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방법 논문

의 flybar : 파리에 주류 관리

10.5K 조회수

⸱

DOI:

10.3791/50442

⸱

2014년 5월 18일

 ,  ,  , 
1Department of Biological Science, Florida State University, 2Department of Biology and Biochemistry, Biology of Behavior Institute, University of Houston

이 논문에서

요약

초파리는 알코올에 대한 행동 반응의 세포 및 분자 토대를 해부를위한 중요한 모델 시스템으로 떠오르고있다. 여기에서 우리는 쉽게 다른 실험에 적용 할 수 있고 학부 연구에 매우 적합하다주기 컨텍스트에서 주류 감도 데이터의 수집을위한 프로토콜을 제시한다.

초록

초파리 (Drosophila의 melanogaster의)은 알코올 연구 및주기 생물학 모두 설치 한 모델입니다. 최근에는주기 클록 주류 감도 아니지만 관용의 형성을 조절하는 것이 보였다. 여기, 우리는 세부 사항에 우리의 프로토콜을 설명합니다. 알콜의 flybar를 사용 파리에 투여된다. 이 설정에서, 포화 알코올 증기는 설정 비율 가습 공기와 혼합되고, 최대 4 개의 튜브에서 파리에 투여. 파리는 반복 실험 사이의 변화를 최소화하기 위해 표준화 된 조건에서 사육된다. 다른 유전자형이나 치료의 3 일 된 파리는 바람직하게는 직접 비교가 가능하게하는 두 개의 서로 다른 시점 (예를 들어, CT 5, CT 17)의 파리를 일치시켜, 실험에 사용됩니다. 실험 동안, 플라이는 휘어진 (LORR)을 보상하기의 손실을 나타내는 알코올 증기의 미리 결정된 비율 및 해충의 수에 1 시간 동안 노출되거나 나오지 아르ATION은 5 분마다 계산됩니다. 데이터는 세 개의 서로 다른 통계적인 방법을 사용하여 분석 할 수있다. 첫 번째는 파리의 50 %가 자신의 복원력 반사를 잃은하는 시간을 확인하고 유의 한 차이는 시점 사이에 존재 여부를 확인하기 위해 분산 분석 (ANOVA)을 사용하는 것입니다. 두 번째는 ANOVA 분석 한 다음 특정 시간 (분), 후 LORR을 보여 백분율 파리를 결정하는 것입니다. 마지막 방법은 다변량 통계를 사용하여 전체 시간 시리즈를 분석하는 것입니다. 프로토콜은 유전자형 간의 비주기 실험이나 비교에 사용될 수있다.

서론

초파리 melanogaster의이 약 2,3에 대한 인간의 응답과 유사하다 알코올 1 이상성 행동 반응을 보여줍니다. , 및 진정 작용 (응답 모터 활동의 완전한 부족 : 알코올 농도가 낮은 초기 노출되면, 모터 조정의 부족, 자세 제어의 손실 보상하기 반사 (LORR 바로 잡는 반​​사 손실)로 대체, 전시 증가 운동 활성을 날아 기계적인 자극에) 알코올에 노출이 4-9 진행됨. 내인성주기 클록 생쥐 10,11, 12 래트에서 관찰로서 주류 감도 및 독성의 강한 변조기이고, 13 인간. 초파리 연구의 최근 발전은주기 시계가 급성 알코올 감도 있지만 알코올 내성 1 변조 보여 주었다. 돌연변이 연구와 공간의 유전자 조작을 통해 초파리에서 사용할 수있는 강력한 유전 적 접근 방법시간적 유전자 발현 복잡한 동작을위한 내부 세포 및 분자 메커니즘을 식별 약진을 허용하는 시스템을 제공한다. 조사 도구로 초파리의 사용은 급속히 포유류 14-16로 번역 할 수있는 알코올의 신경 생물학을 이해하는 실질적인 발전을 허용했다. 일 주기성 시계가 주류 감도를 변조 통해 분자 메커니즘의 이해를 용이하게하기 위해 균일주기 ​​시점 걸쳐 행동 반응, 희미한 적색 광 조건에서 사용하기에 적합한 알코올 투여 프로토콜을 측정하기 위해 필요하다. 초파리의 경우, 알코올 만성 노출 또는 안정적으로 급성 노출에 대한 증기의 형태로 알코올을 투여 통해 음식 섭취를 통해 관리 할 수있다. 여기에서, 우리는 상실 바로 잡는 반사 (LORR) 1주기 변조의 평가뿐만 아니라 적합한 알코올 관리 프로토콜을 설명진정.

일정한 온도에서 12 시간의 LD주기 다음 실험 질문에 따라 2 ~ 5 일 제어 빛 정권에 전송 : 파리는 12 시간으로 동반된다. 초파리는 다른 이름으로 flybar 장치 에탄올 증기에 노출된다. 이 장치에서 공기의 제어 양의 물과 알코올을 통해 발포되며, 증기는 유리 병 주택 파리에 혼합과 연결됩니다. 파리 분마다 5는 반사 신경을 보상하기 또는 진정되고있다 표시하지 않습니다 수 득점됩니다. 각 시점에 대한 LORR 비율은주기 시간 지점 사이 또는 파리의 변종 사이의 계산 및 비교됩니다. 행동 분석 옵션과 결합 된의 flybar 알코올 배달을 사용하여 알코올 배달의 단순성과 신뢰성이 어두운 조건에서 실시주기 실험의 중요한 이점을 제공합니다.

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프로토콜

의 flybar 1. 총회

이론적 근거 및 개요 :이 시스템은 파리에 알코올 증기의 제어 비율을 관리 할 수​​ 있도록 설계되었습니다. 참고도 1의 개략적 인 개요를 제공의 flybar가 셋업 세 단계 (기류 조립, 알코올 및 물 병의 ​​셋업 및 관측 튜브의 조립체)에서 후술하는 바와 같이. 즉, 안정적인 공기 흐름이 각각 알코올과 물을 통해 버블을 혼합, 4 관찰 유리 병에 투여되는 두 개의 분획으로 분리된다.

  1. 공기 흐름의 조립
    1. 유연한 실리콘 튜브 건물 공기 또는 Y-커넥터를 사용하여 일관성있는 공기 흐름 및 분할을 생성하는 수족관 통풍 장치 하나에 짧은 조각을 연결합니다. 시스템 (4 관측 바이알위한 통상적 1,000 ml / 분)를 통해 공기의 총량을 제어하는​​ 공기 유동 조절기를 제 1 분기를 연결한다.
    2. 제 2 튜브의 빠른 커넥터를 삽입공기 스트림은 교정 기류 영향을주지 않고 실험의 시작 부분에 중단 될 수 있도록. Y-커넥터를 추가하고 공기 조절기로 각 분기 튜브를 연결합니다.
    3. 공기 조절기에 튜브를 연결하고 두 개의 공기 흐름 미터를 연결합니다.
  2. 알코올과 물 병의 셋업
    1. 공기 흐름 미터의 출구에 유연한 튜브를 추가하고 튜브의 각 길이의 끝 부분에 90 ° 굴곡과 얇은 유리 튜브 (1 ㎖ 유리 피펫의 부분)을 삽입합니다. 이것은 물과 알코올 병에 유입 공기의 흐름이 될 것입니다.
    2. 알코올과 물이 가득 병에 그들을 통해 2 개의 구멍에 고무 마개를 놓습니다. 수욕을 사용하여 주위 온도보다 높은 일정한 온도 36 ° C의 병에서 모두 유지. 물 목욕은 27 ° C.에있는 동안 우리의 실험에서, 환경의 객실은, 25 ° C에서 유지
    3. 의 직선 유리 피펫을 삽입IR은 고무 마개를 통해 입구 및 병의 바닥으로부터 약 1cm까지 유체로 연장된다.
    4. 유리의 단부가 안쪽 마개 병의 바닥에 닿을 때까지 고무 마개에 남아있는 구멍에 유리 피펫의 팔꿈치 부분을 삽입한다. 튜브의 또 다른 길이의이 공기 출구를 넣습니다.
    5. Y-커넥터를 이용하여 공기 스트림을 재결합하고 두 구멍 뚫린 고무 마개를 통해 삽입 구부러진 유리 피펫 부와 비어 혼합 플라스크 또는 병을 통해 공기 흐름을 위해 실리콘 튜브의 다른 길이를 사용한다. 출구 혼합 된 공기 흐름을 위해 실리콘 튜브의 다른 길이를 사용합니다.
  3. 관측 유리 병의 조립
    1. 다 관찰 바이알 각 실험에 사용될 수 있도록 공기의 4 또는 8 작은 스트림을 구하는 혼합 플라스크 2-3X 신흥 출구 기류 분할. 관찰 유리 병에 유연한 실리콘 튜브를 연결합니다.
    2. observati을 설정유리 튜브는 알코올 증기에 대한 입구 및 출구를 제공하는 두 개의 구멍을 통해 함유 고무 마개로 밀봉 빈 바이알을 사용하여 바이알에.
    3. 그물 제 유리관의 단부를 커버하고 유연한 플라스틱 배관의 작은 조각을 사용하는 대신에 세공을 유지한다. 는 유리 병의 절반 정도의 길이로 확장 될 때까지 첫 번째 구멍을 통해이 튜브를 삽입합니다. 필요한 경우, 아늑한 적합을 얻기 위해 테프론 테이프를 사용합니다.
    4. 는 고무 마개의 안쪽 가장자리에 닿을 때까지 그물로 덮여 끝 또한 제 2 유리 튜브를 삽입합니다.
    5. 희미한 붉은 빛 조건에서 파리와 대비를 극대화하기 위해 가로로 흰색 종이 조각에 튜브를 놓습니다.
    6. 공기 흐름의 혼합 적절한 분수는 알코올을 통해 발포 및 공기 흐름은 물을 통해 버블. 연속적으로 공기 압력을 모니터하고 공기 흐름의 원하는 혼합을 유지하기 위해 필요에 따라 조정한다.
      참고 : 연속 실행작은 방에있는 병렬 또는 하나의 분석에서 여러 플라이 바의 분석의 알코올 증기의 눈에 띄는 축적으로 이어질 수 있습니다. 잠재적으로 밀폐 된 방에있는 연구원에 영향을 줄 수있는 알코올 증기의 지속적인 방출을 방지하기 위해 적절한 시스템이 적절하게 실험 기간 동안 생성 된 알코올 증기를 제거하는 장소에 배치해야합니다. 알코올 증기를 제거 각각의 병에서 튀어 나온 두 번째 유리 튜브에 튜브 ~ 12 인치 조각을 연결, 그들을 묶어 깔때기 진공 시스템에 직접하십시오. 연구원은 또한 실험 시험 장소는 통풍이 있는지 확인해야합니다.

실험 동물의 2. 준비

이론적 근거 및 개요 : 일반 문화와 파리의 하우징은 데이터의 변동성을 줄일 수 있습니다. 이는 파리가 경험 한 스트레스의 표준화 및 최소화를 통해 달성된다. 그 이유를 들어, 마취 (CO 2 또는 대안) 두리를 사용하지 않습니다NG 프로토콜의 다음 단계 중 하나. 또한, 파리는 학습과 기억 실험 17 등 다른 행동 분석을위한 표준으로 변동성을 최소화하기 위해 실험과 시점에 걸쳐 연령을해야한다.

다른 빛 : 어두운 에탄올에 대한 행동 반응주기 시계의 기능을 조사하는 데 사용할 수 있습니다. 낮의 리듬이 있는지 확인하기 위해, 실험은 특정 Zeitgeber 타임즈 (ZT)에서의 성능을 측정하기 위해 정의 된 LD 사이클 하에서 수행 될 수있다. ZT 12 시간 조명이 12시 12분 시간의 LD 사이클의 전원이 꺼져있는 동안 ZT 0, 새벽을 나타내며 LD 사이클에서의 빛의 시간으로 정의된다. 일정 조건 하에서, 시간주기의 시간 (CT)는 환경 신호, 즉 자유 실행 시간의 부재하에 동물에 대한 시간을 측정하고, 이전의 LD 인입 사이클에 관한 것이다. 야생형 초파리에서 CT는 처음 몇 일에 대해 이전 ZT을 반영일정한 프리 런주기 기간 등의 조건과 리듬에들 ~ 24 시간이다. 어두운주기를 한 후 이전의 실험에 지속적으로 어두운 (DD)로 전송 :주기 변조를 측정하고 행동에 급성 조명 효과를 제거하기 위해, 파리는 빛에 동반된다. 주기 실험은 특정 시간주기 시간 (CT)에서 성능을 측정하는 DD의 두 번째 날에 수행됩니다.

초파리에서 연속 빛 (LL) 조건은 핵심주기 유전자와 불규칙한 운동 활성 18-21과 부정맥 단기 기억 (17)에 의해 입증되는 것과 같이 행동주기 리듬의 혼란의 댐핑 또는 폐지 분자 진동과주기 장애의 원인. 프로토콜은 시간주기의 연구에 대해 최적화되어 있고, 다른 실험을 위해 단순화 될 수있다. 튜브 12 인치 사용하는 작은 빨간 불빛, 모든주기 실험은 희미한 붉은 빛 (주위의 오버 헤드 붉은 빛 <벤치 위에 1 룩스를 사용하여 실시하고 있습니다~ 1 룩스의 빛).

  1. 12시 12분 시간 조명 아래 25 ° C에서 후면 파리 : 어두운 유입 조건 (LD).
  2. 1 일의 일 라이트 기간 말에 갓 eclosed 파리를 수집하고 음식의 끈적 거림을 최소화하기 위해 높은 한천 농도 적은 양의 음식을 포함하는 작은 유리 병을 들고 LD 조건에서 24 시간 동안 저장합니다. 참고 : 건강, 일반적으로 개발 파리가 수집되도록하려면 우화는 문화 병에서 시작 후 첫 번째 일 이내에 수집 된 파리를 사용합니다.
  3. 약 30 (25 ~ 35)의 일괄 처리를 수집 점등 기간의 끝으로 2 일에 흡인기, 신선한 유지 병에 송금을 사용하여 날아갑니다.
  4. 유리 병의 끝으로 파리를 직접 강한 광원을 사용합니다. 행동 관찰은 각 실험의 끝에서 계산 파리의 총 수의 백분율로보고로이 범위 내에서 각 유리 병에 파리의 정확한 수는 중요하지 않다.
  5. 25 ° C에서 FO​​에서 DD 조건에서 파리를 유지이일 R.
  6. 실험의 날, 다른 조건이나 실험 전에 적어도 1 시간 동안 방에있는 실험적인 행동 룸 이외의 인큐베이터에 보관되어있는 모든 파리를 놓습니다. 순응 때문에 온도 나 습도의 변화에​​ 변화를 줄일 수 있습니다.
  7. 행동의주기 변조 여부를 테스트하기 위해 여섯 시간 지점 일 (CT 1, 5, 9, 13, 17, 21)에서 관찰합니다.
  8. 실험 설계의 견고성을 향상시키고 하나의 실험에 변화의 특정을 최소화하기위한 행동 실험의 한 세트에서 여러 시간 지점을 비교합니다. 반대의 명암 일정 두 개의 창업 보육 센터가 유입에 사용하는 경우 예를 들어, CT 1 CT (13)의 관찰을 동시에 얻을 수있다.
    주 : 상기 절차가 일정 어둠주기 상태에서 수행 분석을위한 실험 동물의 준비를 설명한다. 다른 빛 : 암 조건은 시계의 기능을 조사하는 데 사용될 수있다알코올에 대한 행동 반응에. 낮의 리듬이 실험은 특정 Zeitgeber 시간 (ZT)에서 성능을 측정하는 LD 사이클에서 수행 할 수 있는지 확인하십시오. 또한, 프로토콜은 실험 테스트주기 부전 일정한 조명 조건 하에서 발생하는 해충으로 사용될 수있다. 조명 상태에서 보관 파리를 테스트 다른 프로토콜의 행동 분석은 여전히​​ 어두운 조건에서 수행되어야한다. 파리 인해 행동에 빛의 급성 효과를 행동의 변화를 최소화하기 위해 실험 전에 1 시간 동안 어둠에 전송해야합니다.

3. 행동 관찰

이론적 근거 및 개요는 다음 알코올 관리 프로토콜은 희미한 붉은 빛 조건 하에서 관찰에 최적화되어 있습니다. 두 가지 행동을 측정 LORR 및 진정 작용 플라이 만취의 두 가지 점을 나타냅니다. LORR는 손실 O를 통합 만취의 늦은 지점을 나타냅니다F 모터 및 자세 제어, 중독의 진정 대책 반면 늦게 종점. 유전자형 또는주기 변조는 다르게이 두 조치에 영향을 미칠 수 있습니다; 따라서 하나는 모두를 검사 할 수 있습니다. 즉, 플라이가 바이알에로드되어, LORR 또는 진정을 표시 파리의 개수가 주류 기상 노광시 5 분마다, 그리고 실험의 끝에 카운트 파리의 총 수를 획득한다.

  1. 실험을 시작하기 전에 적어도 10 분 동안 시스템 (공기, 물과 알코올 병을 통해 발포)를 통해 공기를 실행하고 기류를 보정하는 시간을 사용한다.
  2. 공기 흐름을 중지하려면 빠른 릴리스를 분리합니다. 유리 병에 파리를로드하고 공기 흐름을 다시 연결하고 타이머를 시작합니다. 참고 : 응답 파리 또는 죽은 파리가 유지 유리 병에 남아있는 경우,이 스트레스 조건을 나타낼 수 있습니다. 일반적으로, 이러한 조건은 지주 바이알에 닫기 파리를 수용하거나 소를 사용하여 식품 찰기를 감소시킴으로써 완화 될 수있다음식 준비하는 동안 LY 높은 한천 농도. 최적의 행동 분석과 실험 사이에 최소한의 변화를 들어, 파리는 이전의 실험에 건강해야한다.
  3. 유지하는 정확한 시간, 알코올 노출의 총 시간을 추적하는 하나의 타이머를 사용하여 5 분 간격을 표시하기 위해 두 번째 카운트 다시 타이머를 사용합니다.
  4. 명암 대비가 증가하고 가시성을 비행, 특히 희미한 붉은 빛의 조건에 유리 병 아래에 흰색 종이를 놓습니다.
  5. 일정한 수준을 유지하기 위해 실험 기간 동안 정기적으로 공기 흐름을 확인합니다. 기류가 안정화되면 일반적으로, 이들은 실험의 길이 동안 안정적으로 유지.
  6. 1 시간 동안 5 분마다 한 번 자신의 복원력 반사를 잃은 파리의 수를 계산합니다. 주류 감도 유전자형 및 유전 배경 사이에서 변화로서, 더 자주 평가를 수행하거나 긴 시간에 대한 실험을 수행하는 것이 바람직 할 수있다.
  7. 유리 병 slightl를 들어 올려표면에서 y 및 유리 병 뒤에 종이를 향해 붉은 빛 손전등의 빛을 연출합니다. 희미한 붉은 빛의 조건에서 모든 실험을 위해 1 룩스보다 더 큰 빛 수준을 유지하기 위해 실험 유리 병에 최소 12 인치의 거리에서 핸드 헬드 빨간색 손전등을 유지합니다.
  8. 모든 실험에 대한 표준을 설정하기 위해 노출계를 사용하여 가벼운 수준을 측정합니다.
  9. 유리 병에 회사 탭을 적용하여 자신의 복원력 반사 손실 약 4 초 이내에 스스로를 잘하지 얼마나 많은 파리 계산 한 파리의 수를 결정합니다. LORR을 표시 파리는 여전히 자신의 다리와 날개를 이동할 수 있지만, 똑바로 자신을 켤 수 없습니다.
  10. 세션의 끝에, 각 바이알에있는 파리의 총 수를 센다.
    참고 : 경우에 따라 하나의 플라이로드는 실험 유리 병에 파리 스토퍼와 측면 사이에 잡힐 수 있습니다. 이는 어둠 속에서 수행되기 때문에, 그것은 쉽게 그래서 총 마비를 계산 할 필요가 발견되지 않을 수 있습니다올바르게 백분율을 계산하는 실험의 끝에 파리의 ER.

또한이 절차는 또한 다른 행동 끝점을 나타내는 파리의 진정 작용을 측정하기 위해 사용될 수있다. 진정 파리가 바로 반사를 잃은 반면, 진정 작용이 큰 알코올 노출이 필요합니다. 행동으로, 진정 작용은 파리가 유리 병에 AA 회사 탭 다음 유리 병에 움직 남아있는 명백한 모터 활동의 완전한 부족에 의해 특징 지어 질 수있다. 진정 작용의 경우, 움직임이 더 다리가 유리 병의 회사 탭의 다음 배달을 흔들며 없습니다로 남아 파리의 수를 계산합니다. 또한, 유리 병은 개별 파리는 여전히 잡는 반​​사를 유지할지 여부를 결정하기 위해 좌우로 압연 할 수 있습니다.

4. 데이터 분석

  1. 각각의 병에 파리의 총 수에 따라 평가마다의 비율 LORR를 결정합니다.
  2. calculati하여주기 시점 또는 균주 사이의 견적의 차이S 자 곡선의 직선 부분에 속하는 각각의 샘플에 대한 50 %의 LORR을, (아래 그림 2 참조) 겨.
  3. 다른 통계 :
    1. 유전자형 사이의 비교가 예정되어있는 경우,이 차이는 (도 3) 사후 검사 현저한 것을 시점의 범위를 결정하기 위하여 반복 측정 ANOVAand를 사용하여 전체의 시간 과정을 분석하는 것이 바람직하다. 이 시험을 위해, 우리는 0.001의 값을 사용하는 것을 선호한다. 이것은 개개의 노광 시간에 차이가 곡선의 기울기의 유전자형의 차이뿐만 아니라, 평가 될 수있다.
    2. 감도의 차이는 그래프의 직선 부분 (그림 4)에서 진정 작용과 같은 특정 반응 알코올 노출의 특정 시간에 결정될 수있다.
    3. 균주 또는주기 시점 간의 차이는 표준 F-통계 및 사후 시험을 이용하여 추정 될 수있다.

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결과

마커로 50 % LORR를 사용하여 알코올 감도의주기 변조.

하루 동안 주류 감도주기 변조를 보여주는 대표적인 예는도 2에 제시된다. LORR는 캔톤-S의 DD의 2 차 하루 동안 여섯 시점에서 측정 한 50 % LORR은 각 시점에 대해 결정 하였다. (: F 5,45 = 7.39, P <0.001, N = 6 ~ 10 시간마다 포인트 ANOVA) 분석은 하루 중 상당한 시간을 효과를 보여 주었다. 피셔의 LSD 테스트 CT 21 대 CT13, CT17 대 CT9 및 CT9 대 CT 21, CT9 대 CT17, CT5 대 CT13, CT5 대 CT5, CT5 대 CT1 사이에 유의 한 차이를 보였다.이 결과는 일치 우리의 이전에 발행 된 결과를 1.

야생 형 및 돌연변이 체의 차이점.

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토론

알코올 남용과 사회에 대한 알코올 중독의 비용은 모두 29 인간과 경제적 비용의 측면에서 엄청난 (30, 31). 초파리 모델로 신속하게 개인의 많은 수의 행동 반응을 조사하는 빠르고 다양한 시스템을 제공하고 같은 광범위 알코올 5,7,32-34 및주기 연구 35-37에 모두 사용하고있다.

여기, 우리는주기 조건에서 성인 파리에 알코올 증기의 제어 관리를위한 간단한 프로토콜을 설명했다.

표준화 된 조건에서 재배 파리는 자신의 복원력 반사를 잃은 파리의 수를 5 분마다 득점하는 동안 1 시간 동안 알코올 증기에 노출되어 있습니다. 여기에 설명 된 프로토콜로 인해 일정 조건에서 유입 및 주택에 대한 추가 요구 사항의주기 실험에 최적화되어 있습니다. 여러 단계를 간소화 할 수 있습니다이러한 적어도 하루 또는 어두운 붉은 빛의 조건 하에서...

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공개 사항

저자는 더 경쟁 재정적 이익이 없다는 것을 선언합니다.

감사의 글

이 연구를위한 자금 조달은 플로리다 주립 대학 의과 대학 및 FSU의 생물 과학부의 지원에서 신경 과학 상에 프로그램에 의해 제공되었다. 추가 자금은 보조금의 에이드 알코올 음료 제조 업체의 연구 기금에 의해 제공되었다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
알코올 190 증거다양한
통풍기지역 애완 동물 상점우리는 Whisper 60
실리콘 튜브 1/8 "VWR408060-0030
120° Y-커넥터VWR82017-256
빠른 분리VWR46600-048
플라스틱 튜브 클램프Bell-art products132250000이 또는 다음
미니어처 공기 조절기McMaster-Carr8727K11이 또는 이전
미니어처 공기 조절기 장착 브래킷McMaster-Carr9891K66
Gilmont 크기 12 유량계VWR29895-242
도구 클립McMaster-Carr1722A43유량계를 고정하기 위해
바이알VWR89092-722
두 개의 구멍이 있는 고무 마개VWR59585-186바이알에 적합
5mm Pyrex 유리관TrikineticsPGT5x65이전 스토퍼
테프론 테이프철물점필요한 경우 스토퍼에 꼭 맞도록 고무
마개VWR59582-122우리의 병에 맞습니다
일회용 유리 피펫VWR53283-768가열로 길이와 구부리기에 맞게 절단
매우 세밀한 나일론 그물VWR다양한
15 와트 전구철물점천장 빨간불
사진 빨간 안전 광 필터오버 헤드 빨간 빛
빨간 빛 미니 손전등 빨간 필터Mag-light
을 사용합니다.에 가장 적합

참고문헌

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