의 flybar : 파리에 주류 관리

요약

초파리는 알코올에 대한 행동 반응의 세포 및 분자 토대를 해부를위한 중요한 모델 시스템으로 떠오르고있다. 여기에서 우리는 쉽게 다른 실험에 적용 할 수 있고 학부 연구에 매우 적합하다주기 컨텍스트에서 주류 감도 데이터의 수집을위한 프로토콜을 제시한다.

초록

초파리 (Drosophila의 melanogaster의)은 알코올 연구 및주기 생물학 모두 설치 한 모델입니다. 최근에는주기 클록 주류 감도 아니지만 관용의 형성을 조절하는 것이 보였다. 여기, 우리는 세부 사항에 우리의 프로토콜을 설명합니다. 알콜의 flybar를 사용 파리에 투여된다. 이 설정에서, 포화 알코올 증기는 설정 비율 가습 공기와 혼합되고, 최대 4 개의 튜브에서 파리에 투여. 파리는 반복 실험 사이의 변화를 최소화하기 위해 표준화 된 조건에서 사육된다. 다른 유전자형이나 치료의 3 일 된 파리는 바람직하게는 직접 비교가 가능하게하는 두 개의 서로 다른 시점 (예를 들어, CT 5, CT 17)의 파리를 일치시켜, 실험에 사용됩니다. 실험 동안, 플라이는 휘어진 (LORR)을 보상하기의 손실을 나타내는 알코올 증기의 미리 결정된 비율 및 해충의 수에 1 시간 동안 노출되거나 나오지 아르ATION은 5 분마다 계산됩니다. 데이터는 세 개의 서로 다른 통계적인 방법을 사용하여 분석 할 수있다. 첫 번째는 파리의 50 %가 자신의 복원력 반사를 잃은하는 시간을 확인하고 유의 한 차이는 시점 사이에 존재 여부를 확인하기 위해 분산 분석 (ANOVA)을 사용하는 것입니다. 두 번째는 ANOVA 분석 한 다음 특정 시간 (분), 후 LORR을 보여 백분율 파리를 결정하는 것입니다. 마지막 방법은 다변량 통계를 사용하여 전체 시간 시리즈를 분석하는 것입니다. 프로토콜은 유전자형 간의 비주기 실험이나 비교에 사용될 수있다.

서론

초파리 melanogaster의이 약 ^2,3에 대한 인간의 응답과 유사하다 알코올 ¹ 이상성 행동 반응을 보여줍니다. , 및 진정 작용 (응답 모터 활동의 완전한 부족 : 알코올 농도가 낮은 초기 노출되면, 모터 조정의 부족, 자세 제어의 손실 보상하기 반사 (LORR 바로 잡는 반​​사 손실)로 대체, 전시 증가 운동 활성을 날아 기계적인 자극에) 알코올에 노출이 ^4-9 진행됨. 내인성주기 클록 생쥐 ^{10,11, 12} 래트에서 관찰로서 주류 감도 및 독성의 강한 변조기이고, ^{13 인간.} 초파리 연구의 최근 발전은주기 시계가 급성 알코올 감도 있지만 알코올 내성 ¹ 변조 보여 주었다. 돌연변이 연구와 공간의 유전자 조작을 통해 초파리에서 사용할 수있는 강력한 유전 적 접근 방법시간적 유전자 발현 복잡한 동작을위한 내부 세포 및 분자 메커니즘을 식별 약진을 허용하는 시스템을 제공한다. 조사 도구로 초파리의 사용은 급속히 포유류 ^14-16로 번역 할 수있는 알코올의 신경 생물학을 이해하는 실질적인 발전을 허용했다. 일 주기성 시계가 주류 감도를 변조 통해 분자 메커니즘의 이해를 용이하게하기 위해....

프로토콜

의 flybar 1. 총회

이론적 근거 및 개요 :이 시스템은 파리에 알코올 증기의 제어 비율을 관리 할 수​​ 있도록 설계되었습니다. 참고도 1의 개략적 인 개요를 제공의 flybar가 셋업 세 단계 (기류 조립, 알코올 및 물 병의 ​​셋업 및 관측 튜브의 조립체)에서 후술하는 바와 같이. 즉, 안정적인 공기 흐름이 각각 알코올과 물을 통해 버블을 혼합, 4 관찰 유리 병에 투여되는 두 개의 분획으로 분리된다.

1. 공기 흐름의 조립
   1. 유연한 실리콘 튜브 건물 공기 또는 Y-커넥터를 사용하여 일관성있는 공기 흐름 및 분할을 생성하는 수족관 통풍 장치 하나에 짧은 조각을 연결합니다. 시스템 (4 관측 바이알위한 통상적 1,000 ml / 분)를 통해 공기의 총량을 제어하는​​ 공기 유동 조절기를 제 1 분기를 연결한다.
   2. 제 2 튜브의 빠른 커넥터를 삽입공기 스트림은 교정 기류 영향을주지 않고 실험의 시작 부분에 중단 될 수 있도록. Y-커넥터를 추가하고 공기 조절기로 각 분기 튜브를 연결합니다.
   3. 공기 조절기에 튜브를 연결하고 두 개의 공기 흐름 미터를 연결합니다.
2. 알코올과 물 병의 셋업
   1. 공기 ....

결과

마커로 50 % LORR를 사용하여 알코올 감도의주기 변조.

하루 동안 주류 감도주기 변조를 보여주는 대표적인 예는도 2에 제시된다. LORR는 캔톤-S의 DD의 2 ^차 하루 동안 여섯 시점에서 측정 한 50 % LORR은 각 시점에 대해 결정 하였다. (: F _5,45 = 7.39, P <0.001, N = 6 ~ 10 시간마다 포인트 ANOVA) 분석은 하루 중 상당한 시간을 효과를 보여 주었다. 피셔의 LSD 테스트 CT 21 대 CT13, CT17 대 CT9 및 CT9 대 CT 21, CT9 대 CT17, CT5 대 CT13, CT5 대 CT5, CT5 대 CT1 사이에 유의 한 차이를 보였다.이 결과는 일치 우리의 이전에 발행 된 결과를 ^1.

야생 형 및 돌연변이 체의 차이점.

토론

알코올 남용과 사회에 대한 알코올 중독의 비용은 모두 ²⁹ 인간과 경제적 비용의 측면에서 엄청난 ^{(30, 31).} 초파리 모델로 신속하게 개인의 많은 수의 행동 반응을 조사하는 빠르고 다양한 시스템을 제공하고 같은 광범위 알코올 ^5,7,32-34 및주기 연구 ^35-37에 모두 사용하고있다.

여기, 우리는주기 조건에서 성인 파리에 알코올 증기의 제어 관리를위한 간단한 프로토콜을 설명했다.

표준화 된 조건에서 재배 파리는 자신의 복원력 반사를 잃은 파리의 수를 5 분마다 득점하는 동안 1 시간 동안 알코올 증기에 노출되어 있습니다. 여기에 설명 된 프로토콜로 인해 일정 조건에서 유입 및 주택에 대한 추가 요구 사항의주기 실험에 최적화되어 있습니다. 여러 단계를 간소화 할 수 있습니다이러한 적어도 하루 또는 어두운 붉은 빛의 조건 하에서.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
알코올 190 증거	다양한
통풍기	지역 애완 동물 상점		우리는 Whisper 60
실리콘 튜브 1/8 "	VWR	408060-0030
120° Y-커넥터	VWR	82017-256
빠른 분리	VWR	46600-048
플라스틱 튜브 클램프	Bell-art products	132250000	이 또는 다음
미니어처 공기 조절기	McMaster-Carr	8727K11	이 또는 이전
미니어처 공기 조절기 장착 브래킷	McMaster-Carr	9891K66
Gilmont 크기 12 유량계	VWR	29895-242
도구 클립	McMaster-Carr	1722A43	유량계를 고정하기 위해
바이알	VWR	89092-722
두 개의 구멍이 있는 고무 마개	VWR	59585-186	바이알에 적합
5mm Pyrex 유리관	Trikinetics	PGT5x65	이전 스토퍼
테프론 테이프	철물점		필요한 경우 스토퍼에 꼭 맞도록 고무
마개	VWR	59582-122	우리의 병에 맞습니다
일회용 유리 피펫	VWR	53283-768	가열로 길이와 구부리기에 맞게 절단
매우 세밀한 나일론 그물	VWR	다양한
15 와트 전구	철물점		천장 빨간불
사진 빨간 안전 광 필터			오버 헤드 빨간 빛
빨간 빛 미니 손전등 빨간 필터	Mag-light

을 사용합니다.에 가장 적합