마우스 성기 기관에서 림프구를 분리 할 수있는 효과적인 방법이 설명되어 있습니다. 이 방법은 효율적으로 분리 할 수 있도록 효소 분해와 Percoll 기울기 분리에 활용합니다. 이 기술은 다른 종에 사용하기 위해도에 적용 할 수 있습니다
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이 논문에서
요약
초록
, 위장병 비뇨 생식 및 호흡기 책자에서, 바이러스 및 박테리아 1로 병원균에 대한 항목의 포털을 제공 등의 점막 표면. Mucosae는 창자에있는 Peyers 패치와 호흡기의 코 - 관련 lymphoreticular 조직 등의 병원균에 대한 면역을 생성하는 것도 호스트의 유도 사이트입니다. 이 독특한 기능은 호스트 방어 시스템의 중요한 플레이어로 점막 면역을 제공합니다. 많은 연구 위장병과 호흡기 점막 사이트에 초점을 맞추고있다. 그러나, 생식 점막 사이트의 약간의 조사가되었습니다. 성기 요로 점막은 세균과 바이러스 감염 등의 성병 (STD)의 기본 감염 사이트입니다. 성병은 오늘날 세계적가 직면하고있는 가장 중요한 건강 문제 중 하나입니다. 질병 통제 예방 센터는 미국 19 명의 새로운 전염성 매년있는 것으로 추정하고 있습니다. STDS 매년 2 미국 의료 시스템에서 1백70억달러 비용, 그리고 즉각적이고 평생 건강 결과에 비용 개인보다. 이 문제를 직면하기 위해, 생식 점막 면역의 큰 이해가 필요하고 림프구를 분리하면 이러한 연구의 필수 구성 요소입니다. 여기, 우리는 reproducibly 다른 종에 대한 적응을 위해 수정할 수 있습니다 면역 연구 손쥐 여성 성기 책자에서 림프구를 분리하는 방법을 제시한다. 아래에서 설명하는 방법은 한 마우스에 기반을두고 있습니다.
프로토콜
1. 성기 기관의 제거
- 승인 된 지침을 사용하여 마우스를 안락사시켜야. 낮은 중간 선을 절개하고 피부를 철회.
- 수란관에서 질구까지 전체 성기 기관을 분리하고 제거합니다.
- 가위로 길이 방향 전체 기관을 엽니 다.
- 전체 RPMI-10/EDTA있는 배양 접시에서 훌륭한 조각 (<1mm 정도) (아래의 공식을 참조)로 미세 수술 가위로 성기 기관을 잘라로 설정 자석 교반기에 실온에서 125 ML 플라스크에 조직을 저어 15 분. 이 절차는 두 번 반복되는 다음 상피와 다른 파편을 포함하는 표면에 뜨는는, 삭제됩니다.
- 셀 스트레이너 (40μm)를 통해 플라스크의 내용을 넣어. 전체 매체 EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산)의 잔류 물을 씻어.
열 inactivated RPMI 500 ML (Gibco), 10 % 태아 소 혈청 (FBS),, 5 ML 페니실린 / 스트렙토 마이신, 5 ML 100 HEPES : 전체 RPMI/10.
전체 RPMI-10/EDTA : 5μM E와 10% RPMI (위 등)DTA
2. 성기 요로 조직을 소화
- 20 ML 신선한 RPMI-10/collagena....
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토론
이 프로토콜에서, 마우스 성기 책자에서 림프구를 준비하는 방법에 표시되며 쉽게 마스터 수 있습니다. 이 과정의 가장 중요한 포인트는 얼음에 세포를 유지하여 세포 생존 능력을 유지하는 것입니다. 이 방법에서 세포 수율은 기술, 마우스의 전염성 상태 (나이브 또는 감염 후 일), 병원체 (세균, 바이러스, 곰팡이)와 손쥐 생식 기관 심사의 절 (수란관, 자궁, 처리, 기술에 따라 달라집니다 질 세그먼트 또는 전체 성기 기관). 우리 그룹과 다른는 5-7 마우스 성기 요로 다른 림프구 인구의 다양한 연구를 발표했습니다. 손에 한 순진한 BALB / C 마우스에서 전체 성기 요로 2를 생성 할 수 있습니다 × 10 6 세포를 90 % 생존과. 많은 경우에서, 림프구는 더 기능적 및 / 또는 흐름 cytometric 분석 3-10에 사용됩니다. 우리의 방법, CE에 의해 일반적으로 사용되는 절연 방법 11에 비해붙인다 수율은 10 배 증가합니다. 이 절차는 .......
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공개 사항
관심 없음 충돌이 선언 없습니다.
감사의 글
우리는 기금 보조금 R01-AI026328 (KAK) 및 R01-AI079004 (KAK)에 대한 NIH에 감사드립니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | |
| Collagenase | 시그마 생명 과학 | C2139-1G | |
| Percoll | GE 헬스 케어 바이오 과학 | 17-0891-01 | |
| RPMI1640 | 생명 기술의 Gibco | 11,875 |
참고문헌
- M, The impact of perinatal immune development on mucosal homeostasis and chronic inflammation. Nat. Rev Immunol. 12, 9-23 (2011).
- Centers for Disease Control and Prevention. 2010 Sexually Transmitted Diseases Surveillance. , Centers for Disease Control and Prevention. (2010).
- Jain, S., P....
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재인쇄 및 허가
