단핵구 유래 대 식세포는 타고난 면역 시스템의 중요한 세포입니다. 여기, 우리는 사용하기 쉬운 설명 체외에서 모델. 기울기 원심 분리, 부정적인 비드 격리 및 특정 세포 배양 조건 사용하여 단핵구 유래 대 식세포는 표현형 및 기능 연구에 생성 할 수 있습니다.
단핵구 유래 대 식세포는 타고난 면역 시스템의 중요한 세포입니다. 여기, 우리는 사용하기 쉬운 설명 체외에서 모델. 기울기 원심 분리, 부정적인 비드 격리 및 특정 세포 배양 조건 사용하여 단핵구 유래 대 식세포는 표현형 및 기능 연구에 생성 할 수 있습니다.
단핵구 유래 대 식세포는 타고난 면역 시스템의 중요한 세포 유형을 나타냅니다. 대식 세포 생물학을 공부 마우스 모델 생쥐와 인간 단핵구 유래 대 식세포 사이의 표현형과 기능의 차이에서 고통. 그러므로, 우리는 여기에 인간의 기본 대식 세포를 생성하고 공부하는 체외 모델을 설명합니다. 간단히, 팔뚝 정맥에서 도출 말초 혈액의 밀도 기울기 원심 분리 한 후, 단핵구는 부정적인 자기 비드 분리하여 말초 혈액 단핵 세포에서 격리됩니다. 이 단핵구는 다음 대식 세포의 분화 또는 편광의 다른 유형을 유도하기 위해 특정 조건 하에서 육일 동안 배양한다. 모델은 사용하기 쉽고 마우스와 인간 사이의 종 별 차이로 인한 문제를 우회. 또한, 그것은 불후의 세포 라인의 사용을보다 생체 조건에 가깝다. 결론적으로, 여기에 설명 된 모델은 macrophag 연구에 적합하다전자 생물학, 질병 메커니즘과 새로운 치료 표적을 식별합니다. 비록 완전히 사후 얻은 동물이나 인간의 조직 실험을 교체하지, 여기에 설명 된 모델은 질병의 메커니즘과 다양한 인간의 질병에 매우 관련이있을 수 치료 표적의 식별 및 유효성 검사를 할 수 있습니다.
단핵구 유래 대 식세포는 타고난 면역 시스템의 중요한 세포 구성 요소를 나타내는 많은 급성 또는 만성 염증 과정 1에 기여한다. 대식 세포는 동맥 경화증이나 암이 같은 여러 염증성 질환에 중요한 역할을한다. 대식 세포 가소성의 높은 수준을 보여주고 지역 micromilieu 3에 따라 서로 다른 표현형을 가정 할 수 있습니다. 따라서, 대식 세포의 분화와 이질성을 연구하는 많은 질병의 병태 생리에 대한 지식을 향상을 위해 필수적이며, 새로운 치료 표적과 새로운 치료법 개발의 식별을 허용 할 수 있습니다.
많은 경우에, 쥐 모델은 특정 질병의 병태 생리를 조사하는 데 사용됩니다. 그러나 마우스 모델을 사용하여 대식 세포 생물학을 공부하는 것은 몇 가지 단점이 수반된다 : (1) perip에서 백혈구 집합 숫자의 비율 (즉, 단핵구와 과립구)쥐 또는 인간의 heral 피가 상당히 쥐와 인간의 병태 생리에서 단핵 세포의 서로 다른 역할을 제안 다릅니다. (2) 건강과 질병 4시 그 기능에 상당한 차이를 제안 쥐와 인간의 말초 혈액 단핵 세포 사이의 유전자 발현에 상당한 차이가 있습니다. (3) 인간의 상황에 마우스 모델에서 연구 결과의 전송은 다소 어....
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
1. 프로토콜
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
위에서 설명한 프로토콜을 사용하여, 우리는 정기적으로 25.1 X 10 6 ± 2.2 × 10 6 monocytes/100 ML의 피를 (26 독립적 인 실험에서 평균 ± 표준 오차, 그림 1A) 구하십시오. CD14에 대한 유세포 염색에 의해 결정 단핵구 순도는 정기적으로 95 % 이상 (97.1 ± 0.4 %, 3 독립적 인 실험 그림 1B에서 평균 ± 표준 오차)입니다. 판 블루 염색에 의해 결정 갓 고립 된 단핵구 세포 생존율은 95 % (데이터 표시되지 않음)보다 일상적으로 큽니다. 처음에는 세포가 둥근 모양과 플로트 있지만, 그들은 일반적으로 몇 시간 내에 고착 시작합니다. 준수는 "달걀 후라이"또는 스핀들 같은 모양 (그림 2)를 향해 형태의 변화와 연관되어 있습니다. 또는 산화 LDL의 추가 (지난 24 시간 동안 100 ㎍ / ㎖)없는 M-CSF (100 NG / .......
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
단핵구 유래 대 식세포는 타고난 면역 체계의 주요 세포 유형을 나타냅니다. 그들은 죽상 경화증이나 암 2을 (를) 포함하여 많은 염증성 질환에 중요한 역할을한다. 따라서, 대식 세포 생물학을 공부하는 많은 질병의 병태 생리에 대한 우리의 지식을 높이기 위해 필수적이며, 새로운 치료법의 개발을 허용 할 수 있습니다.
많은 연구는 마우스 모델의 과발현으로 적용하거나 관심의 특정 유전자를 결여. 단핵구 유래 대 식세포의 경우,이 쥐와 인간의 단핵구와 단핵구 유래 세포 4 사이에 상당한 차이가 있기 때문에 인간의 질병에 관련된 프로세스를 공부하는 가장 좋은 방법은 보이지 않습니다. 따라서 인간의 기본 셀을 사용하는 유효한 모델은 대식 세포 분화의 질병 관련 메커니즘을 연구 할 수있는 좋은 대안이 보인다.
여기에 제시된 체외 모델의 분명한 장점은 immortali에 의존하지 않는.......
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
저자는 이익 상충을 공개 할 필요가 없습니다.
우리는 우수한 기술 지원 나딘의 Wambsganss 감사합니다. 이 작품은 CAG에 혁신 기금 FRONTIER (하이델베르크 대학)에서 교부금에 의해 도이치 Forschungsgemeinschaft (GL599/1-1)에서 부여 의해 부분적으로 지원되었다
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 50 ml 원심분리기 튜브(멸균) | Fisher | 055398 | |
| D-PBS(1X), 액체(칼슘 또는 마그네슘 없음) | Invitrogen | 14190-250 | |
| EDTA | Sigma | T9285 | |
| BSA | Sigma | A-8806 | |
| FCS | Invitrogen | ||
| EasySep Human Monocyte Enrichment Kit | StemCell Technologies | 19059 | |
| EasySep | Magnet StemCell Technologies | 18000 | |
| FACS 튜브 | Fisher | 352008 | |
| Macrophage-SFM (1X) | Invitrogen | 12065-074 | |
| Penicillin-streptomycin | Sigma | P-4458 | |
| Nutridoma-SP | Roche | 11011375001 | |
| human M-CSF 10 μ g | Peprotech | 300-25 | |
| 세포 배양 플레이트 6-well | Fisher | 07-200-80 |
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
이 JoVE 논문의 텍스트 또는 그림 재사용 허가 요청
허가 요청