사용 모니터링 수지상 세포 이동<sup&gt; 19</sup&gt; F /<sup&gt; 1</sup&gt; H 자기 공명 영상

요약

MRI를 사용하여 세포 추적 지난 몇 년 동안 괄목할만한 주목을 받고있다. 이 프로토콜은 불소와 수지상 세포의 라벨 설명 ( ¹⁹ F)이 풍부한 이들 세포의 생체 내 응용 프로그램에서 입자와 함께 배수 림프절에 그들의 마이 그 레이션의 정도를 모니터링 ¹⁹ F / ¹ H MRI와 ¹⁹ F MRS.

초록

이러한 자기 공명 영상 (MRI)와 같은 비 침습적 영상 기법의 지속적인 발전은 크게 살아있는 유기체의 생리 학적 또는 병리학 적 과정을 연구하는 능력을 개선했습니다. MRI는 생체 내 이식 된 세포를 캡처를위한 유용한 도구로 증명된다. MR 휴식 시간에 영향을 미치는 조영제 MRI 만들어 사용 초기 셀 라벨 전략 (T1, T2, T2 *)와 라벨 세포가 존재하는 신호의 향상 (T1) 또는 고갈 (T2 *)로 이어집니다. T2와 같은 초소형 산화철 에이전트 (USPIO) 등 * 개선 에이전트는 세포 이동 및 일부도 임상 적 적용을위한 FDA에 의해 승인 된 공부를하기 위해 고용되었다. T2 * 에이전트의 단점은 혈전, 마이크로 출혈이나 기포와 같은 다른 아티팩트의 표시 세포에 의해 생성 된 신호 멸종을 구별하는 어려움이있다. 이 문서에서는, 우리는 생체 내 추적 세포에 대한 새로운 기술을 설명하는불소 ⁽¹⁹ F) 부유 입자와 세포를 라벨링을 기반으로합니다. 이러한 입자는 퍼 플루오르 카본 (PFC) 화합물을 유화하고 이후 MRI ¹⁹ F로 군데 할 수있는 레이블 세포를 사용하여 준비가되어 있습니다. 생체 포함 (I) 후 ¹⁹ F MR 분광법에 의해 세포 신호를 정량화하는 배경이없는 이미지와 완전한 세포 selectivityand (II)의 가능성을 산출 생체 내 탄소 결합 ¹⁹ F,의 부재에서 세포 추적을위한 PFCs의 중요한 장점 .

서론

생체 내에서 세포의 추적 생물 의약의 여러 분야에서 중요한 측면이다. 이 경우, 선택적으로 일정 기간 동안 세포를 지역화 할 수 있습니다 비침 투 이미징 기술은 매우 가치가있다. 세 가지 차원 자기 공명 영상 (MRI)의 개발에 앞서, 면역 세포 이동의 추적 현미경 분석 또는 조직 생검에 국한되었다. MRI의 도움으로 세포 추적은 생체 내에서 면역 세포의 행동을 연구 면역을 위해뿐만 아니라, 지난 몇 년 동안 엄청난 주목을 받았다뿐만 아니라, 임상 및 줄기 세포 연구자있다. 90 년대 중반 동안, 산화철의 첫 번째 연구는 ¹ MRI로 추적 셀 개발의 폭포를 시작 나노 입자. 산화철 입자는 레이블 세포의 MR 휴식 시간 (T2 *) 단축함으로써 MR 영상에서 신호 고갈의 원인이됩니다. 산화철 입자는 라벨 식세포 ^2, 희소 돌기 아교 세포 P로 사용되어왔다rogenitors ³ 그리고 많은 다른 세포 유형. 이들 입자 중 일부는 임상 흑색 종 환자 ⁴ 세포 백신을 라벨에 대한 FDA에 의해 승인되었습니다. 생체 또는 철 산화물 입자와 세포의 생체 라벨링 때문에 T2 * 신호의 단축에 의존하고 후자는 같은 마이크로 출혈, 철의 예금이나 기포 등의 생체 감수성 관련 T2 * 효과에 의해 초래 될 수있다 그것은 다른 배경에서 생체 내에서 T2 * 신호 멸종 ^{5 레이블} 셀을 식별하기 어려울 수 있습니다.

이 문서에서는, 우리는 ¹⁹ F / ¹ H 자기 공명 영상 (MRI)을 이용하여 생체 내에서 수지상 세포 (DC)를 추적하는 방법을 설명합니다. 이 세포 추적 기술은 MRI의 ¹⁹ F에 대한 최초의 인식 응용 프로그램은 ^{7보고했다} 몇 년 후 2005 년 ^6에 도입되었다. 하나의 중요한 ADVA산화철 입자 셀 라벨에 ¹⁹ F의 ntage는 조직의 ¹⁹ F의 낮은 생물 발생이다, 이것은 기본적으로 배경이없는 이미지를 매우 선택적으로 세포를 추적 할 수 있습니다. 또한, 기존의 상반기 MRI에서 얻은 해부 영상과 이식 표시된 세포에서 ¹⁹ F MR 신호를 중첩 할 수 있습니다. ¹⁹ F / ¹ H MRI 따라서 생체 내에서 세포의 이동을 조사 연구에 상당히 관련이 있습니다. 이 방법으로 공부 세포는 ¹⁹ F 풍부한 입자로 표시되어 있습니다. 주로 탄소와 불소 원자 구성된 합성 파생 된 과불 화탄소 (PFCs의)는 일반적으로 입자를 제조하는 데 사용됩니다. 이 화합물은 물에 불용성이며, 관내 또는 생체 내 응용 프로그램에 앞서 유화해야합니다. F-MRI 추적 실험은 생체 내 ^19에 대해 다른 그룹에 의해 고용 된 PFC 입자의 일반적인 크기100 nm의 245 nm의 ^6,8-10 사이의 범위. 우리는 그러나 표시 한 증가 입자 크기 (> 560 nm의)와 퍼플 루오-15-크라운 - 5 - 에테르 (PFCE) 입자의 증가와 수지상 세포를 라벨에 효율 ^11.

프로토콜

모든 동물의 절차를 수행하기 전에 지역 기관 동물 복지위원회의 승인을 받아야한다. MR 측정시 마취 및 생리 학적 모니터링의 적절한 수준 (체온, 호흡 속도) 필수 요구 사항입니다.

1. 마우스 골수 유래 수지상 세포의 생성

1. C57BL에서 골수 세포를 추출 / 6 마우스는 이전 ¹² 설명했다.이 프로토콜은 다시 1992 ¹³ 날짜 원래 랄프 M. Steinman (1,943에서 2,011 사이), 수지상 세포 ^(14)의 발견의 그룹에 의해 설명되었다.
2. 간단히, 쥐를 희생 직후 경골과 비골의 압축을 풉니 다. 층류 후드 (미생물 오염을 방지하기 위해)에서 작동, 세척 매체 (5 % FBS, RPMI 1 % 페니실린 / 스트렙토 마이신, 1 % HEPES) ^12와 작은 페트리 접시에 골수를 플러시.
3. 셀 스트라 통해 세포 현탁액을 전송iner (100 μm의 메쉬 크기, 나일론) 멸균 50 ML의 원심 분리기 튜브에 뼈와 남은 조직을 제거하기 위해합니다. 몇 가지 세척 단계와 용해 단계 ¹² 이후 판 블루와 혈구를 사용하여 가능한 세포를 계산합니다.
4. 40 세포의 농도 문화 매체 ML ^-1을 Resuspend 골수 세포 (RPMI 10 % FBS와 보충, 1 % 페니실린 / 스트렙토 마이신, 1 % HEPES, 1 % L-글루타민) 마우스 과립구의 75 NG ML ^-1을 포함 플라스미드 마우스 GMCSF 형질 전환 293FT HEK 세포의 상층 액에서 얻은 대 식세포 콜로니 자극 인자 (MGM-CSF). 배양 접시에 세포 현탁액 10 ㎖ (4 × 10 ⁶ 세포) (100mm X 20mm)를 전송하고 (37 ° C, 5 % CO ₂₎ CO ₂ 배양기에서 배양한다. 3 일에 10 ML 신선한 매체 (75 NG ML ^-1 MGM-CSF의 최종 농도를 유지)와 오래된 매체를 보충. 하루에 6, 오래된 매체의 10 ML을 제거하고 보충10 ML 신선한 배지로 (MGM-CSF 최종 농도 = 75 NG ML ^-1). 8 일에 오래 된 매체의 10 ML을 제거하고 10 ML 신선한 매체 (MGM-CSF 최종 농도 = 150 NG ML ^-1)로 보충.
5. 하루 10, 24 시간 동안 1 μg ML ^-1 리포 다당류 (LPS)로 차별화 된 DC 성숙.

2. ¹⁹ F 풍부한 입자와 수지상 세포의 레이블

1. 24 시간 성숙 단계 (1.5), 라벨 DC시에 1 mM의 불소가 풍부한 퍼플 루오-15-크라운 - 5 - 에테르 (PFCE)는 24 시간 동안 입자 (500-560 nm의). 세포 방해 티타늄 sonotrode를 사용하여 60 초 동안 연속 펄스 프로그램 (진폭 100 %, 전력 = 250 W)를 고용 (총 부피 2.5 ml)에 플루로 닉 F-68에 PFCE을 유화로 큰 불소라는 입자를 준비합니다.
2. 상기 배양 단계에 따라 50 ML의 원심 분리기 튜브와 원심 분리기에 조직 배양 세포 스크레이퍼, 전송을 사용하여 성숙하고 불소 표시 DC 수확500 실온에서 5 분 × g.
3. 남은 입자와 죽은 세포를 씻어, 폴리-L-라이신 요리를 준수 수확 세포를 둡니다. 이 단계를 준비하려면 1 시간 37 ° C에서 폴리-L-라이신 (1 MG ML ^-1)로 코팅 페트리 접시는 이후 PBS와 언 바운드 폴리-L-라이신을 씻어.
4. 혈청이없는 배지에서 폴리-L-라이신 - 코팅 접시에 수확 세포보다 배양하고 (37에서 1 시간 ° C, 5 % CO ₂₎ 세포가 부착 할 수 있습니다.
5. 비 부착 세포, 나머지 입자와 죽은 세포를 버리고로 3 회 세척 매체를 씻어 사전 예열 (37 ° C) PBS.
6. 트립신-EDTA 처리 (0.25 % 트립신 - EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산), 37 ° C에서 3 분 배양)하여 수확 자기편 세포를.
7. 다른 세척 원심 분리 단계에 따라 혈청이없는 멸균 PBS에서 성숙 DC의 필요한 금액을 resuspend을.
8. 세포가 성공적으로 표시되었는지 여부를 확인하려면, 그것은 physicoche을 확인하는 것이 좋습니다유동 세포 계측법 (FACS)를 사용하여 세포의 화학적 인 특성. 이전 ¹¹ 설명 된대로 옆으로 분산 (SSC)는,이 세포에서 증가 단위를 공개해야한다. 그것은 또한 섬유 아세포는 DC 문화를 오염 할 수 있으며 병렬 ¹⁹ F 입자를 취할 수있는 염두에 보관해야합니다. 따라서 DC의 순도는 생체 내 응용 프로그램에서 이전에 (FACS를 사용하여 CD11c ⁺ CD11b ⁺ 세포의 비율을 측정하여) 평가되어야한다.

3. ¹⁹ F-라벨 수지상 세포의 생체 내 응용 프로그램

1. 홀더에 마우스를 배치하여 intracutaneously C57BL / 6 마우스의 뒷다리에 100 μL를 조심스럽게 피부의 상위 계층에 26 ½ G 바늘을 삽입 - 50의 볼륨 - DC를 (10 ⁷ 10 ⁶⁾ 관리 이전 응용 프로그램 (영구적으로 부착 된 바늘을 사용 0.5 ML의 투베르쿨린 주사기를 죽은 양을 최소화하기 위해). 을 보장하기 위해N 적절한 피내 응용 프로그램, 그것은 바늘의 삽입 된 부분은 피부 아래에 부분적으로 표시하는 것이 중요합니다. 바늘이 더 이상 표시되지 않는 경우, 바늘은 피부 층에 너무 깊이 삽입되었습니다. 훈련받지 않은 개인에 대한, 피내 응용 프로그램은 마취하에 수행 할 수 있습니다.
2. 생체 불소에 의한 이미지 사지 ⁽¹⁹ F) / 양성자 ⁽¹ H) MRI (다음 섹션 참조) 21 시간 뒤에 주입.

4. VIVO에서 ¹⁹ F / ¹ H 자기 공명 영상

MR 스캔 설정을위한 자세한 설명은 제어 소프트웨어 Paravison (버전 5.1)를 사용하여 브루 커 MR 스캐너를 참조하십시오. 공급 업체 특정 기능과 항목을 참조 이름은 이탤릭체로 강조되었다. 다른 MR 스캐너에 대해 이러한 단계는 제조업체의 지침에 따라 조정해야 할 수도 있습니다.

1. 전용 액세스를 정렬작은 동물 MR 스캐너. 빠른 바이오 메드, 뷔르츠부르크,, 적절한 화질, 9.4 테슬라 이상과 맞춤형 고주파 코일 (예를 들어 ^{1 시간} / ¹⁹ F 이중 조정 볼륨 RF 코일, 35mm 내경 50 mm 길이의 자기장 강도 시스템에 대한 독일) 권장됩니다.
2. MRI 이전에, 마취 및 생리적 모니터링을위한 MRI 스캐너의 설정을 준비합니다. 동물 침대 / 홀더의 호흡 마스크가 isoflurane을 시스템에 연결하고 온도 프로브와 호흡 패드 원격 동물 모니터링 시스템 (eg 모델 1025, SA 인스트루먼츠, 뉴욕, USA)에 연결되어 있는지 확인합니다. 후자는 체온과 호흡과 같은 동물의 중요한 매개 변수를 모니터링하는 역할을한다.
3. isoflurane을 시스템에 연결된 마우스 챔버를 사용하여 흡입 마취로 마우스를 마취. 0.2 L 분 ^-1 0.1 L 분 ^-1, 각각에 공기와 O _2의 유량을 조정및 마취의 필요한 수준까지 약 2 분 isoflurane을 3 %는 (기화기에서 조정) (응답이 다음 발가락 핀치)에 도달. 최적의 유량은 사용중인 설정에 따라 다를 수 있습니다. 높은 유량 탈수로 이어질 수도 있다는 점에 유의해야합니다. 위에서 언급 한 동물의 상태를주의 깊게 모니터링은 항상 필요합니다.
4. 작은 동물 MR 스캐너 (그림 1)의 마우스 침대 / 홀더 경향 마우스를 놓습니다.
5. 공기와 O ₂ 일정에 대한 유량을 유지하면서, 0.8 isoflurane을 기화기 조정 - 1.5 %를 최적의 호흡 패턴에 도달 할 때까지. 50 호흡 - 분당 70 심호흡을 권장합니다.
6. 따뜻한 물 (또는 양자 택일로 따뜻한 공기) 순환 시스템을 채택하여 실험 기간 동안 36-37 ° C에서 체온을 유지합니다.
7. 측정하는 동안 멸균 눈 바르는 연고와 마우스 수분의 눈을 유지합니다.
8. 동물을 확보 한 후영상 홀더 및 모니터링 시스템에 대한 연결에, ¹ H / ¹⁹ F RF 코일 (동물 스캐너 자석의 등각에 위치하는)의 중심에 홀더를 이동합니다.
9. 자동화 된 방법 (예 : 모터 구동 동물 홀더와 결합 위치 레이저를 사용하여)으로 또는 수동으로 홀더를 이동해야하는 거리를 계산하여도, 무릎 자석의 등각 내에 자리 잡고있는 등 마우스의 위치를 설정 자석에 등각에 도달.
10. 스캐너의 동물의 정확한 위치를 확인하고 나중에 이미지 슬라이스 구조 (공간 즉 크기, 위치 및 회전)의 계획에 대해 신속하고 낮은 해상도의 이미지를 사용하여 세 가지 표준 방향 (시상, 관상, 축)의 이미지를 정찰 획득 취득 방법 (FLASH 펄스 시퀀스를 사용 예 TriPilot 프로토콜).
11. ¹ H 공진 주파수에 RF 코일을 조정 (예를 들어,. 400.1 9.4 T에 대한 MHz 이상)와 ¹⁹ F 공진 주파수 (예 : 9.4 T를위한 376.3 MHz 이상)과 동물 MR 스캐너의 튜닝 모니터를 사용하는 50 옴 코일의 특성 임피던스를 일치합니다. 튜닝 및 매칭 전송 및 신호 수신을위한 최적의 조건을 달성하기 위해 필요합니다.
12. RF 진폭 (조정하려면 마우스 라 모어 주파수 (예를 들어, ADJ_SF) 및 참조 이득 RF를 조정 미세 조정에 자기장 (예 : ADJ_SHIM) 시스템 주파수 조정의 동질성을 shimming 등 필요한 자동 시스템 설정을 수행 예를 들어 ADJ_REFG). 이러한 모든 설정은 가능한 한 균질로 관심의 영역에서 정적 변수 마그네틱 필드 (B _0, B _1)을 확인하는 것이 중요합니다.
13. 시야 (FOV) 등이 낮은 사지를 모두 AR을 조정 한 후, 세 개의 직교 방향에 따라 정찰 이미지의 두 번째 (위)를 취득골반에서 도보 (LXWXH = 50x25x25 mm)로 표시 마. 이러한 이미지는 최종 3 차원 ¹ H / ¹⁹ F 스캔의 방향을 계획하는 역할을한다.
14. TR / TE = 1500 / 53 밀리, FOV = 50x25x25 mm, 행렬 = 400x200x200, RARE 요인 = 16 (. 스캔 시간 약 60 분) : ¹ H-스캔 TurboRARE 3D 프로토콜을 설정합니다. 스카우트 이미지의 도움으로 FOV를 조정 (신호등) 스캔을 시작합니다.
15. 적어도 1,000 밀리의 TR로 단일 펄스 FID 시퀀스를 넣습니다. 편집 스캔을 열고 ¹⁹ F.를 핵으로 설정 도구 상자의 편집 방법에서 자동으로 참조 게인을 취소하여 수동 게인 설정을 사용합니다.
16. GSP를 (설치 이동)을 사용하여 실시간으로 MR 신호를 표시하는 데이터를 기록하지 않고 측정을 시작합니다. 수집 창 내에서 ¹⁹ F 스펙트럼 신호가 너무 낮 으면, 편집 방법 및 / 더 평균을 추가하거나시까지 펄스 감쇠기 (TX0 또는 SP0 슬라이더)를 조절gnal 명확하게 볼 수 있습니다. 인수 창에서 0 Hz에서 ¹⁹ F 스펙트럼 피크 중간에 순서대로 기본 주파수를 조정합니다. 기본 주파수 및 보도 중지를 적용합니다. 마취로 사용 isoflurane을가 배경 신호를 생성 할 수 있습니다. 9.4 테슬라 MRI에서 ¹⁹ F-함유 입자와 isoflurane을 사이에 화학적 변화는 1,800 Hz의 정도입니다. 여기 대역폭이 ¹⁹ F-라벨 세포 나 입자 흥미로운 isoflurane을 함께를 피하기 위해 3,600 Hz보다 작은 지 확인합니다. 기본 주파수는 ¹⁹ F-라벨 세포에 의해 생성 된 신호에서 올바르게 설정해야합니다. 실험이 적합하다고으로 또는 마취의 다른 방법을 사용할 수 있습니다.
17. 복제 (중복) 이전 ¹ H 스캔 TurboRARE 3D 프로토콜입니다. 방법 및 선택 해제 자동 참조 이득 (위)을 편집 이동합니다. 편집 스캔에서 ¹⁹ F 핵을 설정합니다. 128x64x64 행렬을 변경그리고 적어도 40 (최대 64)까지 RARE-팩터. TR / TE 1000 / 6 밀리와 64 평균의 경우, 검사 시간은 약 70 분입니다. 101 (도구 상자)에 수신기 이득을 설정하고 GOP를 (파이프 라인을 이동)를 사용하여 더 이상 조정하지 않고 스캔을 시작합니다.
18. 스캔이 완료되면 MR 스캐너에서 마우스 홀더를 철회. 주의 홀더에서 마우스를 분리합니다. 마우스 생체 분석 (예 : 조직학 또는 분광 아래 참조) 희생하지 않을 경우 완전히 마취에서 회복 될 때까지 직접 MR 측정 한 후, 밀접하게 모니터링 할 수 있습니다. 체온 조절이 마취에 의해 영향 때문에 복구 프로세스 동안 따뜻한 온도 조절 패드에 배치되는 별도의 새장에 마우스를 넣습니다. 마우스가 완전히 마취에서 회복되면, 그 보유 케이지와 동물 방에 그것을 반환합니다.
19. ¹⁹ F 이미지 ¹ H 이미지에 오버레이하려면보기 메뉴 O를 사용하여동일한 소프트웨어 (Paravison)에 ption를. 언더 기능은 상관 관계에서 찾을 수 있습니다. , 언더을 저장할 새 이미지를로드하고 표까지 봐에서 새 색상을 정의하여 ¹⁹ F 계층을 강조 표시합니다. ¹⁹ F, ¹ H 검사를 구별하기 위해, ¹⁹ F 신호가 선택한 색상과 배경 ¹ H 이미지를 가질 것이라고 같은 그레이 스케일로 유지됩니다 (잘라 테이블을보십시오) 선택한 색상에 대한 임계 값을 변경합니다. 다른 후 처리 프로그램 (예를 들어 ImageJ에) ¹ H / ¹⁹ F 이미지 오버레이를 만들 수 있습니다.
20. ¹⁹ F 신호의 생체 정량화가 필요하다면, 이전에 ^15,16을 설명한대로 간단한 양적 프로토콜을 따르십시오. 간단히, 정량화가 마우스 옆에 FOV 내에서 PFCE - 에멀젼의 알려진 농도 기준 관을 배치하여 수행 할 수 있습니다. MR 이미지, 콴을 획득 한 후관심 영역 (ROI) 분석을 사용하여 ¹⁹ F 신호의 강도를 tify 그림 2와 같이 체외 보정 곡선을 비교합니다.

5. 림프절 자기 공명 분광법 (MRS)

1. 마우스를 희생 한 후, 작은 5 개 mm NMR 튜브에 오금 림프절과 장소를 제거하고 2 % PFA 100 μl를 추가합니다.
2. 림프절을 포함하는 NMR 튜브를 들고 최소 5 ㎜의 구멍을 가진 ¹⁹ F 분광 코일 (토 로이드 코일 등) 설치합니다.
3. 코일 내부의 NMR 튜브를 놓고 자석의 등각에 코일을 이동합니다.
4. ¹⁹ F 공진 주파수 (예를 들어, 9.4 T를위한 376.3 MHz 이상)에 RF 코일을 조정하고 동물 MR 스캐너의 튜닝 모니터를 사용하는 50 옴 코일의 특성 임피던스를 일치합니다. 튜닝 및 매칭 전송 및 신호를위한 최적의 조건을 달성 할 필요가있다수신.
5. 0 Shimming 도구 상자 내의 모든 심 매개 변수를 설정하고 Apply (적용)를 누릅니다. 보통은 샘플의 양이 상대적으로 작기 때문에 shimming 방법을 적용 할 필요가 없습니다. 충분한 ¹⁹ F 신호를 사용할 수있는 경우 자동 방법은 shimming 시스템 주파수 및 상기 한 바와 같이 수신기의 이익을 위해 적용 할 수있다.
6. 적어도 1,000 밀리의 TR로 단일 펄스 FID 순서를로드합니다. 스캔을 편집하고 ¹⁹ F.에 핵을 설정 열기 도구 상자의 편집 방법에서 자동으로 참조 게인을 취소하여 수동 게인 설정을 사용합니다. 1로 평균의 수를 설정합니다.
7. GSP를 사용하여 시퀀스를 시작합니다. 수집 창 내에서 ¹⁹ F 스펙트럼 신호가 너무 낮 으면, 편집 방법 및 / 더 평균을 추가하거나 신호까지 펄스 감쇠기 (TX0 또는 SP0 슬라이더)가 명확하게 볼 수 조절. 기본 주파수를 조정하므로 ¹⁹ F의 SPEctral 최대 0 Hz에서 수집 창의 중앙에 있고 기본 주파수를 적용합니다. 90 ° 여기에 도달하는 신호를 최대화하기 위해 다시 펄스 감쇠기를 조정합니다. 신호가 최대 눌러 정지에있을 때.
8. 64 256 사이의 편집 방법 (또는 그 이상 필요한 경우, 신호에 따라)의 평균을 설정하고 GOP를 사용하여 인수를 시작합니다. 감지 된 신호는 평균의 수에 비례 상관 관계. 정량화하는 동안 감지 된 신호가 하나의 평균으로 정규화해야한다는 점에 유의하십시오. 또한, 알려진 농도 또는 교정 곡선의 보정 표준은 표준화 된 ¹⁹ F 신호 (그림 2) 세포의 수를 계산하는 것이 필요하다.
9. 검사가 완료되면, 샘플을 제거 다음 샘플을 배치 단계 5.3를 진행합니다.

결과

피내 응용 프로그램에 다음과 같은 여덟에 이십일시간는 ¹⁹ F-라벨 돌기 세포 (DC)의 배수 오금 림프절로 마이그레이션 할 수 있습니다. 배수 politeal 림프절로 림프 덕트를 통해 DC의 움직임은 ¹⁹ F DC의 이미지 (그림 2A)와 ¹ H 해부 영상을 중첩에 의해 평가 될 수있다. 우리는 이전에 생체 내에서 이러한 세포의 이동뿐만 아니라, 흡수 효율 ¹¹ 등 DC immunobiology에 ¹⁹ F-입자 크기의 영향에보고했다. 림프절에 DC 마이그레이션의 범위를 정량화하기 위해, 우리는 림프절을 추출하고 ¹⁹ F MRS (그림 2B) 수행합니다. 우리는 우리가 추론 할 수있는 동일한 PFCE 입자 (교정 곡선 그림 2C)으로 표시 DC의 서로 다른 숫자에서 얻은 ¹⁹ F 신호...

토론

¹⁹ F / ¹ H MRI는 림프 노드에 DC의 움직임에 따라 고용이 방법은 생체 내에서 면역 세포의 이동 패턴을 연구 할 수있는 기회를 제공합니다. 수지상 세포는 빠르게 단단히 특정 기판에 ¹⁷ 준수하지 않고 입체 구조를 통해 기동 할 수있는 면역 세포를 마이그레이션 훌륭한 예입니다. 기술 기술의 낮은 공간 해상도 (μm의 범위)이 기술로, 다중 광자 현미경으로 얻을 수있는 높은 해상도 (nm의 범위)와 비교할 수 없습니다 비록 생체에 이상 세포 이동의 특성을 연구하기 위해 여전히 가능합니다 시간의 긴 기간. 또한, 현미경은 살아있는 유기체 내에서 이미지 큰 지역은 현재 적합하고, 제한된 깊이 침투보기의 제한된 필드가 있습니다.

기술의 noninvasiveness 때문에, 그것은 몬 가능합니다조사 후에 마우스를 희생하지 않고 하세 몇 일 동안 면역 세포의 이동을. 기술의 또 다른 장점...

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
REAGENTS
>C57BL/6 마우스	Charles River, Berlin
RPMI	Gibco	21875-091
FBS Superior	Biochrom AG	S 0615
HEPES	Gibco-Invitrogen	15630-056
Penicillin-Streptomycin	Gibco	15140-122
L-글루타민	Gibco	25030-024
Dulbecco's PBS	Sigma Aldrich	D8662
PFA	Santa Cruz	sc-281692
Perfluoro-15-crown-5-ether	ChemPur	391-1996
Pluronic F-68	Sigma Aldrich	P5556
페트리 접시 (35 x 10 mm)	VWR, Germany	391-1996
27 ½ G 주사기	VWR, 독일	612-0151
나일론 셀 스트레이너 (100 μ m mesh)	VWR, 독일	734-0004
NMR 튜브	VWR, 독일	634-0461
EQUIPMENT
해부 도구	FST
CO2 인큐베이터	바인더
소동물 MR 시스템	Bruker Biospin		9.4T BioSpec 94/20 USR, ParaVision 획득 및 처리 소프트웨어
1H/19F 이중 조정 가능한 볼륨 RF 코일	Rapid Biomed, Wü rzburg, 독일		35 mm 내경, 50 mm 길이
19F 분광 코일	내부		튜닝/매치 루프 코일, 4회전, 내경 5 mm, 길이 10 mm, 튜닝 및 매칭
이소플루란 흡입 시스템	Fö을 위한 두 개의 커패시터; hr Medical Instruments GmbH
동물 모니터링 시스템 Model 1025	SA Instruments Inc., New York, USA