후각 ensheathing 세포 (OECs)는 기본 후각 신경 세포의 성장을 허용 신경 능선 세포입니다. 이 특정 속성은 세포 이식에 사용할 수 있습니다. 우리는 여기에서 후두 신경 손상 모델에서 OECs의 사용을 기반 셀룰러 이식 모델을 제시한다.
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이 논문에서
요약
초록
후각 ensheathing 세포 (OECs)는 기본 후각 신경 세포의 성장과 재성장을 허용 신경 능선 세포입니다. 사실, 기본 후각 시스템은 심지어 성인 동물에서 새로운 신경 세포에 상승을 제공 할 수있는 기능이 특징입니다. 이 특별한 기능은 신경의 유리한 미세 환경을 만들 OECs의 존재에 부분적으로 기인한다. OECs이 속성은 척수 손상 모델에서와 같이 세포의 이식에 사용되었습니다. 말초 신경계는 중추 신경계 이상의 신경 손상 후 재생하는 더 큰 용량을 가지고 있지만, 완전한 섹션은 후두 신경 절개의 얼굴 후 특히 축삭 재성장 동안 misrouting을 유도한다. 특히, 재발 후두 신경 (RLN)의 전체 단면은 성대의 synkinesis의 결과로 탈선 축삭 재성장을 유도한다. 이 특정 모델에서, 우리는 OECs 이식을 효율적으로 축삭의 재성장을 증가 시킨다는 것을 보여 주었다. ve_content "> OECs가 후각 점막 (OM-OECs) 및 후각 전구 (OB-OECs) 모두에 존재하는 여러 소집단으로 구성되어있다. 우리는 여기에서 OECs의 서로 다른 모집단의 사용을 기반으로 세포 이식의 모델을 제시 RLN 부상 모델.이 패러다임을 사용하여이, OB-OECs과 OM-OECs의 차 문화가 RLN의 부와 문합 후 리겔에 이식했다. 두 달 수술 후, 우리는 videolaryngoscopy에 따라 상호 보완적인 분석에 의해 이식 된 동물을 평가, 근전도 (EMG) , 조직 학적 연구. 첫째, videolaryngoscopy 특히 근육 cocontractions 현상이. 그런 다음, EMG 입증 풍요 로움과 근육 활동의 동기를 분석한다. 마지막으로, 톨루이딘 블루 염색에 따라 조직 학적 연구는 번호와 프로파일의 정량화를 허용, 우리는 후두의 기능을 평가할 수 유수의 섬유.
모두 함께, 우리는, 문화, IDE에게 분리하는 방법을 여기에 설명OM와 OB에서 ntify 이식 OECs RLN 섹션 - 문합 방법 축삭 재성장 및 후두 기능에 대한 이러한 이식 세포의 효율성을 평가하고 분석하는 후.
서론
후각 점막 (OM) 중추 신경계 및 말초 신경계 후각 망울 (OB)에서, 일차 후각 시스템은 별개의 두 부분으로 구성된다. 주요 후각 시스템은 포유류 종의 삶을 통해 자기 갱신에 대한 기본 후각 뉴런 (PON)의 용량을 특징으로한다. 이러한 능력으로 인해 OM의 신경 줄기 세포의 존재를 가능하게한다. OM에서 OB에 PON의 성장과 재성장은 후각 ensheathing 세포라는 전문 glial 세포 (OECs)에 의해 촉진된다. OECs 1 OB하는 OM에서 PON의 신경에 유리한 미세 환경을 만드는 신경 능선 세포입니다. 이것에 의해, OECs 세포 2,3의 다른 모집단을 구성하는 OM와 OB에서 찾을 수 있습니다. OECs의 다른 특성은 여러 가지 신경계 병변 패러다임 4 세포 이식을 위해 그들을 사용하는 리드 과학자가있다. 사실, OECs 생산 성장 요인, 홍보, 아교 퇴치 용을 감소오모테 축삭 재성장, 자유롭게 성상 세포의 5,6로 뒤섞다 수 있습니다. 그러나, 이러한 연구의 대부분은 척수 손상 (SCI) 기준, 그들 중 몇몇은 말초 신경 손상 (PNI) 7,8 후 OECs를 사용했습니다.
말초 신경계는 신경 손상 후 재생하는 좋은 능력....
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프로토콜
1. 후각 점막과 후각 전구의 차 문화
- 해부하기 전에
- 44 ㎖를 첨가하여, 50 ㎖에 대한 매체 확인 칼슘없는 둘 베코 변형 이글 / 태아 혈청 (FBS) 5 ㎖ 및 페니실린 / 스트렙토 마이신 1 ㎖로 보충 한 햄스 F12 배지 (DMEM/F12).
- 코트 75cm 폴리-L-라이신 (50 ㎍ / ㎖, 1.5 ㎍ / cm 2), 실온에서 1 시간 2 플라스크.
- PBS 1X로 플라스크를 씻어.
- 최대 1 주 동안 냉장고에 코팅 된 플라스크를 저장합니다.
- 해부
- 안락사의 방법은 기관의 동물 관리 및 사용위원회의 사전 승인과 자격을 갖춘 기술자 만 수행해야합니다.
- 이러한 피셔 쥐와 같은 근친 쥐를 선택합니다.
- 래트는 나트륨 펜토 바르 비탈이나 케타민 / 자일 라진과 같은 마취 주사 가능한 다른 형태의 깊은 마취를 입력 한 것이 확인 된 후에, 그와 R을 참살피부를 emove.
- 전방에서 후방 부분에 두개골을 엽니 다.
- 수막을 방지하기 위해 OB 복용 치료를 제거합니다.
- 같은 쥐에서 비강 sagittaly를 엽니 다.
- O....
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결과
제어와 (과 / 문합) 동물 reinnervated와 그림은 결과 (OM, OB 또는 OM + OB) 수행 세포 이식에 따라 달라질 수 있습니다로 선정되었다.
세포 배양
세포는 플라스틱 표면에 빠르게 밀착 기다란 또는 테이퍼, 삼각형, 다극 또는 방추형되는 셀로 병렬 달해으로 분리되었다 (도 1a 및도 1b). 세포 계측법 분석 시험 관내 흐름의 8 일 후에 P75 양성 세포의 비율, 기본 OB에서 71 %, 및 기본 OM 문화의 13 % (그림 1C 및 1D)를 보여줍니다.
세포 이식 수술
세포는 문합 RLN에 리겔 매체 믹스에 이식된다. RLN의 문합은 11.0 봉합의 한 지점 (그림 2)에 의해 이루어집니다.
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토론
여기에 제시된 기술은 OECs 말초 신경 손상 모델에서 세포 이식을 연구하는 유용한 모델합니다. 세포 배양 프로토콜은 비교적 간단하고 쉽게 행할 수있다. 한편, 수술 절차는 RLN의 특정 섹션 / 문합에서, 경험을 필요로하고 자격을 갖춘 기술자 만 수행해야합니다.
이 프로토콜에 설명 된 절차는 최상의 결과를 얻기 위해 포커스를 중요한 요소를 강조. 첫째, OM의 해리 동안, 우리는 후각과 호흡하지 상피 세포를 얻기 위해주의 절개를 추천합니다. 둘째, RLN의 문합을 위해, 우리는 11.0 봉합 한 점을 수행하는 것이 좋습니다. 셋째, 평가 과정은 모든 동물 사이 마취 동일한 깊이가 매우 중요하다. 특히, 깊은 마취 videolaryngoscopy 동안 성대의 움직임의 크기를 줄일 수 있습니다. 우리는 R 추천동물의 질식을 방지하기 위해 가능한 한 빨리 후두경을 emoving. EMG 촬영 중에는 인해 PCA 근육의 크기에 우리는주의 깊게 단극 바늘 전극을 배치하는 것이 좋습니.......
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공개 사항
저자가 공개하는 게 없다.
감사의 글
저자는 원고를 편집하기위한 재정적 지원을 위해 박사 Fanie 나베 - 하이더에 ADIR (소재지 보조 Insuffisants Respiratoires à 보좌관)와 매그 드 난 Avenir에서 감사드립니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| DMEM/F12 | Invitrogen | E3521T | |
| FBS | Invitrogen | E3387M | |
| 페니실린/스트렙토마이신 | Invitrogen | 1152-8876 | |
| HBSS | Invitrogen | M3467Y | |
| Trypsin-EDTA | Invitrogen | M3513P | |
| Cacodylate | Merck | 1.03256.0100 | |
| DDSA | Biovalley | 00563-450 | |
| MNA | Biovalley | 00886-450 | |
| BDMA | Biovalley | 00141-100 | |
| Polybed 812 | Biovalley | 08791-500 | |
| PE 안티-마우스 | BD Bioscience | 550589 | |
| Matrigel GFR | BD Bioscience | 356231 | |
| Collagenase A | Roche | 10103586001 | |
| Mouse anti P75 | Chemicon | MAB 365 | |
| 11.0 Wire | Ethicon | FG 2881 | |
| Toluidine Blue | Ral Diagnostics | 361590-0025 | |
| 원심분리기 | Sigma | Sigma 2-16PK | |
| 인큐베이터 | Thermo Scientific | ||
| 층류 후드 | 더 빠른 | BH-EN 2003 S | |
| 유세포 분석기 | BD Bioscience | FACSCalibur | |
| Microscope | Zeiss | ||
| Videolaryngoscope | Karl Storz Endoskope | Telecam SL NLSC 20212120 | |
| Acquisition system | AD Instruments | Powerlab system | |
| 피라미토미 초박절개술 시스템 | 라이카 | Ultracut S | |
| 이미지 분석 시스템 | Explora Nova | Mercator |
참고문헌
- Barraud, P., et al. Neural crest origin of olfactory ensheathing glia. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 107, 21040-21045 (2010).
- Guerout, N., et al. Comparative gene expression profiling of olfactory ensheathing cells from olfactory bul....
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재인쇄 및 허가
