 활용 한고물 종양 모델은 박테리아 벡터 종양의 식민지를 조사합니다. 자발적으로 발생하는 종양의 손쥐 모델은 밀접하게 vasculature.......
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공개 사항
관심 없음 충돌이 선언 없습니다.
감사의 글
저자는 유럽위원회 (European Commission) 일곱 번째 프레임 워크 프로그램 (PIOF-GA-2009-255466)와 아일랜드 보건 연구위원회 (HRA_POR/2010/138)에서이 원고에 관련된 지원을 인정하고 싶습니다. 럭스 태그 E. 대장균 박사 코르 막 Gahan, 대학 대학 코르크에서 일종의 선물이었다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 시약의 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 코멘트 |
| 4T1 세포 라인 | ATCC | CRL-2539 | 자발적으로 발생하는 BALB / C 유방 종양에서 파생 Syngeneic 유방암 모델 |
| DMEM | 시그마 - 알드리치 | D6429 | Dulbecco의 수정 된 이글의 매체 |
| PBS | 시그마 - 알드리치 | D8537 | 인산염은 식염 버퍼 |
| Xenogen IVIS | 캘리퍼스 생명 과학 | 2D 이미지에 대한 IVIS 100, 3D에 대한 IVIS 스펙트럼. | |
| Luria 국물 밀러 (LB) | 시그마 - 알드리치 | L2542 | E.의 성장 매체 대장균 |
| 에리스로 마이신 | 시그마 - 알드리치 | E5389 | 항생 물질 |
| 스트렙토 마이신 | 시그마 - 알드리치 | S9137 | 항생 물질 |
| MF1nu/nu 마우스 | 할렌 (UK) | 069 (뉴) / 070 (뉴 / +) | Hsd : Athymic 누드 - Foxn1nu |
| Balb / C 마우스 | 할렌 (UK) | 066 | Haplotype : H-2 D |
| Gavage 바늘 | 수의사 기술 솔루션 (UK) | DE009 | 22G X 38mm 바로 gavage 바늘 |
| IV 주입 주사기 | BD BioSciences | 309309-1 ML | 28 G X ½ 인치 마이크로 미세 IV 바늘과 인슐린 주사기. |
| 종양 접종에 대한 주사기 | 브라운 | 9161376V | Omnifix 26 G X ½ 인치 바늘 |
참고문헌
- Cronin, M., et al. High resolution in vivo bioluminescent imaging for the study of bacterial tumour targeting. PLoS One. 7, e30940(2012).
- Kuo, C., Coquoz, O., Troy, T. L., Xu, H., Rice, B. W. Three-dimensional reconstructio....
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재인쇄 및 허가
